大肠杆菌O157:H7基因组研究进展

对大肠杆菌O157：H7基因组的结构、特点等近年来的研究进展进行了综述。     

SARS冠状病毒N蛋白的表达及二级结构预测分析

通过RT-PCR获得SARS冠状病毒N蛋白基因，分别克隆到原核表达载体pET21a，pET32a和pGEX-4T-1中，将3种重组质粒pET2la-N，pET32a-N和pGEX-4T-1-N分别转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导，细菌中分别表达出约46kD的重组N蛋白、约60kD的6xHis-N融合蛋白和约70kD的GST-N融合蛋白，表达量分别达总蛋白的45％、40％和30％．进一步的分析表明：6xHis-N融合蛋白在大肠杆菌中为可溶性表达，该可溶性组分占细菌裂解液的70％左右，且能被6xHis抗体所识别．用蛋白分析软件对N蛋白进行了序列分析和二级结构预测．SARS冠状病毒N蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达，有助于进一步结晶后进行X射线晶体衍射分析其结构与功能．     

水稻条斑病细菌（Xanthomonas oryzae pv．oryzicola）Wzt基因参与LPS O-抗原合成和影响细菌致病性

ABC-转运系统将同质O抗原多糖链从细胞质内膜转运到细胞周质空间合成脂多糖(LPS)．通过功能互补和亚克隆序列分析在X．oryzae 　pv．oryzicola的基因组文库中发现了一个Wzt基因，该基因编码产物是运输O-抗原的ABC-转运系统的疏水组成部分,为ATP-结合蛋白．为区别基因来源将该基因命名为Wzt_Xooc．Wzt_Xooc编码一个35．9ku的蛋白质．通过分析发现,Wzt_Xooc与数据库中的其他细菌包括水稻白叶枯病菌的ABC转运系统的ATP结合蛋白质不同．在WztXooc序列中仅发现ATP-结合蛋白中4个保守基序的3个，没有发现ATP-结合位点Walker A（ATP/GTP binding site motif A）． 通过基因插入突变得到Wzt_Xooc基因突变体Mwzt．LPS分析表明：由于该基因突变使O-抗原链不能转运通过细胞质膜，不能形成完整的LPS分子,突变体菌落表面丧失了产生大量胞外多糖的能力；突变细菌不产生鞭毛，丧失了游动性和生物膜形成的能力．重要的是突变体在水稻上的繁殖能力和致病性明显下降，证明Wzt_Xooc基因与LPS合成及致病性有关．     

美国：大肠杆菌做“胶卷”

大肠杆菌是与人类共生的最常见病菌，会引起食物中毒和腹泻。但是，美国科学家用基因工程方法改造的大肠杆菌，却能成为感光度很高的“生物胶卷”。科学家们的这一创造是得到蓝藻的启发。早先的研究已发现，蓝藻的光合作用由一系列基因参与。     

八肋游仆虫信息素在大肠杆菌中的表达

信息素在八肋游仆虫接合生殖过程中起着重要的诱导配对作用，为了进一步研究其诱导机制，根据已知的基因序列，应用PCR技术，扩增信息素G3基因，并将该基因插入表达载体pGEX-6P1中，构建了重组表达质粒pGEX-6P1-G3．重组菌在37℃下，经1．0mmol／L IPTG诱导，12％SDS-PAGE分析，在37kDa处出现明显的特异目的带。     

松材线虫携带细菌的致病性

用松材线虫携带的3种细菌（菌株Njh,菌株Njt和菌株Njw)和2种线虫（松材线虫和拟松材线虫）为接种体，以黑松愈伤组织和黑松无菌苗为接种对象，分别用无菌线虫单独接种，细菌单独接种，细菌和无菌松材线虫混合接种，细菌和无菌的拟松材线虫混合接种等，测定对黑松愈伤组织和黑松无菌苗的致病能力，接种试验结果表明，单独用无菌松材线虫或松松材线虫接种，均不能使黑松愈伤组织褐变和无菌黑松苗枯萎，而用无菌线虫与上述3种细菌分别混合接种均能使黑松无菌苗发生枯萎及愈伤组织严重褐变，其中线虫和菌株Njh，线虫和菌株Njt致萎活性很强，线虫和菌株Njw致萎活性较弱，在自然界致病力弱的拟松材线虫与细菌混合接种同样能引起松苗严重萎蔫及愈伤组织褐变，实验室条件下，人工接种幼苗病害的发生与松材线虫携带的细菌密切相关，而与线虫的在关系不大，松材线虫所携带的细菌在这一病害过程中起至关重要的作用。     

重组人截短型IL-6在大肠杆菌DH5α中的高效表达与纯化

为研究重组人截短型白细胞介素6(rhIL-6)工程菌高效表达的影响因素及纯化方法的优化.观察不同培养温度对重组人截短型IL-6工程菌生长密度和IL-6表达的影响;复性蛋白终浓度对复性效率的影响;细菌诱导培养后,经破菌-洗包-溶包初步纯化后,再经柱层析纯化IL-6.其结果为30℃培养后42℃诱导培养5h的IL-6表达效率最高,达32.8%;复性蛋白终浓度在0.5 g/L以下时,蛋白复性效率最佳,比活性为4.42×108 μmol/min*mg-1;进一步柱层析后,IL-6的纯度达96.5%,得率可达46.5%.最后得出培养和纯化工艺简便易行,可获得高纯度、高比活性的截短型rhIL-6的结论.     

纳豆激酶基因克隆及其在大肠杆菌中活性表达研究

以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板，PCR扩增了纳豆激酶基因（natto kinase gene）中编码前肽、成熟肽的核苷酸序列（pro-NK），构建大肠杆菌表达质粒pTYB102，转化大肠杆菌ER2566。在IPTG诱导下，分别在15℃（14h）、30℃（3h）、37℃（2h）条件下培养，pTYB102均能表达出有活性的纳豆激酶。实验证实纳豆激酶基因得到活性表达需要Pro序列。SDS－PAGE表明，15℃和30℃和37℃培养表达的杂蛋白更少。薄层扫描测定表达的纳豆激酶占菌体总蛋白30％以上。     

大肠杆菌的伏安行为及薯蓣皂甙元对该行为的影响

研究了不同条件下大肠杆菌的伏安行为,该伏安峰电流与大肠杆菌的活性呈正比.通过伏安法所获得的大肠杆菌的增长曲线相似于细胞计数法所获得的结果.这种电化学方法被用于研究天然药物前体薯蓣皂甙元对大肠杆菌的影响,结果显示,该化合物能显著降低培养过程中大肠杆菌的伏安行为,具有良好的抗菌活性,可用作抗菌药.