金属离子竞争结合钙调素的电化学行为研究

为了探讨金属离子与Ca~(2+)对钙调素(CaM)的竞争结合作用,在pH值为6.5含2mmol/L[Fe(CN)6]3-/4-的0.15 mol/L的NaCl溶液中,用交流阻抗法研究了金属离子如Ca~(2+),Cd~(2+),Al~(3+),Fe~(3+)结合及竞争结合钙调素的电化学行为。结果表明:金属离子与CaM的结合能力可以通过溶液中[Fe(CN)_6]~(3-/4-)在钙调素自组装膜修饰金电极上的电化学反应电阻的变化来判断,Ca~(2+),Cd~(2+)和Al ~(3+)都能与CaM结合,Fe~(3+)不能与CaM结合,且Ca~(2+)与CaM结合能力要比Al 3+强;Ca~(2+)在CaM上的结合位点与Cd~(2+)相同,与Al~(3+)不同。交流阻抗法为研究金属离子与CaM的竞争结合行为提供了一个新方法。     

A Pyrrolysine Analogue for Protein Click Chemistry

Ignoring the STOP sign : A pyrrolysine analogue bearing a terminal alkyne was site‐specifically incorporated into recombinant calmodulin (CaM) through a UAG codon. The resulting protein was labeled with an azide‐containing dye using a copper(I)‐catalyzed click reaction. Subsequent application of an orthogonal cysteine tagging method yielded a CaM labeled with two distinct fluorophores that enabled its study by FRET spectroscopy.

     

Distribution of separations between groups in an engineered calmodulin

An engineered calmodulin (VU-9-CaM) has been prepared in which a tryptophan group is present at position 99 and a tyrosine at position 138. The tyrosine was converted to nitrotyrosine. Timedomain dynamic fluorescence measurements were made of energy transfer from the tryptophan donor to the nitrotyrosine acceptor. These were analyzed to yield the parameters characterizing the distribution of separations between the two groups, which are located on Ca²⁺-binding domains III and IV. Their mean separation is in reasonable agreement with the crystallographic value.     

工程菌表达马铃薯钙调素(PCM 6)的抗体制备及鉴定

PCM6是马铃薯钙调素亚型中与其他植物钙调素在氨基酸序列上最为保守的一种，利用大肠杆菌表达系统，表达并纯化了这种蛋白，以纯化的重组马铃薯CaM(PCM6）蛋白为抗原，免疫新西兰兔，获得了高效价（1：16000）抗体，免疫印迹检测表明，制备的抗体与植物钙调素有特异性的免疫交叉反应。     

白芷细胞外CaM结合位点的扫描电镜定位研究

利用胶体金标记的具有生物活性的钙调素（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）,对白芷愈伤组织培养细胞胞外钙调素结合位点进行了扫描电镜定位,发现白芷愈伤组织培养细胞表面有不同密度的金颗粒,证明其细胞表面存在着ＣａＭ结合位点．     

钙调素对肿瘤细胞周期的调节作用

利用钙调素拮抗剂三氟拉嗪(TFP)研究了钙调素对HeLa细胞周期进程的影响,TFP处理的细胞被阻抑在G_1/S,使S期群体及DNA合成下降,G_2期群体增加.有丝分裂(M)前期细胞减少,中期细胞增加.结果表明钙调素对G_1至S期.G_2至M期和M中期至M后期具有调节作用,钙调素通过细胞周期中上述3个位点对肿瘤细胞增殖进行调节.     

皮肤特异表达钙调素类蛋白研究进展

钙调素是广泛存在于各种动植物细胞的信号转导分子,近年在皮肤中发现了一些钙调素类蛋白,其分布、特征、功能都与钙调素不同,在表皮的分化发育中发挥重要作用。本文就此作一简单介绍。     

拟南芥钙调素结合蛋白cDNA克隆的分离和初步鉴定

以生物紊标记的钙调素为探针,从拟南芥（Arabidopsis thaliana）λZAP Ⅱ cDNA表达文库中分离到9个阳性克隆．融合蛋白经CaM-gel overlay分析,其中Y1编码的融合蛋白在1mmol／L Ca^2＋存在下与胶体金标记的钙调紊有明显结合．序列测定结果显示其外源片段全长为726bp,含有一个476bp的开放阅读框．GenBank数据库搜索及同源性分析结果表明该序列为拟南芥1号染色体基因组5661～7013序列,编码一未知蛋白,但与真核生物翻译起始因子5A（elF5A）具87％的同源性,并具相似的分子量、等电点和相同的保守序列．与eIF-5A的结构特征比较,可初步确定Y1编码的蛋白为真核生物翻译起始因子5A家族中的新成员．即拟南芥1号染色体5661～7013序列为一尚未报道的翻译起始因子基因＋蛋白质二级结构预测其c端122～135氨基酸残基处有一双亲α-螺旋结构,这一结构与大多数钙调素结合蛋白中的钙调素结合位点的结构特征一致．该序列已提交NCBI Banklt数据库,登录号为AF492850．     

钙调素膜在不同pH值溶液中的循环伏安行为

自组装膜;钙调素膜在不同pH值溶液中的循环伏安行为