重组人附睾特异蛋白BDFx的优化表达与纯化

通过改变异丙醇-β-D硫代半乳糖苷诱导浓度、诱导温度及诱导培养时间,优化含重组人附睾特异蛋白BDFx工程菌的表达条件．运用DEAE阴离子与CM阳离子交换层析及S-100分子筛层析纯化重组蛋白,用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外扫描等方法鉴定目的蛋白．结果显示,缩短诱导培养时间、降低IPTG浓度等可提高重组蛋白的表达量,表明适当提高诱导表达温度不会形成包涵体,并可缩短表达时间．     

弱精症患者精子miRNA表达谱的构建和分析

应用基因芯片技术构建弱精症患者精子中miRNA表达谱．收集30份弱精症患者精液标本和20份成年健康有生育能力男性的精液标本,提取精子RNA,标记后,与miRCURY^TM Array芯片杂交．分析弱精症患者精于中miRNA表达情况．高活力精子和低活力精子共196个miRNA存在表达差异,上调miRNA93个,下调miRNA103个．弱精症患者精子miRNA表达谱的建立对分析精子运动的分子机制和探讨弱精症的病因将会有所帮助．     

不同解冻方法对辽宁绒山羊精子活力的影响

通过比较三种精液冷冻保存稀释液配方（A、B、C）对山羊细管冷冻精解冻后精子活力的影响,结果表明,三种稀释液配方（A、B、C）,冷冻-解冻后精子活力有极显著的差异（P〈0．01）,分别为42．57％、37．34％、33．03％,A显著优于B液和C液．而且用不同的水浴温度和解冻时间进行解冻,通过精子活力的比较,寻找出最佳的解冻温度为38℃,解冻时间为60s．     

一种牛精子膜蛋白的纯化及在生殖中的作用

牛精子经ψ=0.5%的NP-40洗脱后,先经伴刀豆凝集素Con A(Concanavalin A)亲和层析分离,经SDS-PAGE电泳,得到相对分子质量Mr分别为32×103,26×103,20×103的3种与Con A结合的糖蛋白CBG(Con A binding glycoprotein).再将亲和层析分离所得蛋白成分经葡聚糖凝胶(Sephadex G-100)层析柱进一步纯化,得到Mr为26×103的单一成分.将26×103 CBG免疫兔后制得抗血清,经PAP免疫组织化学染色发现:26×103的CBG抗原主要分布于牛精子的顶体区,同时鼠精子表面也有同样分布,说明26×103的CBG抗原具有种同保守性.后将26×102的CBG免疫雌鼠,发现其产仔率由对照组的(8.5士2.6)只(n=12)减少到(4.3士1. 8)只(n=24),经t检验(不配对,单尾),二者间差异极显著(p＜0.001).本实验结果表明:26×103的CBG在精卵结合中可能发挥重要作用,并有可能开发为人工避孕疫苗.     

骨营养素安全性毒理学实验研究

目的检测骨营养素作为保健食品的安全性。方法依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》,通过小鼠经口急性毒性试验、致突变试验,大鼠30 d喂养试验对骨营养素进行检测。结果小鼠经口LD50>21.5 g/kg,属无毒级物质;致突变试验结果为阴性;大鼠30 d喂养试验表明,各剂量组体重增长、食物利用率、脏体比、血液学及血清生化指标与对照组比较均无显着性差异(P>0.05),通过病理检查,主要脏器未发现与实验有关的病变。结论骨营养素为无毒、无致突变作用的保健食品。     

多菇口服液毒理安全性实验研究

目的检测多菇口服液作为保健食品的安全性。方法通过小鼠经口急性毒性试验、致突变试验,大鼠30d喂养试验对多菇口服液进行检测。结果小鼠经口LD50>21.5g/kg,属无毒级物质;致突变试验结果为阴性;大鼠30d喂养试验表明各剂量组体重增长、食物利用率、脏体比、血液学及血清生化指标与对照组比较均无显着性差异(P>0.05)。病理检查主要脏器未发现与实验有关的病理性改变。结论多菇口服液为无毒、无致突变作用的保健食品。     

甲醛对雄性小鼠生殖细胞毒作用的研究

研究了液态和气态甲醛对雄性小鼠生殖细胞的毒作用,选用SPF级昆明种纯系雄性小鼠作为研究对象,液态甲醛染毒剂量分别为0．20,2．00,20．00mg／kg体重,采用腹腔注射染毒7d,观察睾丸组织的病理改变,并计算脏器系数、精子存活率、活动率、精子数及畸形率．气态甲醛染毒剂量分别为0．5,1．0,3．0mg／m^3,连续动态染毒72h,于首次染毒后第15天观察睾丸细胞的微核率,结果表明,液态甲醛能引起睾丸组织病理损伤,脏器系数、精子存活率、活动率和精子数减少,畸形率升高;气态,甲醛能诱导早期精细胞微核率增加,均呈现一定的剂量反应关系,液态甲醛和气体甲醛均具有小鼠生殖细胞毒性。     

解脲支原体感染与精液质量指标的相关性研究

对 4 1例正常男性和 81例精液质量较差男性患者的精液进行了解脲支原体培养研究 ,结果表明精液质量差的患者解脲支原体阳性率为 54.34% ,而正常男性的阳性率为 2 6 .83% ,二者差异显著 (α <0 .0 1) .同时 ,对 81例患者按少精及无精、成活率低下、活力低下、顶体完整率低以及血清抗精子抗体阳性 5项指标进行了分组 ,并计算了各组中解脲支原体阳性患者所占百分率 .结果表明 :以上各组的阳性率均高于正常组 ,生殖道解脲支原体感染影响了精子各项指标 ,降低精液整体质量 ;解脲支原体对精子活力影响最大 ,其次是精子数、成活率、顶体完整率、血清抗精子抗体 ;解脲支原体感染致使精子活力逐渐下降 ,最终导致精子死亡 ,从而降低精子成活率     

脑组织特异性表达胰岛素样生长因子-1转基因小鼠制备

目的制备脑组织特异性表达胰岛素样生长因子-1(Insulin-Like Growth Factors 1,IGF-1)转基因小鼠。方法采用精子为载体法进行基因转导,出生后小鼠PCR检测,建立转基因小鼠系,用Western blot和免疫荧光法分别检测转基因小鼠海马齿状回亚粒状区(subgranular zone,SGZ)IGF-1表达量和报告基因EGFP阳性细胞数。结果获得3只阳性小鼠,2只外源基因能稳定遗传,并建立了转基因小鼠系,转基因鼠SGZ区域IGF-1表达量显著高于正常鼠,EGFP也在此区域表达。结论成功制备IGF-1转基因小鼠。     

在单细胞水平建立原位PCR基因鉴别技术平台——以精子基因型鉴别为例

目的精子发生是一个包括有丝分裂和减数分裂的精细调控过程,这一过程是从精原干细胞开始在雄性睾丸的曲细精管中完成的,由哺乳动物雌雄性比例接近1∶1这一现象可以推知:受精时带X基因的精子和带Y基因的精子比率应该是1∶1,但事实上精子发生的过程中,分化出来的X、Y精子的比例是否也为1∶1并不清楚,因为精子发生过程中并不是所有细胞都能最终形成精子,然而要研究雌雄出生比率就需要先研究精子本身是否严格地按照1∶1形成,因此本实验通过建立快速可靠原位PCR技术平台为进一步研究精子发生的调控过程提供支持。步骤用HSL基因优化荧光原位PCR实验方案,包括蛋白酶K作用时间和浓度,原位PCR前先对精子进行解聚,再用SRY基因对精子进行原位PCR鉴定。结果在荧光显微镜下可清楚地看到精子头部的荧光信号,头部有绿色荧光信号的精子为带有SRY基因的Y染色体精子(Y精子),实验检测到昆明小鼠精子共493个,有信号的共273个,X∶Y=55.37%,经卡方检验,X精子与Y精子的实验结果趋近于1∶1。结论可利用荧光原位PCR技术在单细胞水平快速鉴定精子"性别",理论上可用于任何细胞的任何基因的鉴定。