温敏核不育系水稻株1S及其矮秆突变体SV14茎的蛋白质组学比较

采用双向凝胶电泳对温敏核不育水稻株1S和其矮秆突变体SV14的茎(穗颈下第1节和第2节)蛋白进行了分离, 通过银染显色, 获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱. 选取了26个蛋白质点采用MALDI-TOF-MS进行肽质谱指纹图分析, 最终有12个蛋白质点得到了可靠鉴定. 其中在SV14中相对于株1S上调的仅有OSJNBa0039C07.13 蛋白, 其它蛋白均表现为下调. 这些差异蛋白按照功能可分为4类: (1) 能量代谢相关蛋白; (2) 次生代谢相关蛋白; (3) 调控蛋白; (4) 未知蛋白. 对光合系统Ⅱ氧延伸复合物蛋白质前体2, 果糖二磷酸醛缩酶, UDP-葡糖醛酸脱羧酶对应的基因进行了半定量RT-PCR分析, 发现这几个基因与蛋白质的表达不一致, 可能是RNA发生了翻译后修饰而减少了蛋白表达量的结果. 这些差异蛋白很可能与水稻矮化有关, 为水稻矮秆基因的寻找提供了另一个有效途径.     

拟南芥网格蛋白重链突变体的遗传分析

利用PCR方法分离筛选了拟南芥网格蛋白重链T-DNA插入突变体chc1和chc2,并观察了CHC功能缺失后对植株发育的影响.结果表明：拟南芥网格蛋白重链CHC1或CHC2功能缺失引起部分植株发育异常,表现出生长素相关的发育表型,如幼苗子叶出现棒状、喇叭状和扇形等各种异常表型;通过人工杂交未能获得chc1chc2纯合双突变体,表明CHC1和CHC2功能同时缺失可能引起花粉致死或胚胎致死.这些遗传分析结果表明CHC在植物发育过程中具有重要的生物学功能.     

Y-152和K-156在果蝇ADH催化中的作用

果蝇醇脱氢酶酪氨酸－１５２（Ｙ－１５２）和赖氨酸－１５６（Ｋ－１５６）处于同类脱氢酶的保守位点。经人工定点突变和酶动力学分析,前者的苯丙氨酸（Ｙ１５２Ｆ）、组氨酸（Ｙ１５２Ｈ）和谷氨酸突变体（Ｙ１５２Ｅ）及后者的异亮氨酸突变体（Ｋ１５６Ｉ）均丧失催化活性。而半胱氨酸－１５２（Ｙ１５２Ｃ）及精氨酸－１５６（Ｋ１５６Ｒ）突变体活性分别是对应野生型的０．２５％和２．２％。此外,Ｙ１５２Ｃ和Ｋ１５６Ｒ的Ｋ     

化学诱变剂EMS筛选越橘抗旱突变体的初步研究

本实验以两个品种越橘继代苗茎尖为试材,用甲基磺酸乙酯(EMS)对其茎尖进行处理后,外植体再生率和再生株生根率比对照均有所下降。M1代植株经干旱胁迫后进行初步筛选后, 过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶(SOD) 、过氧化物酶(POD)活性增强,丙二醛(MDA)含量减少,对干旱环境表现出一定的抗性。这两组材料经浓度为0.3%EMS诱变处理后可能存在抗旱性较强的突变植株。     

化学诱变剂EMS筛选越橘茎尖抗旱突变体的初步研究

以两个品种越橘继代苗茎尖为试材,用甲基磺酸乙酯对其茎尖进行处理后,外植体再生率和再生株生根率比对照均有所下降.M1代植株经干旱胁迫后进行初步筛选后,过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、过氧化物酶活性增强,丙二醛含量减少,对干旱环境表现出一定的抗性.这两组材料经浓度为0.3%甲基磺酸乙酯诱变处理后可能存在抗旱性较强的突变植株.     

一种近红外荧光蛋白PAiRFP1及其突变体V276G的光活化效率研究

PAiRFP1是一种以根癌农杆菌中细菌光敏色素Agp2为基础,经过蛋白工程手段改造后获得的近红外荧光蛋白。与其他近红外荧光蛋白不同,PAiRFP1具有光活化行为。这一特性可以有效改善近红外荧光蛋白在体内的成像信噪比。然而,关于光活化行为的影响因素却研究甚少。主要采用荧光光谱学手段研究了PAiRFP1蛋白浓度、pH、金属离子、氧化还原环境对于PAiRFP1光活化行为的影响,结果发现: (1) PAiRFP1的最大光活化效率与该近红外荧光蛋白的浓度不呈线性关系;(2) 随着pH从6.5升高至7.8和9.0,PAiRFP1的最大光活化效率从36.8%提高至52.0%和60.8%;(3) 金属离子K+,Na+,Ca2+的加入对于PAiRFP1的最大光活化效率没有显著影响;类似现象在H₂O₂和DTT的处理的情况下也被观察到。除了上述影响因素外,还发现当PAiRFP1中276位的缬氨酸被突变为甘氨酸产生V276G突变体后,蛋白的最大光活化效率从~50.0%下降至19.4%。DTT处理后导致V276G突变体最大光活化效率从19.4%提高到了27.1%。此外,比较研究了各种影响因素对于光活化速率的影响。以上结果为今后更好地将此类光激活的近红外蛋白应用于活体成像中提供了更好地理论指导和优化解决方案。     

Role of two phosphohexomutase genes in glycogen synthesis in Synechocystis sp. PCC6803

Phosphohexomutases catalyze the interconversion between hexose-6-phosphate and hexose-l-phosphate and play important roles in polysaccharide synthesis. In Synechocystis sp. PCC 6803, sl10726 is predicted to encode PGM （phosphoglucomutase）, slr1334 is predicted to encode a PGM/PMM （phosphomannomutase） bifunction enzyme. In comparison to the wild type, a sllO726-null mutant showed 3.4% PGM activity but 45%-69% glycogen content. Down-regulation of slr1334, an essential gene, by using a copper regulated promoter further decreased the PGM activity in the sllO726：：Kmr PpetE-slr1334 double mutant to 0.3% of the wild type level. However, the glycogen content was not further decreased in parallel. In vitro, recombinant Sl10726 or S1r1334 showed predicted enzyme activities. Our results indicate that a relatively high level of glycogen can be maintained in Synechocystis mutants with low levels of PGM activity. The high PGM activity in the cyanobacterium may be required for turnover of glycogen or synthesis of other polysaccharides or oligosaccharides.     

一个新的水稻幼苗黄叶突变体的遗传分析及其基因的初步定位

在60Coγ射线辐照的水稻突变体库中,发现了一个以粳稻品种日本晴为遗传背景的幼苗叶色黄化突变体syl11(seedling yellow leaf 11).与野生型相比,突变体幼苗第二和第三叶表现黄色,在其完全展开之前叶片自其顶端开始转绿,长到四叶期其叶色恢复正常;并且该突变体syl11幼苗黄色叶片光合色素含量明显下降.遗传分析表明,该突变体的遗传性状由1对隐性核基因控制.本研究以培矮64S/syl11的F2代突变型植株作为定位群体,应用微卫星(SSR)分子标记以及新发展的InDel分子标记,将基因syl11定位在水稻第11号染色体长臂上的RM26652和处于着丝粒附近的ID11974分子标记之间,其遗传距离分别为0.5 cM和0.7 cM.     

Reporter-based screen for <Emphasis Type="Italic">Arabidopsis</Emphasis> mutants compromised in nonhost resistance

Plants are exposed to many potentially pathogenic microbes in the environment, but each species is only susceptible to a limited number of pathogens. The broad resistance is referred to as nonhost resistance. To date, little is known about the underlying mechanism of nonhost resistance and the signaling transduction process. Here we describe a simple method for isolating Arabidopsis nonhost resistance mutants against a nonadapted bacterial pathogen. A RAP2.6 promoter-driven LUC reporter system was developed to replace the tedious bacterial growth assay during the primary screening. The RAP2.6-LUC reporter gene is normally induced by the virulent bacterium Pseudomonas syringae pv tomato but not the nonadapted bacterium P. syringae pv phaseolicola. By using this method we iso- lated 4 mutants displaying strong reporter activity in response to P. syringae pv phaseolicola, which were characterized in some details, ebsl, ebs2, ebs3, and ebs4 （enhanced bacterial susceptibility） were compromised in resistance against P. syringae pv phaseolicola and/or P. syringae pv tomato. In addition, ebs4 showed enhanced hypersensitive response to the incompatible bacterium P. syringae pv tomato （avrB）. These results demonstrated that the method is suited for large scale screening for nonhost resistance mutants.     

rPA(K)的定点突变及其真核表达载体在COS-7细胞中的瞬时表达

采用定点突变技术,对真核表达载体pCSRK上的目的片段rPA(K)进行突变,获得了含有突变体rPA(KN)(N184→Q)的真核表达载体pCSRKN.酶切和测序结果证明,成功去除了184位的糖基化位点.用LipofectamineTM2000 Reagent将pCSRKN转染至COS-7细胞,取转染后不同培养时间上清,以FAPA法进行检测.结果表明,表达产物具有良好的溶圈活性,从而验证了pCSRKN在真核系统表达的可行性.