应用于dPCR的大视场荧光显微检测系统的设计

数字聚合酶链式反应(dPCR)作为一种新的核酸检测技术,在生物医学等领域得到广泛的应用。为了进一步提升现有的dPCR检测系统的检测效率,设计了一套基于大视场荧光显微镜的dPCR检测系统,将照明系统与滤波模组设计于显微镜物空间,结合复眼照明系统实现大面积匀光照明,照明面积可达到32mm×22mm,照明均匀性达到80%以上,提出一种结合神经网络的培养皿计数检测方法,可以有效筛选出培养皿中已经蒸发的培养皿。整个系统从相机曝光到检测结束仅需要几秒钟时间,相比传统的图像拼接式检测方法,其检测效率得到了明显提高。     

4种百合不同花期花香成分鉴定与关键基因表达研究

使用顶空固相微萃取（HS-SPME）和气相色谱-质谱（GC-MS）联用技术，对4个百合（Lilium spp.）品种初花期和盛花期的花朵进行花香成分分析，并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和中性红染色试验，分别对不同品种百合初花期和盛花期花朵进行6个花香合成关键基因相对表达量和花香释放部位的测定.结果表明，4个百合品种初花期和盛花期共测定出61种挥发性化合物，盛花期花朵挥发物总含量均高于初花期，含量较高的成分有芳樟醇、(Z)-β-罗勒烯、桉树脑、(+)-柠檬烯、月桂烯、苯甲酸甲酯等.差异挥发物的筛选结果显示，4个品种共筛选出差异挥发物44种.将61种挥发性化合物分为9大类，4个品种初花期与盛花期花香的主要成分为萜烯类和酯类化合物. qRT-PCR结果表明，PAL、PAL3、DXS、TPS这4个基因在4个品种盛花期的相对表达量均高于初花期，而BSMT在‘西伯利亚’盛花期，DXR基因在‘竞争’和‘木门’盛花期的相对表达量低于初花期.中性红染色试验结果显示，盛花期花朵染色程度高于初花期，且均在花瓣的上半部反卷处染色最深，说明该部位为主要的花香物质释放区域.     

绵羊RARG基因组织表达规律的研究

根据GenBank中报道的绵羊视黄酸受体γ（retinoic acid receptor—gamma，RARC）基因mRNA序列，设计特异性引物，利用Real—time PCR技术对绵羊RARG基因的组织表达规律进行了研究，并对其进行了生物信息学分析，为进一步研究该基因的功能提供线索。结果表明，绵羊RARG基因共编码458个氨基酸，其中亮氨酸所占比例最高，为11．10％；该基因编码产物在系统进化树中与牛的亲缘关系最近；RARG基因编码产物二级结构主要以无规则卷曲和α螺旋为主，主要位于细胞核中，是一种水溶性蛋白；Real—time PCR结果显示，绵羊RARG mRNA在心、肝、脾、肺、肾、瘤胃、十二指肠、淋巴、下丘脑、垂体、肌肉、睾丸等12个组织中均有表达，其中在睾丸中表达量最高，推测绵羊RARG基因可能参与机体繁殖机能的调控。     

传染性法氏囊病快速诊断技术的建立及其应用

根据已发表的IBDV各致病型毒株的序列，在病毒结构蛋白VP2编码基因的高变区(VP2 variable domain,vVP2)两端外侧的保守序列内设计合成了2条寡核苷酸引物，对各种不同致病型的12株参考毒株进行逆转录酶一聚合酶链式反应(RT—PCR)的检测．结果 12个参考毒株均能扩增出约679 bp的目的片段，而对作为阴性对照的常见5种鸡病病原NDV、IBV、CAIV、E．coli、pM均没有扩增出任何片段；应用建立的技术对疑似IBD的34份临床病料进行检测，并同时在基础RT—PCR扩增的片段内设计另一对引物进行Nested—PCR检测．结果基础RT—PCR方法检测到ll份阳性，Nested-PCR检测到23份阳性．研究的结果表明建立的IBD的RT—PCR诊断技术具有特异、快捷、敏感的特点．在此基础上设计的Nested—PCR则大大提高了阳性检出率(提高52．1％)．     

番木瓜环斑病毒株系的分子生物学方法鉴定

以PRSV株系牧民性引物对PRSV的PRSV126（PRSV日本分离物）、Ys、Vb和Sm等株系进行RT－PCR方法鉴定，引物PR21／PR22能把Ys从Vb和Sm中鉴定出来，PR300／PR301则能把Vb从Ys、Sm和PRSV126中鉴定出来；用限制性内切酶Hae Ⅱ、Sau3A I和Hinf I对PRSV的PRSV126、Ys、Vb和Sm等株系进行单酶切RT－PCR－RFLP分析，Hinf I能把PRSV126与Ys、Vb和Sm鉴别开来，Sau3A I能把Ys与Vb和Sm鉴别开来，Hae Ⅱ则能把Ys与PRSV126、Vb和Sm鉴别开来；以P1／P2为引物，对Vb、Ys和Sm株系进行RT－PCR－RFLP－SSCP分析，结果能一次把三者较好地区别开来。     

人胎盘G—蛋白ab3a cDNA的克隆

为了获取全长的小分子G－蛋白Rab3a，以用于研究Rab3a与其他蛋白相互作用关系，本实验以人胎盘总cDNA为模板，PCR扩增到人Rab3a cDNA全编码区。产物回收后克隆于质粒pYESTrp2的BamHI/Xhol位点，测序结果表明，本实验获得的Rab3a cDNA包含了起始和终止密码子。与PCR引物设计的参照Rab3a比较有5个核苷酸变异，与翻译的氨基酸序列完全一致。由此表明本实验获得的Rab3a cDNA可用于进一步研究。     

Rapid Amplification of 5‘ cDNA End of S.Liaotungensis Choline Monooxygenase Using Inverse PCR RACE

Based on part of a known cDNA sequence of Suaeda Liaotungensis choline monooxygenase the author successfully cloned the 5‘ cDNA end of Suaeda Lianotungensis choline monooxygenase using Inverse PCR RACE with a specially designed 5‘-phosphated RT primer and two pairs of specific inverse PCR primers.Compared with the anchored PCR RACE,inverse PCR RACE has bettter specificity and higher amplification.     

Real-time PCR的研究进展及其应用

本文综述了real-time PCR的原理、定量方法及其在各领域的应用。