三种ARS片段对水稻部分酶解小细胞团转化频率的影响

ＡＲＳ２,ＡＲＳ７,ＲＳ８是从水稻珍汕９７Ａ不育系统ＤＮＡ中的克隆的一组在酵母细胞中能直始ＤＮＡ复制的片段。其中ＡＲＳ８是单考贝而ＡＲＳ２,ＡＲＳ７却是高度重复顺序。将带有ＡＲＳ２,ＡＲＳ７,ＡＲＳ８的质粒用低压脉冲电泳法导入水稻部分酶解小细胞团中,经浅层培养,铺板,获得愈伤组织。     

大肠杆菌SD序列与基因表达水平的关系

依据基因表达水平的理论预测方法从１３７３个大肠杆菌基因中选出了７３个甚高表达基因和１００个甚低表达基因,研究了这两类基因编码区起始密码子ＡＴＧ前－１到－２１位点（包含ＳＤ序列）的碱基构成与基因表达水平的关系。结果表明,ＳＤ序列中的富嘌呤区（约在－７到－１２位点）Ｇ和Ｔ的概率分布曲线中心到ＡＴＧ的距离（记为ＬＨ）与基因表达水平有明显的关系。甚高表达基因ＬＨ约为１０,甚低表达基因的ＬＨ约为８,另外在－     

大肠杆菌编码区5‘端碱基的统计分析

统计了大肠杆菌１２８８个编码序列开始的３３个碱基位点（１１个密码子）上各碱基出现的概率,发现第２、第３密码子各位点上的碱基概率分布与其它密 子上的碱基分布概率不一样;碱基Ｇ和Ｔ出现的概率从第４个密码子后呈现明显的３周期分布,还研究了这些位点上的厂长在概率分布与基因表达水平的关系,发现高表达基因和低表达基因在第２、第３密码子各位点上,其各种碱基的概率分布是有区别的;高表达基因碱基Ｇ和Ｔ的概率分布３周     

大肠杆菌SD序列碱基片段的统计分析

统计了大肠杆菌基因中构成ＳＤ区域的碱基片段,给出了ＳＤ区域相对使用频率高的和低的２碱基、３碱基、４碱基和６碱基片断。     

多肽在丝状噬菌体外壳蛋白上的展示

利用基因工程方法将丝状噬菌体ｆｄ基因８克隆入ｐＫＫ２３３－３质粒中,将人工合成的六个氨基酸残基的多肽基因插入到修饰后的质粒载体中,并制备了杂合噬菌体。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明,外源多肽基因得到了正常表达,其产物展示于丝状噬菌体的外壳蛋白上。     

中国人促红细胞生成素基因组的克隆及其在COS-7细胞中的表达

本文利用PCR技术,从正常人胎肝染色体DNA库中分离克隆了长度分别为506bp,465bp的中国人促红细胞生成素(EPO)基因组片段。506bp基因片段包括外显子2(信号肽),内含子2和外显子3;465bp片段包括外显子4,内含子4和外显子5。通过在引物中设置的酶切位点将两个克隆片段进行了正确的拼接,从而得到了约1.0kb的EPO次全基因组片段,它包括除信号肽中第2,3,4位氨基酸外的所有编码区及两个内含子序列。 所克隆的次全EPO基因组插入表达载体pSV2-dhfr中的不同克隆位点,构建了3种不同的转移载体质粒,分别转染导入COS-7细胞后,3种转移载体质粒转染的细胞上清液都有明显的EPO活性。本工作证明仅含有内含子2,4序列,去除负调控区和氧敏感区序列的人次全EPO基因组可以在COS-7细胞中获得表达。     

电脉冲介导的基因转移——哺乳动物细胞的瞬间表达和稳定转化

本文使用电脉冲介导的基因转移技术,研究外源基因在哺乳动物细胞中的表达,结果成功地将Px1TK质粒,PSV2Neo质粒和含有人膀胱癌基因的PUCEJ质粒分别导入MLTK~-细胞和NIH/3T3细胞。获得了MLTK~-细胞的瞬间表达和稳定转化;NIH/3T3细胞的稳定转化和恶性转化。瞬间表达率达80％,稳定转化率约10~(-4)。用分子杂交检测外源基因在转染细胞中的整合情况以及裸鼠接种检测恶性转化细胞的致瘤性,均获得了阳性结果。     

转基因水稻植株再生及外源人α-干扰素cDNA的表达

本文使用转化脂介导转化法(Lipofectin-mediated transformation)成功地将含有人α-干扰素(Hu-α-IFN)cDNA以及与其连锁的新霉素磷酸转移酶(Npt-Ⅱ)基因的E. coli质粒pIG3031导入到水稻(indica type rice)的原生质体内,并由此获得转化愈伤组织。基于Npt-Ⅱ酶活性的测定结果表明转化频率高达10％。筛选出的转化愈伤组织在分化培养基上再生出了完整的籼稻转基因植株。Southern杂交分析证明,外源Hu-α-IFN cDNA己整合到水稻基因组内;RNA条带杂交结果显示,外源Hu-α-IFN cDNA在T-DNA转录子1启动子(P1′)的控制下,在转化水稻细胞中有效地进行了转录;体外生物活性检测表明,转化植株组织抽提物中含有干扰素特有的抗病毒活性,说明外源Hu-α-IFN cDNA可在水稻细胞内正确表达。     

外源激素对南方鲶血清促性腺激素水平的影响

南方鲶l龄幼鱼促性腺激素(GTH)分泌调节研究表明：南方鲶幼鱼GTH的释放受到促性腺激素释放激素(GnRH)和多巴胺(DA)的双重调控．但DA不能抑制基础的GTH释放，而只能抑制GnRH刺激的GTH释放，DA对GTH的释放抑制作用是间接通过GnRH实现的．这与研究过的鲤科鱼类不同．而与研究过的其它鲶形目鱼类相似．注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后南方鲶血清GTH水平上升．hCG促使血液GTH水平升高可能与hCG与非洲鲶促性腺激素抗体具有一定的交叉免疫反应有关．hCG与促黄体释放激素类似物(LHRH-A)结合注射后血清GTH水平也显著高于单独注射hCG或LHRH-A后的血清GTH水平，这种升高可能来源于外源GTH(hCG)和LHRH-A刺激脑垂体分泌的内源GTH。     

人血管抑制素基因克隆、表达和生物活性分析

应用PCR技术从人胎肝cDNA库中扩增了人血管抑制素基因。将克隆的基因重组进酵母质粒pPIC9K获得含该基因的重组质粒pPIC9KA3。用电激法将质粒pPIC9K转化毕节酵母GSll5，经PCR检测获得含人血管抑制素基因的酵母工程菌GSll5(pPIC8KA3)。再用G418筛选法，在含不同浓度的G418平板上筛选高拷贝整合的转化子。对高拷贝整合的转化子进行发酵培养和诱导表达。SDS—PAGE及Westem印迹分析显示：表达产物约占胞外蛋白的43％，相当于94mg/L，并具有免疫活性。并能抑制bFGF诱导的鸡胚尿囊膜新生血管的生成。还对用G418筛选高拷贝整合转化子的方法做了探索。