养殖鱼类链球菌病病原的分离鉴定及其16S rDNA分析

从患病的海水网箱养殖鱼中分离到5株链球菌,分别命名为HD-1、HD-2、HD-3、HD-4和HD-50。常规生化结果表明,其中4株即HD-1、HD-2、HD-3和HD-4为海豚链球菌(Streptococcus iniae);另外1株即HD-50为停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)。分别对上述分离菌株的16S rDNA进行PCR扩增和测序,并与NC-BI中收录的其它链球菌的16S rDNA序列一起进行聚类分析并构建了系统发生树,确定其分类地位。分子分析结果与生化鉴定结果一致。攻毒实验表明以上4株S.iniae均能引起罗非鱼发病,呈现典型的链球菌病症状,并能从发病的罗非鱼脑、心、肝肾和血液中成功回收S.iniae。以上生化和分子生物学鉴定以及罗非鱼攻毒实验结果表明养殖鱼类链球菌病的主要病原为S.iniae,这与国外有关鱼类链球菌病病原的研究报道一致。     

Comparative analysis of whole-genome sequences of Streptococcus suis

The recent outbreak of Streptococcus suis in some districts of Sichuan Province in China has caused over 30 deaths and more than 200 infections in human be-ings[1]. Streptococcus suis is a Gram-positive, faculta-tively anaerobic bacterium, a peculiar path…     

Deletion analysis of oligomycin PKS genes （olmA） in Streptomyces arermitilis

Gene deletion vector pXL05(pKC1139::△olmA1 △olmA4) was used to disrupt oligomycin PKS encoding genes (olmA ) in Streptomyces avermitilis CZ8-73, the producer of anthelmintic avermectins B and the cell growth inhibitor oligomycin, olmA gene cluster in the chromosome was displaced by deletion allele on the plasmid via double crossover. Four of disruptants were confirmed by Southern blotting. Shaking flask experiments and HPLC analyses showed that the four mutants no longer produced the toxic oligomycin, but only made four components of avermectins B, which were avermectin Bla, Blb, B2a, B2b. The yields of avermectins B in these mutants were separately equal to those in CZ8-73. This revealed that olmA genes deletion did not affect the biosynthesis of avermectins. The deletion mutants were proved to be genetically stable, and thus might be promising strains in industrial production of avermectins B.     

肺炎链球菌自然转化机制的研究进展

目的：探讨肺炎链球菌自然转化基因调控的研究进展。方法：复习国内外近期资料加以综合归纳。结果：肺炎链球菌自然转化的基因调控是非常复杂的,100种以上的基因都能对感受态刺激因子的刺激产生应答,其中comCDE、comAB、ciaHR基因在自发形成感受态的调节中具有关键的作用。结论：肺炎链球菌自然转化机制的进一步阐明,对于了解肺炎链球菌的生理特点、致病性和耐药机制等都是非常有益的。     

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的磷脂纳米囊泡构建及其抗龋齿研究

为了提高茶多酚中生物活性最强的多酚物质表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的稳定性,增强其抗龋齿作用,设计构建了一种含EGCG防龋齿磷脂纳米囊泡,利用纳米囊泡优良的载体性能和磷脂复合物解决EGCG稳定性问题,延长活性成分在牙齿表面吸附时间,增强EGCG的防龋齿疗效.采用紫外光谱扫描和差式扫描量热表征磷脂复合物中EGCG...     

卵形鲳鲹主要致病链球菌多重PCR诊断技术的建立

【目的】快速、准确地检测卵形鲳鲹(Trachinoms ovatus)感染无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)、海豚链球菌(Streptococcus iniae)和格式乳球菌(Lactococcus garvieae)4种主要的致病菌,为卵形鲳鲹的健康养殖提供依据。【方法】针对4种致病菌的特异基因设计特异性引物cfb-F/cfb-R,tuf-F/tuf-R,Si-F/Si-R,PLG-F/PLG-R,建立多重PCR反应体系,通过调试各引物对之间的最佳比例以及最适退火温度,对反应体系进行优化及灵敏度测试。2014年6~8月,应用该体系对北海及湛江各养殖场的发病卵形鲳鲹进行检测,然后用通用引物扩增16SrRNA基因,经测序、比对检测体系的准确性。【结果】反应体系中cfb-F/cfb-R,tuf-F/tuf-R,Si-F/Si-R,PLG-F/PLG-R的最适浓度分别为0.2μmol/L,0.08μmol/L,1.6μmol/L和0.4μmol/L;最优退火温度为54.3℃;4种目标菌的检测灵敏度为5×10~(-2) ng/μL;11份病原样品检测中,2份出现海豚链球菌的目的条带,4份出现无乳链球菌的目的条带,5份未见目的条带,和测序分析结果一致。【结论】多重PCR方法能代替传统的微生物检测方法特异、快速、灵敏地检测4种致病菌。     

多重RT-PCR方法对人肺炎链球菌菌种、血清型及耐药性的鉴别检测

首先,选择肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)基因LytA、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)基因P1、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,CP)基因ompA作为目标检测靶点设计引物探针,建立鉴别肺炎链球菌菌种的多重RT-PCR方法.其次,针对肺炎链球菌cps基因座序列,利用MGB-TaqMan探针的多重RT-PCR方法对肺炎链球菌的血清型进行鉴别检测.最后,针对肺炎链球菌耐药基因ermB、mefA为靶标设计引物探针,采用多重RT-PCR方法对其临床阳性样本的耐药性进行鉴别检测.肺炎链球菌鉴别检测多重RT-PCR方法,线性范围为102~107 copies/mL,R2分别为0.999、0.996和0.995,灵敏度可达102copies/mL,与其他病原体无交叉反应.512例临床样本经多重RT-PCR方法鉴别检测,肺炎链球菌189例(189/304,62.17%),肺炎支原体83例(83/304,27.30%),肺炎衣原体32例(32/304,10.53%),与单重FQ-PCR及基因测序法比较无统计学差异(P0.05).189例肺炎链球菌临床样本,经多重RT-PCR检测,血清分型为:19(19.58%,37/189)、23(15.87%,30/189)、6(13.23%,25/189)、14(6.3%,12/189),其他血清型(22.75%,43/189),其他血清型(22.22%,42/189).肺炎链球菌抗药菌株突变检测为:ermB突变115例(115/189,60.85%),mefA突变56例(56/189,29.63%),两基因共突变15例(15/189,7.94%).     

离子注入法对链球菌代谢产物透明质酸的影响分析

选用一株ATCC 700400马链球菌亚种,通过离子注入法对链球菌代谢产物透明质酸的影响来找寻透明质酸低耗高产的可能和路径。注入离子选用N+,注入能量分别为15 ke V和20 ke V,范围是0(对照)、(20×1014~100×1014N+/cm2(不同氮离子注入参数以对比)。透明质酸测定选用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)比浊法,通过对比来筛选HA高产型链球菌。结果表明,在注入能量为20 ke V,剂量为20×1014N+/cm2时,产出透明质酸浓度明显高于其他菌株,诱变效果最好,为今后进一步诱变筛选及发酵条件优化奠定了良好的基础。     

透明质酸产生菌的化学诱变及发酵条件探索

以兽疫链球菌（Streptococcus zooepidemicus）C55151为原始菌种, 经N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（NTG）诱变处理, 获得一株高产透明质酸（Hyaluroni c acid, HA）的变异株J18, 其HA产量较原始株提高一倍. 利用正交设计试验探索出该变异株的最佳发酵培养基配比为葡萄糖50 g/L, 酵母膏30 g/L, 硫酸镁0.5 g/L.　发现添加十二烷基硫酸钠（SDS）能够大幅度提高HA产量． 同时对原始株、 变异株的发酵过程进行了研究, 发现变异株J18在发酵的任何时间, 其HA产量都高于原始菌种, 且菌体浓度与发酵液中的葡萄糖浓度及pH值呈负相关性.     

培养条件对乳酸乳球菌N302合成乳酸链球菌素的影响

研究了培养条件对LactococcuslactisN302产生乳酸链球菌素的影响.结果表明,复合氮源、蔗糖、磷酸氢二钾、pH6.0和3%接种量有利于乳酸链球菌素的合成.发酵过程中菌体细胞生长、乳酸链球菌素活性和nisZ基因表达在培养21h达到最高峰,乳酸链球菌素活性为3560IU/mL.