基于酶剪切量子点荧光放大技术的双元miRNA定量检测

将量子点荧光特性与双链特异性核酸酶的DNA剪切特性相结合,提出一种高灵敏度、高特异性的双元miRNA定量检测方案.首先,将量子点和四氧化三铁磁性纳米粒子分别与捕获DNA链接形成捕获探针,再与待测miRNA互补配对形成异源双链杂合结构,随后双链特异性核酸酶对杂合结构中的捕获DNA进行特异性剪切,实现量子点和待测miRNA从捕获探针分离,且分离的待测miRNA与捕获探针上未配对的DNA开始新一轮杂交和再剪切.经过上述循环过程,量子点从捕获探针大量释放,荧光信号不断增强,实现肿瘤标志物miRNA的高灵敏检测.实验结果表明,基于酶剪切量子点荧光放大技术,在1fmol/L至100pmol/L的浓度范围内,同时实现了肿瘤标志物miRNA-141及循环miRNA内参miRNA-1228的特异性定量检测,其检出限分别达到0.69fmol/L和0.21fmol/L.与实时荧光定量多聚核苷酸链式反应方法相比,该方案获得了相同的检测结果,且具有更高灵敏度.     

金黄色葡萄球菌核酸酶及其突变体酶动力学性质的比较

将金黄色葡萄球菌核酸酶的类似物及其不同点突变体的基因进行表达，经Ｂｉｏ－Ｒｅｘ７０柱层析及尿处理进行分离纯化，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示一条蛋白带，相对分子质量约为１７ｋＤ。测试了它们的比活力，Ｋｍ，Ｖｍａｘ，Ｋｉ等酶动力学参数。结果表明，ＳＮａｓｅＲ与ＳＮａｓｅ的催化活性无显著差异，但ＳＮａｓｅＲ对底物的亲和力明显增加。     

基于核酸酶安培型电化学生物传感器的示差脉冲伏安法测定纺织品中的铅

建立基于核酸酶安培型电化学生物传感器的示差脉冲伏安法测定纺织品中铅的含量。信号探针集成的核酸酶17E DNAzyme铅离子识别体系组装在金纳米粒子修饰的金基底电极上,同时作为生物识别元件和信号元件。采用三电极体系,以0.1 mol/kg的NaClO_4溶液为电解质溶液。调整时间为50 ms,间隔时间为0.5 s,调制振幅为50mV,阶跃电势为5 mV,扫描范围为0.15～0.55 V,采用示差脉冲伏安法测定铅离子。铅离子的质量浓度c在0.020～2.0μg/kg范围内,其对数lgc与电极峰电流信号的变化率(I_0–I)/I_0呈良好的线性关系,线性相关系数为0.992 4,方法检出限(S/N=3)为1.3μg/kg。测定结果的相对标准偏差为2.5%～4.0%(n=6),加标回收率为91.4%～105.3%。该方法与国标法的测定结果无显著性差异。该传感器对铅离子的检测具有良好的选择性,实现了对溶液中铅离子的无试剂化检测。该方法操作简便,准确度高,可用于纺织品铅含量的检测。     

双核配合物作为人工酶的新进展

本文综述了近年来双核配合物作为人工酶的研究进展，讨论了这类配合物的催化水解机理及影响因素。     

腺相关病毒介导锌指核酸酶体外切除HIV-1基因组研究

人类免疫缺陷病毒1型(Human Immunodeficiency Virus type 1, HIV-1)能够整合到宿主细胞基因组并通过基因沉默的方式逃避高效抗逆转录病毒疗法(Highly Active Antietroviral Therapy, HAART),而高效特异性的基因编辑工具的出现，有望成功切除HIV-1前病毒基因组。重组腺相关病毒(AAV)是基因治疗的重要载体系统，为了获得能够高效感染T细胞的基因编辑工具递送系统，本研究通过比较过表达增强绿色荧光蛋白的血清型2、血清型6、血清型DJ的重组腺相关病毒，筛选出T细胞系的偏好血清型为6型。通过比较CMV启动子、SFFV启动子，筛选出T细胞系的偏好启动子为SFFV启动子。最后，我们通过制备过表达靶向HIV-1长末端重复序列(Long Terminal Region, LTR)的锌指核酸酶(Zinc Finger Nuclease, ZFN)的AAV6递送载体系统，感染模拟HIV-1阳性表达的细胞系Ya, T7E1检测证实HIV-1前病毒基因组被特异性切除，流式细胞仪检测证实切除效率约为17.1%,测序分析进一步证实靶向HIV-...     

核酸酶酶解-高效液相色谱法分析DNA碱基组成——介绍一个综合化学实验

介绍一个分析化学与生物化学交叉的综合化学教学实验及其教学方案的设计思路。该实验以高效液相色谱和核酸酶为工具,分析DNA的碱基组成。通过改革实验教学设计,加深学生对各个知识点的理解与运用,培养学生分析问题和解决问题的能力。     

席夫碱大环铜配合物的化学核酸酶活性研究

对3种结构相近的席夫碱四氮大环草酰胺铜配合物（CuL^1～3）的化学核酸酶活性进行比较研究。结果表明：这类配合物的化学核酸酶活性与中心金属离子的类型、配体的结构、溶液的pH值、离子强度及配合物的浓度等都有关系。3种配合物表现出来的化学核酸酶活性顺序为CuL³＞CuL²＞CuL¹。CuL³的DNA切割反应表现为典型的假一级连续反应。在80 μmol·L^-1 CuL³和2 mmol·L^-1 H₂O₂的存在下,就超螺旋DNA向切口开环型DNA进而向线型DNA的转化而言,反应速率常数分别为0.044 0±0.001 5 min^-1(k₁)和0.003 52±0.000 18 min^-1(k₂)。     

双链特异性核酸酶的生物学和医学应用

双链特异性核酸酶DSN是一种能高选择性地识别并酶切完全匹配的DNA双链或者DNA-RNA杂交双链中的DNA,而对单链DNA和RNA几乎没有作用的核酸酶.DSN酶的上述特点使其在生物和医学等领域广泛应用,主要包括全长cDNA文库的均一化、单核苷酸多态性(SNP)检测和高通量测序等.近年来,DSN酶在microRNAs(miRNAs)的检测领域得以长足发展和应用.miRNAs是一组内源性、非编码短序列RNAs,在生理和病理过程中具有重要作用,但由于其序列短、丰度低等特点, miRNAs的检测一直是临床难题.新近研究主要基于DSN酶信号放大的特点,相继建立了一系列生物传感技术,通过采用不同检测原理如比色法、荧光法、电化学法等实现痕量miRNAs检测.本文就DSN酶在miRNAs检测、SNP检测、全长cDNA文库均一化及高通量测序等方面的生物学应用进行了综述.     

NM23—H1和NM23—H2可切割血小板起源的生长因子—A基因启动子中的核酸酶敏感成发

PDGF－A基因的转录由几个GC丰富的、高度单链的、非B型结构的增强子和沉寂成发所调节，其中一个沉寂子位于PDGF－A启动了远上游5′端（－1418－1388），命名为5′SHS。重组人NM23－1T上和NM23-H2可分别在3′和5′端切割单链、双链形式的5′SHS的两条链，表明NM23－H1和NM23－H2在不同位点，以不同机制切割5′SHS.NM23－H1和NM23－H2也可分别在3′和5′端切割双链形式的PDGF－A启动子中的NHE成分（－82－－50）；此外，NM23－H1也可在3′端切割PDGF－ANHE成分的无意义链（Py链）。     

La(Ⅲ)对Bal31核酸酶活性的影响

探讨了Bal31核酸酶在无Ca(Ⅱ)体系中能否依赖稀土离子La(Ⅲ)从两端降解线性DNA分子.发现了 1 mmol/L 的La(Ⅲ)能激活Bal31核酸酶, 从而快速酶解线性DNA.表明了Ca(Ⅱ)并不是文献中所说的唯一能激活Bal31核酸酶的离子. 用液相色谱(HPLC)分别检测Ca(Ⅱ)、La(Ⅲ)体系的酶解产物,结果表明:虽然后者酶解CG 碱基对的速率只约为前者的60%.但两体系对AT碱基对的酶解速度相近.