一种快捷有效的构建cDNA文库的方法

构建cDNA文库是研究基因组功能基因一种有效的手段，传统的建库方法通常需要在双链cDNA两端分别加上带限制性酶切位点的接头序列，通过酶切使之产生与质粒匹配的粘性末端，然后与质粒连接构成文库。本文介绍一种简单而且不需要核酸内切酶的构建cDNA文库的方法。该方法的主要步骤包括：（1）通过反转录合成cDNA第一条链，通过置换底物的方式在cDNA3’末端合成接头序列。（2）利用cDNA两端的接头引物，通过TaqDNA合成酶PER扩增合成cDNA第二条链。（3）将PCR产生的双链cDNA直接与T-载体连接。（4）将连接物转化大肠杆菌，得到cDNA文库。利用本方法，我们成功构建红树植物红海榄的cDNA文库。PCR结果显示插入的片段分布在O．5～3．0kb之间，大部分cDNA的长度在500—1000bp之间，表明cDNA具有较好的完整性。本方法具有操作简单、高效率、低成本、RNA模板需要量少的特点，而且适用于任何高等生物RNA样品。     

基于正交设计的免疫克隆遗传算法

针对遗传算法存在早熟及局部搜索能力弱等问题,提出一种基于正交设计的免疫克隆遗传算法,将正交实验设计原理、免疫克隆理论以及标准遗传算法有效结合起来,增强算法的收敛速度和搜索精度。对算法进行了验证,表明该算法求解精度高出几个数量级,寻找到全局最优解的次数明显增加。     

Purification and Characterization of Protein Tyrosine Phosphatase MEG1 and Preparation of Anti-PTPMEG1 Antibody

<正>PTPMEG1 is an intracellular protein tyrosine phosphatase(PTP),which contains FERM and PDZ domains. This study focuses our attention on the expression,purification and characterization of catalytic domain of PTPMEG1(△MEG1) and preparation of its polyclonal antibody.A cDNA fragment encoding△MEG1 protein(amino acid residues 643—926) was amplified by PCR and then cloned into the pT7-7 vector.Both soluble and insoluble recombinant△MEG1 proteins were observed after induction by IPTG.Soluble△MEG1 was purified via two chromatographic steps,and the purified enzyme was characterized.With para-nitrophenylphosphate(pNPP) as a substrate,△MEG1 exhibited typical enzymatic characteristics of classic PTPs and classical Michaelis-Menten kinetics.Insoluble△MEG1,which was mainly distributed in the inclusion body of E.coli cells extracts,was purified by preparative electrophoresis gel for the preparation of the polyclonal antibody.A rabbit was immunized with△MEG1 purified by preparative electrophoresis to generate anti-△MEG1 antibody.Anti-serum was collected on 28th day after initial injection and purified via affinity chromatography.The purified polyconal antibody displayed a satisfactory titer and sensitivity.     

拟穴青蟹抗菌肽CrusSp基因克隆表达及抑菌活性分析

从拟穴青蟹血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增编码CrusSp成熟肽的cDNA序列,克隆至pET-32a(+)表达载体中,转化至王coli OrigamiTM(DE3)中表达CrusSp蛋白,通过Ni2+亲和层析柱纯化获得CrusSp蛋白,表达出的CrusSp蛋白相对分子量约10.27 ku,等电点为8.54,滤纸片扩散法结果显示CrusSp蛋白抑制绿色木霉.     

内蒙古大学克隆成功国内首例绒山羊

内蒙古大学实验动物中心长江学者李光鹏带领研究团队成功克隆国内首例绒山羊。截至目前，克隆绒山羊已经出生44天，体重达到10．8公斤。     

Scheme for the implementation of 1→3 optimal phase-covariant quantum cloning in ion-trap systems

This paper proposes a scheme for the implementation of 1→ 3 optimal phase-covariant quantum cloning with trapped ions. In the present protocol, the required time for the whole procedure is short due to the resonant interaction, which is important in view of decoherence. Furthermore, the scheme is feasible based on current technologies.     

抗牙周病厌氧菌（Bg）单链抗体基因的构建与表达

从牙周病厌氧菌（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株出发，通过基因工程方法──ＰＣＲ技术，调出其抗体的重链和轻链基因可变区序列，体外重组后得到单链抗体ＳｃＦｖ（ｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎｆｒａｇｍｅｎｔｖａｒｉａｂｌｅ）片段，克隆到了ｐＣＡＮＴＡＢ５载体上，在ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＴＧｌ中得到了成功表达。     

斜纹夜蛾NPV多角体基因的克隆和部分测序

本文对ＳＩＮＰＶ基因组作了酶解分析，测得其基因组大小为１４５ｋｂ，并用双酶法确定了ＳＩＮＰＶ基因组的ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ物理图谱。以含ＡｃＮＰＶ多角体基因的质粒ｐＡＣ－Ⅰ的ＳａｌＩ－Ｃ片段为探针，对ＳＩＮＰＶＤＮＡ酶切片段ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交结果，初步判断多角体基因定位于ＰｓｔＩ－Ｂ／Ｃ／Ｄ片段、ＢｇｌⅡ－Ｃ／Ｄ片段、ＢａｍＨＩ－Ｂ／Ｃ片段和ＥｃｏＲＩ－Ａ／Ｂ片段上，且ＳＩＮＰＶ与ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因有６４％的同源性，而以大肠仟菌质粒ｐＵＣ１９为载体对ＳＩＮＰＶ的多角体基因试克隆，得到带有ＢｇｌⅡ－ＰｓｔⅠ双酶切片段的２个克隆子。对这两个杂交阳性克隆子之一的核苷酸序列测定，表明插入片段与ＢｍＮＰＶ多角体基因上游序列亦有一定同源性。     

丝状蓝藻与大肠肝菌之间杂合质粒的构建与克隆

丝状蓝藻Ｐｌｅｃｔｏｎｅｍａ ｂｏｒｙａｎｕｍ的ｐＰｂ１经ＨｐａⅡ酶酶切与ＡｃｃＩ酶酶切的ｐＵＣ１３构成杂合质粒，杂合质粒克隆到Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９，频率为３．４％．转化进Ｅ．ＣｏｌｉＪＭ１０９的杂合粒，用ＥｃｏＲＩ和ＨｐａＩ酶切后得到证实。杂合质粒转化到新制备的Ｐ。ｂｏｒｙａｎｕｍ原生质球或丝状体后，再生的藻体表现高于原来两倍以上的ＡＰ抗性。利用ＡＰ每感的Ｅ．ｃｏｌｉ平板培养，证实了转化入藻体     

鲢（Hypophthalmichthys molitrix）IL-10基因的克隆及表达分析

白细胞介素10（IL-10）是一种作用广泛的抗炎细胞因子，主要功能是限制和最终终止炎症反应. 用RACE （rapid amplification of cDNA ends）-PCR方法扩增出鲢白细胞介素10（IL-10）的cDNA，其全长为1248nt，包含5′非编码区156nt，3′非编码区552nt，开放阅读框540nt．鲢IL-10的开放阅读框编码179个氨基酸，其中包含构成两对二硫键的4个保守半胱氨酸．RT-PCR结果显示鲢IL-10mRNA主要在脾脏、鳃、头肾和肌肉中表达．将鲢IL-10完整开放阅读框克隆到原核融合表达载体pET-32a-c（+）上，转入大肠杆菌Rosetta-gami（DE₃） 内进行表达，经SDS-PAGE电泳后显示重组融合蛋白在分子量约39ku处有明显表达带，与预期分子量大小一致，且主要以不可溶的包涵体形式存在．变性条件下利用His·Bind树脂成功纯化了融合蛋白，将其免疫家兔，获得兔多克隆抗鲢IL-10抗体，Western blot检测到兔多克隆抗鲢IL-10抗体可有效地与重组蛋白结合．这些结果为进一步研究IL-10的功能奠定了基础．