首例艾滋病“功能性治愈女童”病情复发

<正>美国一名儿童于2013年"成功治愈"艾滋病,但最新诊断结果表明,停止药物治疗之后儿童体内又发现了艾滋病毒,这将成为医学界的一个重大挫折。据悉,这个女童出生于美国密西西比州,她在母体中就已感染艾滋病毒,医生对她持续使用18个月抗逆转录病毒药物治疗,2013年3月,专家宣称,这位女童成为全球首例"功能性治愈"的艾滋病案例,血液中再未发生艾滋病毒。但近期她在密西西     

病毒学对分子生物学发展的贡献

本文通过回顾病毒学发展史上的重大事件,尝试从以下几个方面说明病毒学的新发现对分子生物学发展所做出的贡献：①噬菌体感染实验和植物病毒重建实验证明了核酸是遗传信息的载体;②逆转录病毒的发现使人们认识到遗传信息的流动不是单向的;③逆转录酶已经成为基因克隆中重要的工具酶;④朊病毒的发现使人们认识到蛋白质很有可能成为核酸之外遗传信息的载体,扩展了人们对中心法则的认识;⑤各种野生型病毒被改造成为基因工程载体,广泛应用于基因工程．     

构建逆转录病毒PBabepuro-Bcl-2表达质粒及稳定转染细胞株

目的:构建pBabepuro-Bcl-2逆转录病毒表达质粒,鉴定表达,在小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中建立过表达Bcl-2稳定转染细胞。方法:以人上皮细胞的cDNA为模板,利用X-tremeGENE HP(Roche)转染293T细胞,蛋白质免疫印迹法在蛋白水平检测表达,利用逆转录病毒感染NIH3T3细胞。结果:成功构建了逆转录病毒表达质粒pBabepuro-BCl-2,蛋白水平检测证实其在293T细胞可以有效地表达,成功建立了过表达Bcl-2的NIH3T3稳定转染细胞。结论:通过构建pBabepuro表达质粒及在NIH3T3建立过表达Bcl-2稳定转染细胞,为进一步研究Bcl-2的功能调控奠定了基础。     

单嗜性包装细胞包装逆转录病毒方法研究

逆转录病毒的感染范围(嗜性)是由所使用的包装细胞表达的包膜蛋白所决定的,因此改变现有的包装细胞的包膜蛋白就可以改变所包装的逆转录病毒的嗜性。为了达此目的,在稳定表达MMLV包膜蛋白的逆转录病毒包装细胞BOSC23细胞中共转染VSV-G表达载体和表达GFP的逆转录病毒载体,结果包装出的逆转录病毒只能感染少量的人源性的293F细胞,说明VSV-G不能完全替换掉MMLV包膜蛋白。因此我们利用RNA干扰技术首先沉默BOSC23细胞中的MMLV包膜蛋白的表达,然后共转染VSV-G表达载体和表达GFP的逆转录病毒载体,结果包装出了高滴度的泛嗜性的逆转录病毒。     

携带TIMP-1基因逆转录病毒载体的构建及其实验研究

构建携带组织金属蛋白酶抑制物ＴＩＭＰ－１基因的逆转录病毒载体，并用于感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系，观察其侵袭、转移能力的变化．利用常规分子克隆技术，通过对逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ（Ｆ６）质粒的去磷酸化、粘端连接，构建ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ／ｈＴＩＭＰ；经限制性内切酶酶切、电泳鉴定其结构正确后，用电穿孔法对体外培养的ＰＡ１３７包装细胞进行基因转移，Ｇ４１８筛选阳性克隆，收集上清，并用于感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系的研究．构建获得ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ／ｈＴＩＭＰ，有效滴度为１０４ＣＦＵ／ｍＬ～１０６ＣＦＵ／ｍＬ．本研究构建获得的ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体，在感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系，观察其侵袭、转移能力的研究中得到有效应用     

感染HIV儿童抗逆转录病毒治疗时机的初步探讨

目的通过检测甘肃省3名感染HIV儿童CD4~+T淋巴细胞计数和HIV-1病毒载量,探讨感染HIV儿童开展抗逆转录病毒治疗时机的选择。方法 CD4~+T淋巴细胞计数按照美国BD公司FACS Calibur四色流式细胞仪和相应试剂说明书进行,HIV-1病毒载量按照法国生物梅里埃公司NucliSens easyQ HIV-1 v1.1试剂说明书进行。结果 3名感染HIV儿童CD4~+T淋巴细胞计数均在目前中国开始抗逆转录病毒治疗的CD4~+T淋巴细胞计数标准(350个/μL)以上,而HIV-1病毒载量治疗前平均在10~5IU/mL左右。其中两名儿童开展抗逆转录病毒治疗3个月后,HIV-1病毒载量降至10~2IU/mL左右。未开展治疗的儿童其HIV-1病毒载量仍维持在10~5IU/mL。结论儿童一旦感染HIV,应尽早诊断和及时开展抗逆转录病毒治疗。     

IL-2和EGFP共表达逆转录病毒载体的构建

设计质粒pR evT et-O n和pIRES2-EGFP的接头序列,经一系列酶切连接,重组为含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和多克隆位点(M CS)的逆转录病毒载体pR evIRES2-EGFP;同时将质粒pBV 220-IL-2和pEGFP-C 1重组为含有人白细胞介素-2(h IL-2)的过渡质粒pEGFP-C 1-IL-2.再酶切质粒pEGFP-C 1-IL-2,琼脂糖凝胶电泳回收IL-2基因片段,并将其连接到pR evIRES2-EGFP的多克隆位点中,转化E.coli DH 5α进行扩增,提取质粒DNA获得重组体pR evIRES2-EGFP-IL-2.鉴定结果表明构建的逆转录病毒表达载体pR evIRES2-EGFP-IL-2完全正确.     

逆转录病毒感染结合流式细胞分选方法构建稳定过表达CUEDC2的MCF-10A细胞系

CUEDC2（CUE domain containing protein 2）是本实验室发现的功能未知蛋白质。已有研究证明CUEDC2通过抑制孕激素受体PR影响乳腺癌细胞的生长,同时CUEDC2的高表达能够降解雌激素受体ER而导致乳腺癌内分泌治疗耐药。为了深入研究CUEDC2在乳腺癌中的功能,我们构建了稳定过表达CUEDC2的MCF-10A细胞系。利用逆转录病毒将非融合形式的绿色荧光蛋白质GFP和CUEDC2基因稳定整合至靶细胞的基因组中,经过流式分选获得GFP阳性细胞,即为稳定表达CUEDC2的细胞株。上述方法高效快捷,极大提高了稳定细胞株的构建效率。同时该稳定细胞株的建立为CUEDC2的功能研究提供了必要的工具。     

治愈不治之症的基因疗法

人类基因组计划为现代医学开启了划时代的新篇章。在弄清人体中各种基因的作用的基础上，科学家开始通过基因疗法治疗一些过去被视为不治之症的遗传性疾病。这种尝试目前已经取得了一定成就，它向我们展示了后基因组时代的美好前景。