栝楼蛋白 2: 栝楼蛋白部分化学结构的初步测定

栝楼蛋白(Trichobitacin)是从栝楼(Trichosanthes kirilowiiMaxim, Cucurbitaceae)中新发现的核糖体失活蛋白, 分子量为27,228; pI为9.6。应用基质辅助的激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和快原子轰击质谱法(FAB-MS)分别测定胰蛋白酶酶解栝楼蛋白和天花粉蛋白(Trichosanthin)的混合肽质谱, 通过比较发现了一些分子量相同的肽。由于这两种蛋白质都来源于栝楼块根, 同源性比较强, 所以这些肽序列在两种蛋白质中基本一样; 再结合蛋白N-端自动顺序仪测定栝楼蛋白N-端的结果, 确定了栝楼蛋白N-端38个氨基酸的顺序, 栝楼蛋白经胰蛋白酶酶解后所得肽段用HPLC分离纯化, 再用蛋白质自动顺序仪, DABITC/PITC双偶合手工法和质谱法共确定了栝楼蛋白N-端, C-端等100多个氨基酸残基的序列。     

兔肝金属硫蛋白稀水溶液的脉冲辐解

金属硫蛋白(Metallothioneins,简称MTs)是一类富含巯基和金属的低分子量蛋白质,广泛存在于哺乳动物中.MTs 通常含61个氨基酸,其中20个为半胱氨酸,不含芳香族氯基酸和组氨酸,因此在280nm 附近没有吸收峰.MTs 通常结合7个Cd 或zn,20个巯基全部去质子化并参与配位,从而形成牢固的结构域.有证据表明MTs 可能有储存Zn 和Cu 的作用,同时能减轻重金属对动物细胞的毒性,但其生理功能一直不很清楚.近几年的研究表明,MTs 能增强机体对电离辐射的耐受力、修复DNA 损伤,这可能与MTs 中含有丰富的巯基有关.体外实验测得k_(MT/OH)=10~(12)dm~3·mol~(-1)·s~(-1),k_(MT/O(?))=5×10~5dm~3·mol~(-1)·s~(-1),但其辐解机理尚不清楚.本工作利用脉冲辐解技术研究了免肝MT-I 稀水溶液辐解时的中间过程,并作了初步的解释.     

微管蛋白聚合及其与紫杉醇作用的量热学研究

微管作为细胞骨架的主要成分之一，在细胞内执行许多功能.微管是一个动态的结构，既参与细胞运动和细胞内物质运输［‘个又感受、转导外界信号问的刺激产生相应灵敏的反应.尤其它是许多药物，如：紫杉醇（Taxol）、秋水仙素（Colchicine）、等作用的靶子问，因而，微管已成为筛     

毛细管电泳在手性分离中的应用及进展

本文评述了近年来毛细管电泳在手性分离中的应用及进展，介绍了毛细管电泳分离手性对映射的数学模型、五种不同的分离模式及机理、七种常用的手性选择性类型及其在药学、环境和生命科学中的应用、研究中需优化的操作参数及其发展方向。     

矩形截面毛细管电泳和二维分离

在石英单晶表面制成矩矩截面毛细管柱中进行电泳实验。由于矩形柱比圆形柱有更大散热侧面积且石英单晶的导热性能远无于熔融石英，所以可施加较高的场强，不仅提高了柱效，而且缩矩了分离时间。两相交的通道之间形成自然连接，可实现二维分离，并消除死体积。     

G蛋白偶联受体研究进展

G蛋白偶联受体（GPCRs）是体内最大的蛋白质超家族，根据结构的同源性，主要分为A、B、C3族．GPCRs配体的多样性决定配体结合域的多样性．受体分子内相互作用力的破坏、质子化、构象改变、与G蛋白的偶联及受体二聚化参与了GPCRs的活化过程，近年发现GPCRs的失敏和内吞对受体功能调节亦非常重要，本文拟综述以上内容的研究进展．     

SARS冠状病毒N蛋白的表达及二级结构预测分析

通过RT-PCR获得SARS冠状病毒N蛋白基因，分别克隆到原核表达载体pET21a，pET32a和pGEX-4T-1中，将3种重组质粒pET2la-N，pET32a-N和pGEX-4T-1-N分别转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导，细菌中分别表达出约46kD的重组N蛋白、约60kD的6xHis-N融合蛋白和约70kD的GST-N融合蛋白，表达量分别达总蛋白的45％、40％和30％．进一步的分析表明：6xHis-N融合蛋白在大肠杆菌中为可溶性表达，该可溶性组分占细菌裂解液的70％左右，且能被6xHis抗体所识别．用蛋白分析软件对N蛋白进行了序列分析和二级结构预测．SARS冠状病毒N蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达，有助于进一步结晶后进行X射线晶体衍射分析其结构与功能．     

硒代半胱氨酸的生物合成及参入

硒代半胱氨酸是蛋白硒的主要存在形式，其合成和参入有不同于其它氨基酸的生物学特点系统．阐述了原核生物和真核生物的硒代半胱氨酸的合成途径和参入机制，并比较了原核生物和真核生物硒蛋白基因中硒代半胱氨酸插入序列元件的结构特点．     

蚕豆类水孔蛋白基因的克隆及表达

为了解水孔蛋白在气孔运动中的作用,通过5′/3′RACE(rapid amplification of cDNAends)技术从蚕豆(Vicia fafba)叶片表皮cDNA中克隆出1个编码290个氨基酸的类水孔蛋白基因VfPIP1(Vicia faba plasma membrane intrinsic protein gene),GenBank登录号为AY667436.应用计算机软件对VfPIP1的氨基酸序列分析表明,VfPIP1含6个跨膜区,具有质膜水孔蛋白的特征信号序列GGGANXXXXGY和TGI/TNPARSL/FGAAI/VI/VF/YN,属于PIP1亚家族成员.原位杂交及Northern blot分析显示,VfPIP1在保卫细胞中有较强的表达信号,并受脱落酸(ABA)诱导.上述结果为研究水孔蛋白VfPIP1在气孔运动中的作用及其活性调节机制打下了基础.     

微透析-毛细管电泳联用研究盐酸雷尼替丁在家兔血液中的代谢过程

将毛细管区带电泳(CZE)与微透析采样技术联用,研究了盐酸雷尼替丁在家兔血液中的代谢过程.首先研究了毛细管电泳的pH值、缓冲液浓度、分离电压、进样时间等电泳条件对盐酸雷尼替丁与法莫替丁分离的影响.结果采用pH6.2磷酸缓冲液,分离电压为10kV,进样压力2758Pa,4s的条件,能够使盐酸雷尼替丁与法莫替丁达到基线分离,据此以法莫替丁为内标建立了一种测定盐酸雷尼替丁的方法,峰面积比与相应的盐酸雷尼替丁浓度在1.5×10-7g·mL-1～8.0×10-6g·mL-1范围内成线性关系(r=0.998),最低检测限9.0×10-8g·mL-1.药物代谢动力学参数由“NDST21”计算软件求得,代谢符合一室开放模型,其半衰期为89.8min.