构建突变基因文库的定向进化研究进展

1.介绍定向分子进化是在实验室条件下模拟自然选择过程,改变原有蛋白的氨基酸序列,以期找寻预期性能的突变蛋白。定向分子进化实验的成功与否取决于制备的突变体库的质量和简捷、高效的筛选方法。随着体外定向进化分子改造新策略的不断涌现,以及相关领域如生物信息学、功能基因组学、功能蛋白质组学等的更新和完善,各种基因改组技术的应用正受到足够的重视。其中,酶工程的定向进化已为基因     

谈谈遗传实验结果的分析

本文通过一组相关的实例,由浅入深地介绍某些遗传实验结果分析的方法。从这类分析中,学生既可以巩固基本的遗传学知识,又可以学习在科学研究中如何运用逻辑推理。     

黄化大麦与野生型大麦三种同工酶的比较研究

利用聚丙烯酰胺胶电泳，对黄化大麦和野生型大麦三种同工酶的对比研究结果表明，黄化大麦叶片与种子中的过氧化物酶和细胞色素氧化酶的活性均高于野生型大麦；黄化大麦种子中酯酶同工酶的活性高于野生型大麦，但叶片中低于野生型大麦。     

果蝇醇脱氢酶S—139定点突变后活性的变化

经酶动力学分析，丝氨酸－１３９的突变体Ｓ１３９Ａ使ＤｍＡＤＨ完全失去催化活性。Ｓ１３９Ｃ和Ｓ１３９Ｔ使ＤｍＡＤＨ的催化能力分别下降为野生型的１４．３％和４１．６％以及４７％和７６％，而且Ｋｃａｔ／Ｋｍ（Ａｌｃ）和ＣＡＴ（Ｋｍ（ＮＡＤ）差异极为显著；对于乙醇，突变体相对于野生型变化不大；而对于ＮＡＤ，突变体相对于野生型下降到原来的１０％以上。     

紫花苜蓿抗寒性突变体的筛选

首先由紫花苜蓿叶片诱导产生愈伤组织，然后用ＥＭＳ对愈伤组织进行处理，并进行低温筛选，获得抗寒性突变体，并用生理生化方法对愈伤组织突变体的抗寒性进行了鉴定．     

Morphology and mapping analysis of rice (Oryza sativa L.) clustered spikelets( Cl) mutant

The rice clustered spikelets (Cl) mutant exhibits a phenotype that most of branch apical have 2-3 spikelets clustered together,SEM (scanning electron microscope )observation suggested that the Cl gene controlled branch apical development,and influenced the terminal spikelets elongation,The spikelet number was reduced in mutant,indicating that Cl may also have an effect on spikelet number,To map Cl locus,two F2 mapping populations derived from the crosses between the Cl and ZhongHua11,and Cl and ZheFu802 were constructed ,respectively,The Cl locus was roughly mapped between two CAPS markers CK0214 and SS0324,A further fine mapping analysis showed that the Cl locus was mapped between makers R0674E and Cl12560,with genetic distances of 0.2 and 2.1 cM,respectively ,Then we found a PAC conting spanning Cl locus,the region was delimited to 196 kb.This results was useful for cloning of the Cl gene,Allelism test demonstrated that Cl was allelic to Cl2 another rice clustered spikelets mutant.     

PUR盒与purR自发突变体的分离及其突变频率的比较

在早期的鼠伤寒沙门氏菌嘌呤生物合成途径调控研究中,曾发现诱变条件下PUR盒的突变频率比purR高出一个数量级.为了进一步对此现象加以研究,文中以purR超阻遏突变体(purR s )为出发株,在以乳糖为惟一碳源的基础培养基上简易、快捷地分离到大量独立的PUR盒(PURbox)和purR自发突变体.对其中5个PUR盒和4个purR突变体作了突变位点分析,结果显示每个突变体的突变位点均发生在预定的靶DNA-PUR盒或purR上.PUR盒和purR突变频率比较表明,虽然两者DNA大小相差两个数量级(1∶100),但自发突变频率之比仅为3∶7.由此,认为PUR盒的高突变频率与诱变无关.在自发条件下,PUR盒同样具有高突变频率.文中对这一奇特现象做了推测性的解释.     

4个高秆突变体的遗传分析及其评价

本文研究了采用辐射诱变获得的4个高秆突变体的遗传,并对其秆型结构及其育种应用进行了分析.结果表明,h1和h3的高秆为一对显性基因控制,属于中部节间伸长的类型;211和213的高秆为一对隐性基因控制,秆型结构属于上部节间伸长的类型.利用211和213组配的杂种具有与原杂交稻相似的株叶形态和产量构成因素及其产量潜力.     

60Co γ-Ray射线诱变水稻突变体的分离和遗传学初步分析

为了研究水稻发育的分子机制,我们利用γ射线对粳稻品种9522进行诱变,共诱变了3 000 g种子,M1代单株收种,M2代移栽5 963个株系于上海农科院.在M2代中筛选突变体,并在M3代中复选,最终得到了叶、株型育性等各类形态突变体666份.对其中162株突变体进行了遗传分析,有53.61%的突变体出现3∶1的分离,这些突变体是隐性的单位点突变.同时,这些突变体的分离也为水稻功能基因分离和功能鉴定等研究打下了良好的基础,并为水稻发育的研究提供了宝贵的材料.