外源乳酸脱氢酶基在在双歧杆菌中的表达

以大肠杆菌-双叉双歧杆菌的穿梭质粒PhJ为基础，插入从Lactococcus lactis总DNA中用PCR方法扩增得到的报告基因乳酸脱氢酶基因（ldh)，构建了双叉歧杆菌的表达质粒phj-ldh，并采用电转化法导入双叉双歧杆菌进行了表达研究，对双叉双歧杆菌总蛋白的SDS-PAGE分析结果表明，ldh报告基因的表达产物形成了明显的条带，Western-boltting结果确认了该条带为ldh基因的产物，LDH的酶活性定量测定结果表明，重组双叉双歧杆菌的蛋白粗抽提液中LDH的比活性为5.5U/mg，菌中LDH的表达量约为2mg/L，此工作为今后双叉双歧杆菌的基因工程奠定了基础。     

刺猬和三种游蛇科动物冬眠期和活动期乳酸氢酶同工酶的比较

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对刺猬(Erinaceus dealbatus)及游蛇科的黑眉锦蛇(Elaphe taeniura)、红点锦蛇(E.rufodorsata)和赤链蛇(Dinodon rufozonatum)等在冬眠期和活动期骨骼肌、心肌、肝等的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)同工酶谱进行了分析,并用比色法测定了以上各种组织的LDH活性.结果表明LDH同工酶的电泳图谱只有红点锦蛇的肝和骨骼肌中存在活动期和冬眠期的明显差异,在其余动物两个时期的组织中未表现出明显变化;刺猬的肝脏LDH活性在冬眠期显著地高于活动期,而其余的动物组织冬眠期LDH活性均显著低于活动期;三种蛇类组织LDH4均未见表达.     

彭泽鲫鱼同工酶的研究

本文采用聚丙烯酰胺垂直平板电泳方法,分析了彭泽鲫鱼的肝、肾、心、脑、肌、眼等6种组织中的酯酶(EST)和乳脱酸氢酶(LDH)同工酶电泳图谱。结果表明:彭泽鲫鱼具有丰富的EST和LDH同工酶。在不同的组织中,EST和LDH同工酶谱带各不相同,具有明显的组织特异性。     

植物激活蛋白对水稻秧苗生长及相关酶活性的影响

研究了不同浓度激活蛋白对水稻秧苗生长以及对琥珀酸脱氢酶(SDH)、淀粉酶和丙酮酸激酶(PK)的影响。结果表明,用1(μg·mL-1)、2(μg·mL-1)、6(μg·mL-1)植物激活蛋白处理水稻种子,能促进水稻秧苗的生长,尤其对根长的促进作用更明显。2(μg·mL-1)植物激活蛋白处理水稻种子能够提高水稻秧苗的琥珀酸脱氢酶(SDH)、总淀粉酶、丙酮酸激酶(PK)活性,5d后达最高值,分别比对照提高了67.1%、63.2%、378%。     

量子力学和分子力学组合方法及其应用

QM/MM组合方法在研究凝聚态中的化学反应及生物大分子的结构和活性之间的关系等方面已取得重要进展。这一方法的要点在于将大体系配分成几部分,根据需要对不同部分进行不同级别的处理,因此既利用了量子力学的精确性,又利用了分子力学的高效性。对QM/MM组合理论及其一些最新进展作一简单介绍,并以最近进行了几个工作为例说明QM、MM组合方法的应用。     

环状酰亚胺不对称还原烷基化的一些结果

苹果酰亚胺的不对称还原烷基化是合成γ-内酰胺的有效方法,为扩大该法的应用范围,本文研究了多种环状酰亚胺的还原烷基化反应。探讨了影响还原烷基化反应的因素并提出相关的解释。总结出3-取代和3,4-二取代琥珀酰亚胺可成功地进行还原烷基化的规律,并提出了相应的解释。     

L-乳酸脱氢酶催化反应机理的ab initio研究

应用ab initio方法在HF/6-31G*水平上对L-乳酸脱氢酶催化反应机理进行了研究.结果表明,H_R^-的转移是丙酮酸盐转化为L-乳酸盐反应的速度控制步骤,并且,H_R^-与H_R⁺的转移是准同步进行的.反应的活化能为168.37 kJ/mol,反应物的复合物与产物复合物的能量差为?87.61 kJ/mol,丙酮酸转变为乳酸是吸热反应.与文献报道的半经验研究相比,计算结果的显著特征是:过渡态中辅酶上的吡啶环呈准船式构象而非平面构象;反应的H_R⁺转移步骤在结构及电荷特征上与低位垒氢键很相似.此外,过渡态中底物与L-乳酸脱氢酶的活性位之间存在着相当强的静电作用,伴随着过渡态的形成,底物上羰基的极性逐渐增强,有利于H_R^-的转移.这些计算结果与相关实验结论一致.计算结果还表明,过渡态中的“氢负离子”H_R^-实际上是一个带0.13个单位正电荷的阳离子,这一结果与文献报道的半经验计算结果一致.     

亲和层析分离纯化乳酸脱氢酶

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,氨基三乙酸为配基,制备固载铜离子的金属螯合亲和吸附剂,层析分离纯化乳酸脱氢酶(LDH),收得率为23.3％,纯化倍数达3.1.实验结果表明该亲和层析固定相对LDH有较高的分离纯化选择性.     

五种医用酶的硫酸铵分级分离研究

采用硫酸铵分级沉淀法从一种兔肌匀浆上清中分步分离出醛缩酶、乳酸脱氢酶、丙酮酸激酶、肌酸激酶和磷酸甘油醛脱氢酶等五种医用酶。该法步骤简单、分离周期短、酶活回收率高、具有较大的实用价值。     

微分脉冲极谱法研究稀土离子对乳酸脱氧酶活性的影响

根据前文黄瓜根系伤流液中微量Ｌａ＾３＋，Ｅｕ＾３＋明显影响氨基酸代谢的结果，用记时电流法研究了稀土对氮同化过程中硝酸还原酶和谷氨酸脱氢酶活性的影响，酶活性的变化以辅酶ＮＡＤＨ氧化电流在反应中的衰减速度来表示。用微分脉冲极谱法研究稀土离子对丙酮酸转化为乳酸反应中乳酸脱氢酶活性的影响，以反应产物ＮＡＤ＾＋的还原电流的大小表示酶活性的变化。研究结果表明Ｌａ＾３＋在低浓度下对酶活性有微弱的促进作用其他稀土