海洋来源褐藻胶裂解酶分离纯化及酶学性质研究

以假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.zb7-4)发酵制备褐藻胶裂解酶粗酶液,采用弱阴离子DEAE交换层析分离褐藻胶裂解酶,分析纯化褐藻胶裂解酶Alg L的酶学特性.结果表明:Alg L的表观分子质量约为32 ku,比活力为(208.26±5.87)U·mg-1;其最适反应pH为7.0,在pH为6.0~10.0范围内稳定性较好,保温1 h仍能保持80%以上的相对酶活力;最适反应温度50℃,在40℃保温30 min,其残余酶活力高于80%;Cu2+、Cr3+、Co2+、Ba2+、Sr2+、Hg2+对该酶具有不同程度的抑制作用,Hg2+抑制作用最为明显;该酶具有较好的盐耐受性,在3 mol·L-1Na Cl反应体系中保温2 h,仍残余66%酶活力.动力学参数Km、Vmax、Kcat测定表明,该酶对聚古罗糖醛酸钠(PG)亲和力较高,为偏好聚甘露糖醛酸钠(PM)裂解作用的双功能酶.     

应用大孔吸附树脂纯化三七总皂苷

目的: 探讨大孔吸附树脂对三七提取物的纯化条件及纯化效果.方法: 以三七总皂苷作为有效部位,通过三七总皂苷在树脂上的吸附量和解吸率筛选树脂的种类;以三七总皂苷的转移率和纯度为指标考察上柱吸附流速,清洗液的流速,洗脱液的种类、流速,树脂药材比,树脂柱径高比等纯化条件.与醇沉法进行纯化效果的比较.结果: 采用HPD 300作为吸附树脂,树脂药材比为4∶1,树脂柱径高比为1∶6,70%乙醇作为洗脱液,上柱吸附流速为6 BV·h-1,清洗流速为20 BV·h-1,洗脱流速为12 BV·h-1.该纯化条件下,三七总皂苷的转移率为95.4%,纯度为77.2%.与醇沉法相比,三七总皂苷的转移率约为醇沉法的1.1倍,纯度约为醇沉法的2.3倍.结论: 通过纯化条件的优化,大孔吸附树脂法可提高三七总皂苷的纯化效果,优于醇沉法.     

磁性琼酯糖亲和吸附剂的合成与应用

采用反相悬浮包埋技术合成了粒径在43-295μm之间的磁性琼脂糖微球。磁性琼脂糖微球经环氧氯丙烷活化后，分别键合6-氨基已酸、氨基乙酸和乙二胺为间隔臂，用水溶性碳二亚胺为缩合剂，分别偶联对氨基苯甲脒、l-精氨酸甲酯和胍基已酸，制备了3种磁性亲和吸附剂，并用于尿激酶粗品的分离纯化。测定了活性回收率和比活提高倍数，并与以磁性葡聚糖为基质的磁性亲和吸附剂对尿激酶的纯化效果进行了对比。     

两种盐对质粒DNA提取的影响

随着基因治疗及基因疫苗的不断发展,质粒的需求量迅速增加。通过以pcDNA3为目的产物,考察了在其提取过程中硫酸铵和氯化钙的加入对pcDNA3收率的影响和对杂质的去除效果。实验发现:硫酸铵和氯化钙的加入都可以明显降低质粒提取液中蛋白质、RNA杂质的含量;但是氯化钙在降低蛋白质和RNA含量的同时也降低了质粒DNA的收率。硫酸铵是去除蛋白质、RNA杂质的良好试剂,同时能够保持较高的质粒DNA收率。当质粒提取液中硫酸铵浓度加入到2.5M时,质粒的纯化因子可达到10.2,而收率在90%以上。     

华中枸骨叶总黄酮纯化及抗RA滑膜炎症活性评价

以总黄酮含量和转移率为评价指标,采用多种方法提取纯化华中枸骨叶总黄酮(ICTF),并以TNF-α诱导人关节滑膜成纤维细胞MH7A为滑膜炎症细胞模型评价其抗RA滑膜炎症活性,试剂盒测定炎症介质NO含量,RT-qPCR检测炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8mRNA的转录水平.结果表明,华中枸骨叶乙醇总提取物经石油醚脱脂...     

兔肌肌酸激酶的分离纯化及部分性质的测定

本文提供了一个新开出的生物化学综合性教学大实验,完成本实验约需４天。实验中用到了多种重要的生化实验技术,对全面训练学生的实验能力有重要价值     

桃耳七中鬼臼毒素的分离与纯化

来自太白山的小檗科植物桃耳七(Sinopodophyllum emodi Wall.)中含有一种抗肿瘤的木脂素--鬼臼毒素.为了通过简便的方法从桃耳七中制得纯度较高的鬼臼毒素,对分离纯化鬼臼毒素的方法进行了研究.发现鬼臼毒素在苯中析出时能生成一种苯加合物,根据这一特性,在不使用柱层析法的情况下,只通过普通的化学分离法制得了质量分数大于95%的鬼臼毒素,总产率为1.7%.     

固定金属离子亲和色谱--蛋白质分离的方法、原理、特性和应用

介绍了固定金属离子亲和色谱法(IMAC)的方法原理、金属螯合柱的制备、固定金属离子与蛋白质的相互作用以及影响这些作用的因素、不同色谱条件下各种作用力对蛋白质保留值的贡献、蛋白质的洗脱原理和IMAC在蛋白质分离纯化中的应用,论述了IMAC的特点、不足、克服的方法和今后应解决的问题。     

制备液相色谱-台阶梯度法分离纯化杜仲中三种环烯醚萜化合物

杜仲是我国特有的名贵中药材,其叶和皮中含有京尼平甙酸(GPA)、京尼平甙(GP)、桃叶珊瑚甙(AU)等环烯醚萜类成分^[1],有降血压^[1,2]、抗肿瘤、利胆保肝、提神、抗疲劳、增强免疫功能、抗肌肉骨骼老化等功效^[3,4]。环烯醚萜各组分的化学结构相似,一般方法难以完全分离。本文首次采用新型制备高效液相色谱技术,从杜仲样品中同时制备了AU、GPA、GP 3种单体。