用膜片钳研究CuCl2对萝卜液泡膜SV通道的影响

用膜片钳全液泡记录方式研究了CuCl2对萝卜SV通道的影响.研究表明,SV通道为阳离子选择性通道,细胞质钙可激活此通道,且其表现出钙依赖性.细胞质钙达2mmol/L时,SV通道电流基本上达到饱和.当在外液中加入不同浓度的CuCl2时,SV通道电流有明显的变化.高浓度的铜离子对通道电流有抑制作用,而低浓度(<0.1mmol/L)则增强通道电流.电极内液中的CuCl2对SV通道电流也有抑制作用.这为进一步研究铜离子对植物生理活动的影响以及铜肥对农作物的作用在通道水平上提供重要的依据.     

穿山龙液泡H+-ATPase c亚基基因片段的克隆

利用抑制消减杂交（SSH）和SMART技术，构建了3年生和1年生穿山龙（Dioscorea nipponica）根组织mRNA群体间正向差减cDNA文库．从34个随机测序的cDNA克隆中，发现了1个编码液泡H^＋-ATPase（V-H^＋-ATPase）c亚基的克隆，并命名为DnvHAc1（Accession No：DN792564）．序列同源性分析表明，其cDNA序列长486bp，3’端具有PolyA结构，其编码的氨基酸序列（115个氨基酸残基）也与多种植物的液泡H^＋-ATPase c亚基（16kDa proteolipids）具有较高同源性，具有3个跨膜疏水结构域，结构域Ⅲ为功能保守的区域，有dicyclohexylcarbodimide（DCCD）结合位点，Glu-92在调节液泡H^＋-ATPase具有重要作用．该研究结果为克隆其全长基因和进一步研究其在薯蓣皂甙次生代谢生物合成中的功能提供了重要的实验基础．     

小麦液泡质子焦磷酸酶基因EST的克隆与分析

通过RT-PCR的方法在矮苏3小麦的总cDNA中克隆到一个与大麦液泡质子焦磷酸酶基因(VP)高度同源的EST。以该序列为基础,利用生物信息学的方法构建了一个编码小麦VP蛋白的全长EST重叠群,长2764bp,其包含一个长2355bp的完整开放读码框(ORF),编码785个氨基酸多肽。通过Southern杂交,将该VP基因定位在小麦染色体的第7同源群上。     

液泡分离技术及液泡在植物抗盐中的作用

本文介绍了从高等植物分离完整液泡的方法和液泡在植物抗盐中的作用.液泡的分离方法有机械分离法和由原生质体分离液泡两种.液泡在植物抗盐中的作用是:(1)增加细胞内溶质浓度,避免生理干旱.(2)减弱盐离子对细胞质的毒性.本文还提出了液泡生理研究中存在的问题和对未来研究的展望.     

鱼腥藻sP.PCC 7120液泡的诱导和分离

将蓝藻培养于含0.05mol/LNaCl的液体培养基,3d后细胞结构改变,出现无色透明区.将此材料经溶菌酶处理形成原生质球,然后降低渗透压,原生质球破裂,液泡释放.此液泡为极为标准的园球状,完全透明,泡体内无可辩物质.电镜检查表明为一个单一膜所包围,泡内没有内囊体等细胞内物质,该膜亦显示典型三明治状单位膜结构.     

小麦液泡膜H^＋—ATPase的Ca^2＋激活特性

纯化小麦液泡膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ,测定了纯化的小麦液泡膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ受Ｍｇ＾２＋和Ｃａ＾２＋双重激活的特性及两种激活状态下酶的特性,Ｍｇ＾２＋激活时酶水解活性受ＤＣＣＤ的抑制,受旨酰丝氨酸（ＰＳ）影响明显,ＡＴＰ水解和泵质子活性相偶联,而在Ｃａ＾２＋激活时酶水解活性不受ＤＣＣＤ抑制,受ＰＳ影响微弱,Ｃａ＾２＋激活时ＡＴＰ水解与泵质子活性解偶联,Ｍｇ＾２＋和Ｃａ＾２＋对小麦液泡膜Ｈ＾＋－Ａ     

用镀锇法显示植物细液泡内含物的电镜技术

在常规电镜制样的植物细胞中,液泡常为无任何结构的空泡,这与其复杂(?)能不相适应。本实验以莼菜茎为材料,分别用六氨银多糖染色法和镀豚法进行了处理,结果表明镀豚法能显示出液泡及高尔基体囊泡中的内含物。这些内含物为多糖类物质,其合成分泌过程经镀豚法处理后显示得更为直观。     

马铃薯低温启动子CIP的克隆及其功能鉴定

合适的启动子有利于基因的高效表达．本研究从鄂马铃薯-3中克隆了低温诱导的启动子（CIP）,并调控转化酶抑制子基因转化马铃薯植株,以抑制马铃薯块茎发生的“低温糖化”．实验结果表明,克隆的CIP与报道的低温诱导的启动子序列同源性达98．9％,含有启动子的典型结构．构建CIP与转化酶抑制子（St-VIF）基因的载体成功转化马铃薯并获得转基因株系．转基因株系收获块茎在4℃和20℃贮藏lm,Nothern杂交显示St-VIF基因在4℃大量表达,检测转化酶活性表明,与对照比较液泡转化酶活性大大降低,说明通过低温诱导CIP调控St-VIF基因的表达能够抑制转化酶的活性,从而降低还原糖的积累．     

液泡前体蛋白质的双向电泳分离和质谱分析

该文通过改进双向电泳方法克服了膜蛋白由于有疏水性而很难进入双向电泳第一相——等电聚焦电泳凝胶,以及由于从蔗糖密度梯度离心中分离得到的液泡前体富含干扰等电聚焦电泳效果的蔗糖等两大难点,成功地分离了通过蔗糖密度梯度离心分离得到的液泡前体蛋白,并使膜蛋白进入了双向电泳凝胶.双向电泳后分离到约200余个蛋白质点,用基质辅助激光解吸/电离飞行时间串联质谱(MS/MS)进行肽质量指纹谱分析,并通过数据库检索进行蛋白质鉴定与功能预测,分析的23个蛋白中有13个在数据库中没有找到相对应的吻合蛋白,查询到的10个吻合蛋白中有6个功能未知.     

膜片钳法研究镁离子对萝卜液泡膜SV通道的影响

用膜片钳全液泡记录方式研究了Mg^2＋对萝卜(Raphanus sativus L.)液泡膜上SV通道电流的影响. 结果表明: 用EGTA配位Ca^2＋后, 胞质Mg^2＋不能够代替Ca^2＋来激活SV通道; 外液中不同浓度的Mg^2＋对通道电流有抑制作用, 并且呈一定的浓度依赖性, 用Hill方程拟合浓度依赖性曲线, 得抑制常数K_i＝(1.94±0.11) mmol/L, 而内液中的Mg^2＋不影响通道电流. 这一结果为进一步研究镁对植物生理活动的影响从通道水平提供了重要依据.