SARS CoV内对照RNA病毒样颗粒的构建和表达

在SARS-CoV的核酸检测方法中,由于普遍缺乏安全、稳定、特异的内对照,而不能对样品处理、反转录、扩增以及定量检测实施全程监控。构建的病毒样核蛋白颗粒内对照,能够对SARS-CoV临床检测实施监控。本文通过克隆1.7Kb大肠杆菌噬菌体MS2的装配蛋白和壳蛋白基因以及SARS冠状病毒经过突变产生的270bp内对照片断,并将这些基因连接到载体pTrc99a上表达,进行纯化、定量分析、RT-PCR检测和稳定性试验。获得SARS内对照病毒样核蛋白颗粒,在人血清和SM缓冲液中37℃稳定性可达到30天,能抵抗核糖核酸酶降解。将内对照颗粒加入临床样本中一同检测,能够对检测的全过程(样品处理、反转录和PCR)有效进行监控,与SARS-CoV没有交叉反应。研究表明制备的该病毒样核蛋白颗粒稳定、安全、可靠,可作为SARS冠状病毒RT-PCR检测、定量分析的有效内对照参考品。     

过氧化物模拟酶在介体型生物传感器方面应用初探

meso-四(4-磺基苯)卟啉锰(Ⅲ)作为过氧化物模拟酶可催化H_2O_2与K_4Fe(CN)_6反应。电流响应与H_2O_2浓度在3.0×10~(-4)～1.0×10~(-3)mol/L范围内呈线性关系。重现性和回收率良好。抗坏血酸和DL-半胱氨酸干扰严重。     

辣根过氧化物酶反应的化学动力学分析

用辣根过氧化物酶来处理废水中的苯酚和氯酚为许多人所关注。采用停流快速混合技术，利用快速扫描紫外可见分光光度计得到辣根过氧化物酶催化过氧化氢氧化苯酚聚合过程的瞬态光谱数据。对此测量数据矩阵用正交投影及遗传算法解析后，确定体系中产生紫外吸收的物种数，及辣根过氧化物酶中间体形式的纯光谱信息，进而解出反应过程中各组分的动力学曲线。     

血红蛋白过氧化物模拟酶胶束催化显色体系

在胶束Tween80介质中，研究了以血红蛋白（hemoglobin,Hb)作为过氧化物模拟酶、隐性亮绿（recessive brilliant green,RGB)为氢供体底物、溶解氧为受氢体的酶催化反应特性。在pH5.64(NH4)2HPO4-KH2PO4缓冲溶液中，利用模拟酶对溶解氧作为受氢体催化RBG氧化生成亮绿（brilliant green,BG)而拟定了测定Hb含量的新方法。讨论了胶束介质对酶体系催化反应的影响及酶催化反应的可能机理。     

辣根过氧化物酶活性膜结构及生物电催化性能

通过分子沉积法研究了在聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）表面及金电极表面组装辣根过氧化物酶（HRP）/聚对苯乙烯磺酸钠（PSS）多层生物活性膜，用原子力显微镜(AFM)研究了组装膜的表面形貌，并研究了组装膜的形貌、粗糙度和活性关系.应用循环伏安法（CV）研究了组装HRP膜后电极对H2O2的电化学催化还原作用.实验发现，采用亚甲基蓝（MB）溶液为介质，在H2O2浓度为0.2～5.0 mmol•L－1时，其响应电流对H2O2浓度变化基本呈线性.     

基于辣根过氧化物酶/纳米金/L-半胱氨酸/聚邻氨基苯甲酸膜修饰的过氧化氢生物传感器

描述了测定过氧化氢的第三代电流型生物传感器。为了制备生物传感器，邻氨基苯甲酸（oABA）被电聚合到铂电极的表面形成具有抗干扰能力的静电排斥层。辣根过氧化物酶（HRP）通过纳米金（Nano-Au）的吸附固定到修饰了聚邻氨基苯甲酸及L-半胱氨酸的电极上。过氧化氢的测量是在相对于饱和甘汞电极的＋20 mV处进行的。修饰好的电极具有快速的响应，优秀的再现性和灵敏度，宽的线性范围和低的干扰水平等特点。我们研究了温度和pH对电极响应的影响及传感器的稳定性。在优化的条件下，传感器对过氧化氢的线性范围是2.99×10^-6到3.55×10^-3 mol/L，灵敏度和检测下限分别为0.0177 A•L^－1•mol^－1和4.3×10-7 mol/L（S/N＝3）。传感器不到10 s就可以达到响应的95％。     

关于静电作用对酶活性部位残基pKa影响的定量计算

随着基因技术的发展,人们几乎已经可以任意替换蛋白质序列中的特定残基。由于理论上对蛋白质性能的预测工作还远远跟不上实验的发展,只能花费大量的人力、物力利用实验方法筛选突变体。这就迫切需要建立一套能够正确预测蛋白质性质的方法。静电作用在酶促反应中起到了重要作用。基于表面带电残基对酶活性部位残基pK_α的影响,可利用替换表面残基的方法改变酶促反应随pH的变化趋势,是蛋白质工程研究中的一种有效方法。由于表面极性残基处于高介电常数的溶剂(水)与低介电常数的蛋白质的界面上,对此问题尚未有圆满的理论方法进行解决。我们利用Kirkwood理论定量地表述了表面荷电残基的替换对酶活性部位残基pK_α的影响,为研究酶突变体的性质,如突变体的电化学性质、酶催化反应随pH变化趋势的改变,酶专一性的改变等提供了一种简便的方法。     

对甲苯磺酸铜的电化学表征

合成了对甲苯磺酸铜,用X光单晶衍射确定了其结构.实验结果表明,该盐容易脱除全部结晶水,在空气中不潮解.分别测定了对甲苯磺酸铜(Cu(p-OTs)2)在H2O、CH3OH和DMF中的电化学参数.实验结果表明Cu(p-OTs)2在不同溶剂中的反应机理各异. Cu(II)的电化学还原在H2O中是分两步进行,而在CH3OH和DMF中的电化学还原是一步两电子过程.对实验结果进行了分析讨论.     

胶束溶液中高氯酸二水(四胺)合钴(Ⅲ)配合物催化磷酸二酯水解的研究

本文合成了疏水性高氯酸二水（四胺）合钴（Ⅲ）配合物，研究了它与非离子表面活性剂Brij35形成的金属2胶束催化二（对硝基苯酚）磷酸二酯水解的动力学及其机理。结果表明此金属胶束对磷酸二酯水解的速率大约提高10^4倍，这主要是由于表面活性剂胶束的pH效应和浓聚效应所致，暗示着顺式二水类配合物形成的金属胶束是一个潜在的磷酸二酯水解剪切的催化剂。     

二氧化碳与环氧化物的调节共聚合反应速率

在二氧化碳和环氧化物共聚时加入特定的调节剂，生成有规定的分子量和端基官能度的产物．这种调节聚合的本质是调节剂所含活泼氢与活性中心之间的链转移反应．根据建议的历程，提出了调节共聚速率方程，计算结果与实验一致．