快速高分离度液相色谱/质谱方法筛选组织蛋白酶B的抑制剂

1引言组织蛋白酶B(CB)是溶酶体内半胱氨酸蛋白水解酶,属于木瓜蛋白酶家族,其特异性底物为Z-Arg-Arg-7-氨基-4-甲基香豆素[1],CB催化底物肽键断裂生成7-氨基-4-甲基香豆素。近年来的研究表明,CB在肿瘤的发展中起作用的一类关键酶[2],CB通过多种机制促进血管形成,从而促进肿瘤生长,同时降解基底膜主要成分以及激活胶原酶、尿激酶等其它蛋白酶发生协同作用,使肿瘤易侵袭、转移和扩散。在肿瘤组织中还发现CB与CB抑制剂平衡作用也参与肿瘤的发     

三元非对映异构体复合物的直接实验证据及其在对映体手性分离中的作用

以含L-苯丙氨酸铜配位络合物的溶液作为手性流动相, 采用反相高效液相色谱法拆分了非衍生苯甘氨酸对映体, 使用质谱对拆分组分进行了结构鉴定, 得到了拆分组分的化学结构, 用量子化学计算预测了该结构的最稳定构象. 质谱实验结果表明, 拆分组分是一对铜混合配体复合物离子, 其中的一个配体是提供手性环境的流动相添加物(L-苯丙氨酸), 另一配体是待拆分物质的某一构型对映体, 这对铜混合配体复合物离子本质上属于非对映异构体. 在色谱分离实验中还考察了手性流动相pH值、甲醇含量以及L-苯丙氨酸与Cu²⁺ 的摩尔比等因素对分离效果的影响.     

以苯丙氨酸为例说明中心离子在手性识别中的作用

采用手性冠醚（＋）-2,3,11,12-四羧基-18-冠-6（简写为18-C-6-TCA）作为手性参照物,分别以Cu2＋和H＋为中心离子,对苯丙氨酸（Phe）对映体进行手性识别研究.通过离子键合二聚体[Cu2＋（18-C-6-TCA）（Phe）-H＋]＋和（18-C-6-TCA）（Phe）H＋的碰撞诱导解离（CID）反应,总结了上述非对映异构体离子的裂解特征并以其初级产物离子与母离子的相对丰度为依据对Phe对映体进行手性识别.通过实验发现,作为过渡金属代表的Cu2＋离子对多齿型配体具有较强的配合能力,Cu2＋与Phe对映体形成的非对映异构离子[Cu2＋（18-C-6-TCA）（Phe）-H＋]＋离子的稳定性差异较大,手性识别能力较强.同时,[Cu2＋（18-C-6-TCA）（Phe）-H＋]＋的CID反应只产生[Cu2＋（18-C-6-TCA）-H＋]＋产物离子,而（18-C-6-TCA）（Phe）H＋的CID反应除了产生质子化的18-C-6-TCA以外,还有冠醚离子的次级碎片产物.这说明18-C-6-TCA、Phe与Cu2＋的键合情况以及亲和势都与H＋的情形完全不同.本文将结合量化计算对这一点进行详细讨论.     

甲基化辅助实时直接分析电离的机理研究

实时直接分析电离源(DART)已经广泛应用于固体、液体和气体样品的快速检测. 在使用DART对低挥发性化合物进行分析时, 样品衍生化是十分重要的. 四甲基氢氧化铵(TMAH)是强的瞬时甲基化试剂, 常用于GC-MS的分析中. 以人参皂苷及人参寡糖为例, 研究了它们在TMAH的辅助下在DART中发生甲基化及电离的过程, 并从凝聚相和气相的角度对电离过程中的甲基化机理进行了研究. 人参皂苷主要发生不完全和全甲基化, 人参寡糖的甲基化则随着糖链的增长以及羟基的增多由全甲基化主导转变为过甲基化主导. 结果表明, 凝聚相和气相的共同作用是质谱检测到甲基化及过甲基化样品分子的根本原因.