QuEChERS结合UPLC-M S/M S检测血液中苯丙胺类及其相关9种物质

对QuEChERS前处理方法从提取、分离、净化等方面进行优化以减弱样本中的基质效应,提高灵敏度;使用提取试剂(含0.1%甲酸的乙腈:甲醇=70:30,V/V)进行提取,加入无水硫酸镁、硼酸钠、研磨珠进行提取分离,使用混合净化剂(十八烷基硅烷(C18):乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)=1:2,m/m)进行净化,UPLC-MS/MS测定,外标法定量。结果表明:在优化条件下,苯丙胺类及其相关9种物质的色谱峰分离良好,且各标准化合物的线性相关系数均大于0.991,检出限(LODs)为0.3~1.0 ng/mL,定量限(LOQs)均为2.5 ng/mL;血液添加标准品样本在低(20 ng/mL)、中(100 ng/mL)、高(400 ng/mL)3个浓度的加标回收率为80.1%~103.1%,精密度相对标准偏差(RSD)为1.5%~8.6%;临床4份检测样本中有3份检出苯丙胺类阳性,准确率为71.5%~99.1%。所建立的QuEChERS方法与UPLC-MS/MS结合的分析方法可应用于血液样本中苯丙胺类及其相关9种药物的同时检测分析。     

金纳米粒子与抗体蛋白相互作用的光谱研究

本文运用透射电镜(TEM)、Zeta电位测量、紫外-可见吸收光谱(UV-Vis)、荧光光谱以及衰减全反射傅立叶变换红外光谱(ATR-FTIR)等技术手段,研究了免疫球蛋白G(IgG)与金纳米粒子的相互作用。结果表明,所制备的金纳米粒子呈均一分散的球形,抗体蛋白能够与金纳米粒子形成稳定的复合物。内源荧光光谱表明金纳米粒子对抗体蛋白的内源荧光有显著的静态猝灭,猝灭常数KSV=4.25×109 L·mol-1,同时金纳米粒子与抗体蛋白间有较强的作用,结合常数K=1.95×1014,结合位点数n为1.49。外源荧光光谱表明金纳米粒子与抗体蛋白之间的作用力主要是疏水相互作用。ATR-FTIR分析抗体蛋白与金纳米粒子作用前后蛋白二级结构的变化,结果显示,抗体蛋白有序结构含量降低,构象朝着更加松散的状态变化。     

集成式微流控液滴数字化等温扩增用于尿路感染细菌快速检测

数字化核酸分析技术具有不依赖标准品的绝对定量分析能力,因而有利于实现病原分子的快速诊断。现有的数字化核酸分析方法通常采用离线式分析,操作繁琐且耗时较长,难以满足医疗资源有限情况下的检测需求。本研究建立了一种集成式微流控液滴数字化等温扩增方法。采用的微流控芯片集成了序列液滴核酸提取、负压驱动液滴生成和液滴环介导等温扩增(LAMP)功能,可采用集成化方式在1.5 h内完成细菌核酸数字化分析。此微流控芯片对大肠埃希氏菌的核酸提取效率为93.68%±32.38%;使用注射器负压驱动可在4 min内生成约20000个液滴,液滴体积的相对标准偏差(RSD)小于10%;液滴数字化LAMP检测动态范围跨越4个数量级(2.36×10⁴～1.71×10⁷ CFU/mL)。利用本方法检测尿路感染临床标本(n=13)中的大肠埃希菌,与传统定量培养方法结果相比较,本方法的检测灵敏度和特异性均为100%(K_appa=1,p<0.01)。本方法具有操作简便、定量分析准确的优点,为病原体的现场快速检测提供了一种有力的工具。