Time-resolved fluorescence analysis of the mobile flavin cofactor in p -hydroxybenzoate hydroxylase

Conformational heterogeneity of the FAD cofactor in p-hydroxybenzoate hydroxylase (PHBH) was investigated with time-resolved polarized flavin fluorescence. For binary enzyme/substrate (analogue) complexes of wild-type PHBH and Tyr222 mutants, crystallographic studies have revealed two distinct flavin conformations; the ‘in’ conformation with the isoalloxazine ring located in the active site, and the ‘out’ conformation with the isoalloxazine ring disposed towards the protein surface. Fluorescence-lifetime analysis of these complexes revealed similar lifetime distributions for the ‘in’ and ‘out’ conformations. The reason for this is twofold. First, the active site of PHBH contains various potential fluorescence-quenching sites close to the flavin. Fluorescence analysis of uncomplexed PHBH Y222V and Y222A showed that Tyr222 is responsible for picosecond fluorescence quenching free enzyme. In addition, other potential quenching sites, including a tryptophan and two tyrosines involved in substrate binding, are located nearby. Since the shortest distance between these quenching sites and the isoalloxazine ring differs only little on average, these aromatic residues are likely to contribute to fluorescence quenching. Second, the effect of flavin conformation on the fluorescence lifetime distribution is blurred by binding of the aromatic substrates: saturation with aromatic substrates induces highly efficient fluorescence quenching. The flavin conformation is therefore only reflected in the small relative contributions of the longer lifetimes.     

酶法制备微孔淀粉的工艺研究

使用α-淀粉酶与糖化酶复合制备多孔淀粉,探讨反应温度、反应时间、pH值和酶用量等条件的影响,并且通过正交实验得出最佳工艺条件,当反应温度为50℃,pH值为6.0,反应时间为12h,酶用量为1.0%时,吸附率与得率的综合评定最高.     

涤纶的酶法改性研究进展

从涤纶纤维自身的特性和其改性研究的现状、理想的涤纶表面改性应满足的要求以及酶在纺织工业中的应用现状等方面出发,综述了涤纶纤维及其织物酶法改性的背景和国内外研究现状,介绍了涤纶酶法改性研究中所用的酶以及酶的筛选方法,探讨了涤纶酶法改性研究中存在的若干问题,并对涤纶酶法改性的前景做了展望.     

污水中氧化铁鞘细菌的分离及其酶学特性研究

采用试管静止富集培养及生态模拟富集培养,成功地从100份水样中分离到32株鞘细菌.利用Winogradsky液体试管法和摇瓶法进行氧化铁鞘细菌的快速筛选,从中筛选出1株氧化活性最高的菌株FC9901.对铁氧化酶特性进行了初步研究,该酶作用的最适pH和最适温度分别为7.5和30℃.金属离子Ca2 、Mg2 、Zn2 对氧化活性有激活和稳定作用;Cu2 、Hg2 、Al3 则抑制酶的活性;Fe2 、K 、Na 对酶活性影响不明显.     

铝对大豆质膜透性和POD、CAT活性的影响

利用土培方式,研究了铝对9703、浙春2号和浙春3号大豆叶片的质膜透性、MDA(丙二醛)含量及POD(过氧化物酶)和CAT(过氧化氢酶)活性的影响.结果表明,在铝胁迫下,大豆叶片的质膜透性增大,MDA含量增加,CAT、POD的活性在813.5 mg/kg 铝处理时上升,而在较高浓度铝处理时下降.     

白鹭和牛背鹭肠蛋白酶理化特性的研究

对白鹭(Egretta garzetta)和牛背鹭(Bubulcus ibis)雏鸟肠蛋白酶进行研究.两种鹭类的肠蛋白酶存在着许多共同的理化特性,包括分子量(39.4 kD)、等电点(5.4~7.5)、耐热性、抗冻融能力、最适温度(65℃)、最适 pH(9.0 和 8.6)等,而且两种鹭类的肠道蛋白酶对重金属离子Ag+和Hg2+、EDTA、或 Ca2+ 和 Mg2+ 的影响也表现出相同的反应.白鹭和牛背鹭的肠蛋白酶比活力存在着不显著的差异(1.63±0.62SE和 2.21±0.80SE)( 'P>0.05).白鹭和牛背鹭肠道蛋白酶为中性蛋白酶.活性中心的研究表明:两种鹭类的肠道蛋白酶的活性中心都含有色氨酸和丝氨酸残基,但是不含精氨酸、半胱氨酸和氨基,因此,主要为丝氨酸蛋白酶.     

酶化学修饰的研究进展

化学修饰已成为改进酶理化性质和生物活性的有效方法 ,引起了人们高度的重视 .本文主要介绍酶化学修饰的目的、意义、方法 ,以及修饰剂的选择、种类 ,评述了酶化学修饰领域的主要进展、研究概况及其应用     

构建基因工程菌生产1,3-丙二醇的研究进展

综述了近几年基因工程菌生产1，3-PD的研究成果，包括其关键酶、策略及基因工程菌生产1，3-PD的现状等，探讨了利用基因工程菌生产1，3-PD的发展前景．     

野油菜黄单胞菌8004胞外酶及多糖合成正负调控基因在X.c.NK01菌中功能初探

利用野油菜黄单胞菌（Xanthomonascompestris）8004正、负调控胞外酶及多糖合成的基因片断分别经三亲本接合方法导入黄单胞菌NK01抗性突变株中，测定接合于四种胞外酶活力和多糖合成能力，确定该正、负调控基因对NK01的作用．结果表明，负调控基因作用明显，使NK01胞外多糖及胞外酶产量显著降低，正调控基因未见明显的胞外酶及多糖合成的增强作用．本文并对正、负调控基因的作用方式作了初步探讨．     

应用土壤酶活性评价草原石油污染的初步研究

通过相关和曲线拟合技术探讨了土壤酶活性与土壤石油污染强度的相关关系，结果表明，转化酶，蛋白酶和磷酸酶的活性与土壤含油量呈显负相关，多酚氧化酶的活性与土壤含油量呈显正相关，在此基础上，以土壤酶活性和土壤含油量为变量，采用Ｆｉｓｈｅｒ线性判别分析对重度，中度和轻度污染的几组数据进行了处理，都获得了很发的结果，最后，初步提出了评价草原土壤石油污染强度的指标和范围。