近海海洋真菌生物转化(+)-柠檬烯

以厦门近海海域分离到的30株海洋真菌为出发菌株,通过液体发酵法考察其生物转化(+)-柠檬烯的能力,采用气相色谱-质谱(GC-MS)技术结合NIST数据库对其代谢产物进行化合物分析.结果表明:23,27,36,41号真菌具有生物转化柠檬烯的能力,其主要代谢产物暂定为异辣薄荷烯酮、波斯菊萜、1,3,8-孟三烯、香芹醇等;在23,36号真菌的代谢产物中,异辣薄荷烯酮为唯一主要产物,具有进一步研究开发的价值.     

液相色谱-质谱联用-定向进化酶组合技术应用于三萜类皂苷转化研究

利用定向进化技术重组糖苷酶ABQ,转化不同结构的三萜类皂苷(商陆皂苷甲、三七皂苷R₁和柴胡皂苷A),通过高分离度液相色谱-四极杆飞行时间质谱鉴定转化的产物结构,阐明其转化机制。结果表明,重组糖苷酶ABQ能够催化商陆皂苷甲、三七皂苷R₁和柴胡皂苷A侧链糖苷键的水解,转化为商陆皂苷乙、三七皂苷R₂、柴胡次皂苷F和柴胡皂苷元F。根据色谱-质谱对反应产物的实时分析,ABQ对这3种三萜皂苷表现出不同的底物选择性,重组糖苷酶ABQ能够催化商陆皂苷甲C-3位外侧的葡萄糖水解,生成商陆皂苷乙;三七皂苷R₁的C-20位葡萄糖被水解,生成三七皂苷R₂;重组糖苷酶ABQ能够首先催化柴胡皂苷A的C-3位葡萄糖水解,生成柴胡次皂苷F,并继续催化C-3位的岩藻糖苷水解,生成柴胡皂苷元F。定向进化技术重组酶能够提高酶活力和作用环境适应能力,色谱-质谱联用通过原型和产物实时检测评价重组酶的作用。     

Density Functional Theory Study on the Histidine-assisted Mechanism of Arylamine N-Acetyltransferase Acetylation

Arylamine N-acetyltransferases （NATs, EC 2.3.1.5） catalyze the N-acetylation of primary arylamines, and play a key role in the biotransformation and metabolism of drugs, carcinogens, etc. In this paper, three possible reaction mechanisms are investigated and the results indicate that if the acetyl group directly transfers from the donor to the acceptor, the high activation energies will make it hard to obtain the target products. When using histidine to mediate the acetylation process, these energies will drop in the 15-45 kJ/mol range. If the histidine residue is protonated, the corresponding energies will be decreased by about 35-87 kJ/mol. The calculations predict an enzymatic acetylation mechanism that undergoes a thiolate-imidazolium pair, which agrees with the experimental results very well.     

微生物转化美伐他汀为普伐他汀的研究

从转化培养基、接种重、底物添加时间、底物初始浓度和底物添加方式5个方面研究了菌株Streptomyces sp.108转化美伐他汀(底物)的能力,并在2．5L发酵罐上探索了最适的底物运行浓度。结果表明,适量增加底物浓度,尤其是阃歇性添加底物,能够提高普伐他汀产量;当底物运行浓度在4．50mg/L左右时,转化率可达55％,普伐他汀终浓度可达1088mg/L.     

人参二醇类皂苷的生物转化动态及人参稀有皂苷C-K或F2的制备

为了低成本有效制备人参稀有皂苷C-K或F₂, 将A. niger g.848菌酶用于转化含有人参皂苷(质量分数)分别为49.6% Rb₁, 25.9% Rd, 19.3% Rc和5.23% Rb₂的西洋参二醇混合皂苷. 霉菌发酵时, 采用人参二醇皂苷诱导物比人参提取液诱导物的产酶总活力提高10%~15%. 所产的2种诱导酶均能水解人参二醇皂苷的3-O-和20-O-多种糖基, 均为人参皂苷酶Ⅰ型; 但是人参二醇皂苷诱导物所产酶几乎全部转化人参二醇皂苷为C-K, 而人参提取液诱导物所产酶则残留中间产物. 使用黑曲霉人参二醇皂苷诱导所产酶, 在转化西洋参二醇皂苷的动态研究中发现, 酶反应1.5~2.5 h, 主要为产物F₂; 酶反应12 h后, 主要产物为C-K皂苷. 基于此, 40 g人参二醇类皂苷在45 ℃粗酶反应24 h, 经处理得到含C-K质量分数为87%的23 g酶反应产物, C-K转化率达85%(摩尔分数). 用40 g西洋参二醇皂苷在45 ℃粗酶反应2.5 h, 经处理得到含有质量分数为58%的F₂和27%的C-K的26 g酶反应产物, F₂转化率为50.4%, C-K转化率为29.5%. 通过人参二醇皂苷诱导的黑曲霉粗酶转化人参二醇类皂苷动态研究, 建立了C-K转化率为85%, F₂转化率为50%的制备方法, 为大批量制备提供了基础依据.     

桑肠杆菌VL4-3转化阿魏酸生产香兰素

对能转化阿魏酸生成香兰素的一株桑肠杆菌VL4-3的发酵培养基、发酵培养条件、种子培养基和种子培养条件进行优化.确定了液体发酵的最佳培养基:麸皮10g/L,豆粕1g/L,氯化钠0.5g/L,硫酸亚铁0.5g/L,pH=8;最佳发酵培养条件:接种量10%,摇瓶装液量10%,阿魏酸最大加入量10g/L,37℃,100r/min,避光培养12d;最佳种子培养基:牛肉膏蛋白胨培养基;最佳种子培养条件:25℃,100r/min,24h.在上述优化发酵条件下,发酵液中香兰素最大浓度为2 262.43mg/L,最大转化率为28.87%.     

超声波对黄芩苷生物转化的影响

采用超声波技术对黄芩苷转化培养液进行处理,研究超声波处理对黄芩苷转化效果的影响.高效液相色谱检测显示,只有培养液经超声波处理的实验组中有苷元黄芩素的吸收峰出现,超声波处理对黄芩苷生物转化有显著影响.实验确定超声波最佳处理条件为频率40kHz,时间40min.     

胜红蓟内生真菌转化柠檬烯产物的抑菌活性

为考察入侵植物胜红蓟内生真菌转化柠檬烯产物的抑菌活性,以柠檬烯二醇作为标品对照,采用薄层色谱法筛选具有转化柠檬烯能力的胜红蓟内生真菌.通过气相色谱-质谱法对菌株的转化产物进行分析,并对其生物转化柠檬烯发酵液乙酸乙酯粗提物的抑菌活性进行研究.从22株胜红蓟内生真菌中共筛选得到14株具有转化柠檬烯能力的菌株,其中,有6个菌株的柠檬烯转化乙酸乙酯粗提物中含有柠檬烯-1,2-二醇;菌株Diaporthe phaseolorum(wl01)的柠檬烯转化产物中,柠檬烯-1,2-二醇的质量浓度最高(3.43 mg·mL^-1);菌株Alternaria alternata(wp06)生物转化柠檬烯发酵液的乙酸乙酯提取物对柑橘意大利青霉类致病菌有一定的抑制效果,对意大利青霉的抑菌效果为(40.03±3.58)%.     

海洋病原细菌Pseudomonas sp.ER22对氯霉素中间体的手性转化

海洋病原细菌PSEUDOM ONAS SP.ER22(CMR,M IC=64ΜG/ML)接种在含有25ΜG/ML标准品氯霉素中间体(D-(-)-苏-2-氨基-1-对硝基苯基-1,3-丙二醇)LB培养基中培养24 H后,可检测到由(1R,2R)形式转化生成(1S,2S)对映体。LC-MS/MS分析显示互为对映体的特征指纹峰相同(M/Z213),保留时间分别为3.74 M IN和4.98 M IN。