外源基因在大肠杆菌中表达的优化

大肠杆菌已经被广泛地应用于表达各种外源基因,但基因的表达受多种因素的影响,现就各种影响因素综述了外源基因表达的优化策略,这将有助于采取有效方法提高外源基因在大肠杆菌中的表达效率.     

转入γIFN基因烟草的初步研究

以ＴＡ克隆法构建中间载体ＰＵＣＦ１,再构建γ干扰素基因表达载体ＰＢＩＦ１。通过农村菌转化导入烟草叶圆片外植体。经４轮梯度卡那霉素递增筛选,获得抗性植株。经ＰＣＲ证实其中部分植株已将人γ干扰素基因片段整合到烟草基因组中,从而为成功地建立烟草植物反应器生产人γ干扰素基因奠定了基础。     

人16周胎儿脑cDNA文库的构建及鉴定

本文从 16周的胎儿脑中抽提总 m RNA,经过一系列酶促反应后合成 c DNA,分级分离柱除去小片段 DNA后克隆到λgt10载体中 ,转染宿主菌 C60 0 hfl,文库包装效率为 4 .2× 10 6pfu/μg,得到的原始克隆数为 2 .1× 10 6,c DNA插入片段平均大于 1.2 kpb.根据已知序列设计引物 ,从这个 c DNA文库中扩增出血管内皮生长因子 ( VEGF)的全长 c DNA基因     

凋亡抑制基因P35对杆状病毒增殖的影响

以野生型苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographacali for nica Nuclear Polyhedrosis Virus,Ac     

凋亡抑制基因p35对杆状病毒增殖的影响

以野生型苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒和多角体基因缺失的ＡｃＮＰＶ分别感染Ｓｆ９－３５细胞,研究了ｐ３５的稳定表达对杆状病毒增殖的影响。     

融合表面抗SA-28基因在Pichia Pastoris酵母系统中的表达

将乙肝病毒表面抗原S-preS1融合基因SA-28插入质粒载体pAO815的EcoR Ⅰ位点中,将其置于Pichia Pastoris酵母AOX1启动子控制下.利用电转化技术,融合基因表达单元连同HIS4基因被整合到受体菌SMD1168基因组中.对得到的工程菌进行发酵和表达产物的研究表明:SA-28基因在该系统中的表达受甲醇诱导调控;SA-28融合基因的表达产物具有S和PreS1的双重抗原性.用CsC1密度梯度离心法纯化了表达产物,融合抗原活性峰位于密度为1.19 mg/cm3的区带.     

脑表达的X连锁基因的克隆、染色体定位和初步功能研究

通过筛选人18周胎脑cDNA文库,得到一条与Bexl和Bex2在高度同源性的基因,经HUGO／GDB人类基因命名委员会的同意命名为BEX1,Northern杂交发现该基因在脑和胰腺中高表达,在心脏,胎盘,肝脏和肾脏中有较低表达,而在脑和骨骼肌中没有表达,用斯坦福大学G3辐射杂交系将BEX1定位于Xq22上的Marker DXS990和DXS 1059之间,以BEX1作为杂交探针小对小鼠的原位杂交中发现BEX1的小鼠同源基因在小鼠的生精小管中有表达,而在间质组织中没有表达,在成年小鼠（出生10周）中BEX1同源基因在生精小管的外周细胞中表达,在中层细胞（包括次级精母细胞和精子细胞）和内层细胞（主要由精子组成）中没有表达,而在6周的处于青春期的小鼠中,BEX1的同源基因在整个生精小管中都有表达,但外层细胞的表达比中层和内层细胞的表达要高得多,而在3周的幼年小鼠中,BEX1的同源基因仅有微量表达,所以BEX1在小鼠中的同源基因在青春期表达上升,生精小管成熟后表达维持在一定的水平,这提示BEX1基因可能参与精子发生及生精小管发育的过程。     

人类抗砷相关基因hARRG全长cDNA的克隆和在E.coli中表达

通过对构建的人胎脑cDNA文库进行大规模测序,发现一条人类新基因,序列与仓鼠asr2序列高度同源,达88％,命名为人类抗砷相关基因（human arsenic resistance related gene.hARRG),hARRG与抗砷基因相关序列ARS2（AF082871）几乎完全全同源,仅比它短253bp,hARRG并不是全长基因而仅是一个cDNA片段,为了获得hARRG全长cDNA,运用Northern blot电子RACE和5－SMART－RACE的方法克隆了一条2999bp 的hARRG全长cDNA,通过Unigene染色体定位于7q21.3,经过生物信息学分析发现,该cDNA有完整的读码框,编码一个788个氨基酸的蛋白,预计分子质量为89．2ku,并在大肠杆菌中获得了成功表达。     

水稻基因组中U2snRNA基因连锁的分析

根据Ｕ２ｎＲＮＡ基因的保守性和结构特点设计引物,通过ＰＣＲ法扩增Ｕ２ｓｎＲＮＡ连锁基因间区的ＤＮＡ片段并进行顺序分析,证实在水稻中至少存在一组Ｕ２ｓｎＲＮＡ连锁基因。对水稻总ＤＮＡ的ＰＣＲ分析结果表明,水稻中可能还存在其他形式的连锁基因。ＰＣＲ方法可以有效地应用于结构保守基因的连锁分析中。     

Ran结合蛋白RanBP1的同源基因M3的克隆与功能分析

以Ｒａｎ结合蛋白ＲａｎＢＰ１的保守区域作为探针,低严谨条件下杂交筛人视网膜ｃＤＮＡ文库,得到阳性克隆Ｍ３,它与鼠ｚｈｘ－１基因高度同源。ＲＨ作图将其定位于８ｑ２４．１￣ｑ２４．３。拼接ＥＳＴ序列并填补缺口,得到Ｍ３ ｃＤＮＡ全长４９３４ｂｐ,与Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ得到的主要转录本长度一致。此ｃＤＮＡ全序列包括２６２２ｂｐ开放阅读框,编码８７３氨基酸,含有２种翻译调控元件ｕＵＡＧ和ＴＴＡＴＴＴ