基于核酸酶安培型电化学生物传感器的示差脉冲伏安法测定纺织品中的铅

建立基于核酸酶安培型电化学生物传感器的示差脉冲伏安法测定纺织品中铅的含量。信号探针集成的核酸酶17E DNAzyme铅离子识别体系组装在金纳米粒子修饰的金基底电极上,同时作为生物识别元件和信号元件。采用三电极体系,以0.1 mol/kg的NaClO_4溶液为电解质溶液。调整时间为50 ms,间隔时间为0.5 s,调制振幅为50mV,阶跃电势为5 mV,扫描范围为0.15～0.55 V,采用示差脉冲伏安法测定铅离子。铅离子的质量浓度c在0.020～2.0μg/kg范围内,其对数lgc与电极峰电流信号的变化率(I_0–I)/I_0呈良好的线性关系,线性相关系数为0.992 4,方法检出限(S/N=3)为1.3μg/kg。测定结果的相对标准偏差为2.5%～4.0%(n=6),加标回收率为91.4%～105.3%。该方法与国标法的测定结果无显著性差异。该传感器对铅离子的检测具有良好的选择性,实现了对溶液中铅离子的无试剂化检测。该方法操作简便,准确度高,可用于纺织品铅含量的检测。     

金黄色葡萄球菌核酸酶及其突变体酶动力学性质的比较

将金黄色葡萄球菌核酸酶的类似物及其不同点突变体的基因进行表达，经Ｂｉｏ－Ｒｅｘ７０柱层析及尿处理进行分离纯化，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示一条蛋白带，相对分子质量约为１７ｋＤ。测试了它们的比活力，Ｋｍ，Ｖｍａｘ，Ｋｉ等酶动力学参数。结果表明，ＳＮａｓｅＲ与ＳＮａｓｅ的催化活性无显著差异，但ＳＮａｓｅＲ对底物的亲和力明显增加。     

NM23—H1和NM23—H2可切割血小板起源的生长因子—A基因启动子中的核酸酶敏感成发

PDGF－A基因的转录由几个GC丰富的、高度单链的、非B型结构的增强子和沉寂成发所调节，其中一个沉寂子位于PDGF－A启动了远上游5′端（－1418－1388），命名为5′SHS。重组人NM23－1T上和NM23-H2可分别在3′和5′端切割单链、双链形式的5′SHS的两条链，表明NM23－H1和NM23－H2在不同位点，以不同机制切割5′SHS.NM23－H1和NM23－H2也可分别在3′和5′端切割双链形式的PDGF－A启动子中的NHE成分（－82－－50）；此外，NM23－H1也可在3′端切割PDGF－ANHE成分的无意义链（Py链）。     

La(Ⅲ)对Bal31核酸酶活性的影响

探讨了Bal31核酸酶在无Ca(Ⅱ)体系中能否依赖稀土离子La(Ⅲ)从两端降解线性DNA分子.发现了 1 mmol/L 的La(Ⅲ)能激活Bal31核酸酶, 从而快速酶解线性DNA.表明了Ca(Ⅱ)并不是文献中所说的唯一能激活Bal31核酸酶的离子. 用液相色谱(HPLC)分别检测Ca(Ⅱ)、La(Ⅲ)体系的酶解产物,结果表明:虽然后者酶解CG 碱基对的速率只约为前者的60%.但两体系对AT碱基对的酶解速度相近.     

间断基因的剪接

介绍了间断基因的剪接实例、剪接方法和影响剪接的因素。     

基于酶剪切量子点荧光放大技术的双元miRNA定量检测

将量子点荧光特性与双链特异性核酸酶的DNA剪切特性相结合,提出一种高灵敏度、高特异性的双元miRNA定量检测方案.首先,将量子点和四氧化三铁磁性纳米粒子分别与捕获DNA链接形成捕获探针,再与待测miRNA互补配对形成异源双链杂合结构,随后双链特异性核酸酶对杂合结构中的捕获DNA进行特异性剪切,实现量子点和待测miRNA从捕获探针分离,且分离的待测miRNA与捕获探针上未配对的DNA开始新一轮杂交和再剪切.经过上述循环过程,量子点从捕获探针大量释放,荧光信号不断增强,实现肿瘤标志物miRNA的高灵敏检测.实验结果表明,基于酶剪切量子点荧光放大技术,在1fmol/L至100pmol/L的浓度范围内,同时实现了肿瘤标志物miRNA-141及循环miRNA内参miRNA-1228的特异性定量检测,其检出限分别达到0.69fmol/L和0.21fmol/L.与实时荧光定量多聚核苷酸链式反应方法相比,该方案获得了相同的检测结果,且具有更高灵敏度.     

吉林市小学生抗链菌脱氧核糖核酸酶B滴度测定

目的：研究吉林市１０～１１岁小学生链球菌的感染状况方法：用ＡＤＮａｓｅ Ｂ微量法对吉林市１０～１１岁城乡小学生做抗链菌脱氧核糖核酸酶Ｂ（ＡＤＮａｓｅ Ｂ）滴度测定。结果：城市小学生ＤＮＡ酶Ｂ抗体平均几何滴度为５６ｕ／ｍｌ、农村为５９ｕ／ｍｌ。城市与农村的测定结果无明显差异。结论：由于此种抗体的滴度可以标准化,因此推荐ＡＤＮａｓｅ Ｂ作为除ＡＳＯ外应测定的第二抗体。     

二十六元大环双核铜配合物与DNA的相互作用

合成一个二十六元大环双核铜配合物Cu2LCl4*3H2O,通过元素分析和红外光谱表征了该化合物,利用紫外_可见光谱、荧光光谱研究了该配合物与小牛胸腺DNA的相互作用,光谱结果表明配合物以插入方式与DNA结合,琼脂糖凝胶电泳实验显示此配合物在H2O2的存在下,对pUC18DNA具有较高的断裂效率,初步证实了该配合物作为化学核酸酶的可能性.     

基于DNAzyme的单链核酸酶活性研究

本文报道了一种基于DNAzyme的可视检测单链核酸酶活性的新方法.DNAzyme是一种具有类过氧化物酶活性的单链DNA分子,在H_2O_2存在下能够催化无色底物2,2′-连氮基-双-(3-乙基并二氢噻唑啉-6-磺酸)二价阴离子(ABTS~(2-))氧化成蓝绿色物质ABTS~-·5自由基.催化体系中单链核酸酶的加入能水解DNAzyme,导致被DNAzyme催化的ABTS~-·5减少,从而可以通过颜色变化和紫外-可见吸收光谱检测相应的单链核酸酶活性.以Dnase I和S1核酸酶作为单链核酸酶代表进行实验,实验结果表明对Dnase I检测的线性范围为0.5 ～5 U/mL,检出限为0.15 U/mL;对S1核酸酶检测的线性范围为1～10 U/mL,检出限为0.11 U/mL.该方法还能用于单链核酸酶抑制剂的检测,结果表明:Zn~(2+)对Dnase I的半数抑制浓度(Ic_(50))为56.4 mol/L,焦磷酸盐对S1核酸酶的Ic50为1.17 mmol/L.     

核酸酶P1活性中心金属离子与氯化钴(Ⅱ)相互作用

核酸酶P1是一种重要的DNA与RNA水解酶。本文利用ICP、VIS、NMR、酶活性测定等分析方法，首次拓展研究了核酸酶P1与CoCl₂的直接相互作用。结果发现：核酸酶P1活性中心Zn(Ⅱ)离子可被外加CoCl₂中的Co(Ⅱ)部分取代，而Co(Ⅱ)进入酶的活性中心，生成相应的酶衍生物“Co(Ⅱ)-P1”，并影响了酶的催化活性。与此同时还获得了Co(Ⅱ)进入核酸酶P1活性中心Zn2位上的酶衍生物 ¹H NMR谱。