人血管抑制素基因克隆、表达和生物活性分析

应用PCR技术从人胎肝cDNA库中扩增了人血管抑制素基因。将克隆的基因重组进酵母质粒pPIC9K获得含该基因的重组质粒pPIC9KA3。用电激法将质粒pPIC9K转化毕节酵母GSll5，经PCR检测获得含人血管抑制素基因的酵母工程菌GSll5(pPIC8KA3)。再用G418筛选法，在含不同浓度的G418平板上筛选高拷贝整合的转化子。对高拷贝整合的转化子进行发酵培养和诱导表达。SDS—PAGE及Westem印迹分析显示：表达产物约占胞外蛋白的43％，相当于94mg/L，并具有免疫活性。并能抑制bFGF诱导的鸡胚尿囊膜新生血管的生成。还对用G418筛选高拷贝整合转化子的方法做了探索。     

人骨唾液酸蛋白在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达

以PCR方法扩增人bsp基因，与分泌型表达载体pPICZαA重组，重组质粒经电击转化毕赤酵母GS115菌株，获得的GS115／pPICZαA－hbsp表达菌株能高效分泌表达rhBSP.SDS-PAGE和Western blot分析结果表明，产物的分子质量接近66ku，能发生特异性抗原－抗体反应。     

Up—Regulation of CCR5 and CXCR4 Expression on Human Monocytes by Interferon Gamma

Chemokine receptors, mainly CCR5 and CXCR4, have been proved to be the important coreceptors in HIV-1 entry. HIV-1 disease progression is, in general, characterized by an initial predominance of CCR5 using macrophage tropic, non-syncytium-inducing (NSI) isolates, switching later to CXCR4 using T-cell tropic,syncytium-inducing (SI) isolates. How this shift occurs and how the shift can be controlled are still unclear.Since patients with rapid decline of T cell counts have constantly high levels of IFN-7 in the sera and lymphoidnodes, we investigated the influence of this cytokine on the expression of the HIV-1 coreceptors CCR5 and CXCR4 on the cell surfaces of human monocytic cell line U937 and promonocyte NB4. IFN-γ could intensively enhance the expression of both, while a low level of CCR5 expression was detected in two cell lines before stimulation. The results of semiquantitative RT-PCR also confirm the up-regulation. As the newly generated X4-strains have been demonstrated to be insensitive to chemokine in some reports, IFN-7 may play an important role in selecting CXCR4-used strains.     

外源激素对南方鲶血清促性腺激素水平的影响

南方鲶l龄幼鱼促性腺激素(GTH)分泌调节研究表明：南方鲶幼鱼GTH的释放受到促性腺激素释放激素(GnRH)和多巴胺(DA)的双重调控．但DA不能抑制基础的GTH释放，而只能抑制GnRH刺激的GTH释放，DA对GTH的释放抑制作用是间接通过GnRH实现的．这与研究过的鲤科鱼类不同．而与研究过的其它鲶形目鱼类相似．注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后南方鲶血清GTH水平上升．hCG促使血液GTH水平升高可能与hCG与非洲鲶促性腺激素抗体具有一定的交叉免疫反应有关．hCG与促黄体释放激素类似物(LHRH-A)结合注射后血清GTH水平也显著高于单独注射hCG或LHRH-A后的血清GTH水平，这种升高可能来源于外源GTH(hCG)和LHRH-A刺激脑垂体分泌的内源GTH。     

外源基因的导入对Synechococcus sp.PCC7942 SOD活性和同工酶谱的影响

外源DNA导入Synechococcus sp．PCC7942后．通过NBT光化还原和PAGE电泳检测发现转基因藻Synechococcus sp．PCC7942的SOD活性和同工酶谱发生了改变．若外源基因整合在受体细胞染色体DNA上，根据整合位点的不同则能提高或减弱Synechococcus sp．PCC7942的SOD活性，同时增加同工酶谱带．若外源基因不是整合在染色体上而是以质粒的形式存在，则只改变Synechococcus sp．PCC7942 SOD活性而不影响其同工酶谱．     

影响HIV-GP41N端1/2在E.coli中表达的两段氨基酸序列界定

GP41蛋白二级结构预测显示 ,前 1 /2片段的 N端 ( 4～ 2 6位氨基酸 )和 C端 ( 1 67～ 1 89位氨基酸 )各有一个富含疏水氨基酸的穿膜螺旋 (可能性 >0 .9) ,分别从 N1 (前 1 /2片段无 C端穿膜螺旋 )的 N端和 N6(前1 /2片段无 N端穿膜螺旋 )的 C端进行缺失构建一系列缺失突变体 ,只有 p ET-N2 ,p ET-N3 ,p ET-N4,p ET-N5在大肠杆菌中获得高效表达 ,其表达量占菌体总蛋白的 2 0 % ,Western blot显示表达蛋白与 HIV阳性血清有良好的反应性 .而 p ET-N1 ,p ET-N6在大肠杆菌中表达量很低或不表达 .从而证明 1～ 6位 ,1 84～ 2 0 1位氨基酸是影响 gp41基因 N端 1 /2片段表达的主要因素     

高等植物启动子及其应用研究进展

高等植物基因的表达调控已成为分子生物学研究领域的热点和前沿,启动子是基因表达调控的重要元件.深入研究启动子的结构和功能,建立可用于植物转基因表达的时、空、量三维调控系统,可为功能基因组学研究及通过基因工程技术精确地调节植物代谢提供全新的思路.文中从高等植物启动子的类型、结构和功能入手,着重介绍了启动子研究及应用的最新进展.     

大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因克隆与表达研究

根据同源性设计引物，通过RT－PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因，并由此推测出其相应的氨基酸序列。将该基因克隆到表达载体pPIC9K中，经电激转化后整合至毕氏酵母细胞中获得表达。该表达产物经两步柱层析后，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，获得单一条带，并表现较强的生色底物活性。     

人免疫缺陷病毒Tat基因及LTR调控元件对基…

构建了不同长度人免疫缺陷病毒ＬＴＲ启动子的荧光酶报告基因（Ｌｕｃ）表达质粒；瞬时转染Ｊｕｒｋａｔ细胞；同时与含ｔａｔ基因的表达质粒ｐＣＶＩ共转染；通过荧光酶活性的测定，分析Ｔａｔ与ＬＴＲ对基因表达的作用机制。实验结果表明ＬＴＲ－１５８上游区有负调控元件的存在；证实了Ｔａｔ的反式激活作用可以大大提高ＬＴＲ指导的基因表达水平。研究结果提示ＬＴＲ中的增强子序列及其结合蛋白ＮＦ－ｋＢ在高水平的ＬＴＲ转录以     

哮喘患者肺泡巨噬细胞中IL-6mRNA表达的研究

应用逆转录酶链反应及索氏转移杂交技术分析过敏性支气管哮喘患者(激素治疗组9例,非激素治疗组12例)及正常对照组(10例)肺泡巨噬细胞(alveolarmacrophages,AM)中白细胞介素一6(interleukin-6,IL-6)的mRNA表达。IL-6/β-actin比值表示。结果发现未用激素治疗的哮喘患者AM的IL-6/β-actin为0.66±0.32,显著高于正常对照者(0.34±0.13,P<0.01)及激素治疗组(0.41±0.15,P<0.05)。提示表达IL-6的AM在哮喘的发病机理中可能具有重要的作用,而皮质激素治疗哮喘的机制之一可能与其抑制AM表达及产生IL-6的能力有关。