植物细胞膜H -ATPase对必需矿质养分的适应性

植物细胞膜H -ATPase是初级转运蛋白,在各种离子和代谢产物的跨膜运输中起着重要的作用;介绍了植物细胞H -ATPase的结构、生化特性、生理功能与调控机制;重点综述了细胞膜H -ATPase的活性及其蛋白数量与基因表达对植物必需矿质养分的适应性.     

植物细胞膜H^＋-ATPase对必需矿质养分的适应性

植物细胞膜H^＋-ATPase是初级转运蛋白，在各种离子和代谢产物的跨膜运输中起着重要的作用；介绍了植物细胞H^＋-ATPase的结构、生化特性、生理功能与调控机制；重点综述了细胞膜H^＋-ATPase的活性及其蛋白数量与基因表达对植物必需矿质养分的适应性。     

外源脑啡肽基因在哺乳动物体细胞的表达

评价转染脑啡肽基因体细胞用于爱滋病和晚期癌症患者生物镇痛的可行性。方法：采用磷酸钙共沉淀法和脂质体包裹法，分别将ｈｅｎｋ基因或ｈｅｎｋ与ｎｅｏ基因导入三种哺乳动物体细胞，观察转染效率并用放射免疫法测定转染后ｈｅｎｋ基因的瞬时表达及稳定表达水平。结果：双基因共转染加Ｇ４１８筛选组的ｈｅｎｋ基因稳定表达水平（１００～２００ｐｇ／ｍＬ）明显高于单基因转染未经筛选组（６０～１００ｐｇ／ｍＬ）；脂质体包裹法在基因转染率（１３３％～１６１％）及表达水平（１５０～２４０ｐｇ／ｍＬ）方面均优于磷酸钙共沉淀法（２０％～２６％和１００～２００ｐｇ／ｍＬ），两者的稳定表达水平与ＰＣ－１２细胞的分泌水平（１６０ｐｇ／ｍｌ）相当，均能满足细胞镇痛的要求。结论：转脑啡肽基因体细胞的脑啡肽分泌量（１０７个细胞）可以满足镇痛的要求。若用于ＡＩＤＳ患者，可望长时间地缓解全身疼痛，并增强机体免疫功能和改善神经退行性痴呆症状     

多能硫杆菌RubisCO基因的亚克隆及各种启动子对其表达的影响

将多能硫杆菌ＲｕｂｉｓＣＯ基因从两个方向亚克隆到ｐＢＲ３２２和ｐＫＫ２２３－３载体上，通过酶切的方法对各种质粒的插入方向进行了确证。并进一步对这两种插入方向的质粒在大肠杆菌中的表达情况进行了酶活性的测定，该基因片段在ｐＫＫ２２３－３载体的ｔａｃ启动子的启动下，表达活性比ｌａｃ妄动子以及ｐＢＲ３２２载体上的Ｐ１和Ｐ２启动子高。     

葱蝇防御素基因的鉴定及针刺对基因表达的影响

【目的】分析葱蝇(Deliaantiqua)防御素基因家族的序列特征、分子进化和基因表达模式,了解防御素基因在滞育期的免疫应答特征。【方法】利用生物信息学方法,从转录组数据库中搜索防御素基因家族的序列,并进行基因鉴定、系统发育、选择压力及针刺刺激对基因表达的影响分析。【结果】共鉴定出3个防御素前体序列及由此形成的40个氨基酸残基组成的成熟肽Da Df1e ,Da Df2e 和 Da Df3e ,理论分子量分别为4.09,4.124.09k Da;等电点分别为8.71,8.69和8.35;它们具有昆虫防御素的典型的保守结构域,有3对分子内二硫键,均为外分泌型、稳定多肽。系统发育分析显示葱蝇防御素成熟肽Dadef1与新陆原伏蝇(Protophormiaterraenovae)、丝光绿蝇(Luciliasericata)和家蝇(Muscadomestica)防御素亲缘关系最近并聚为一枝,再与 Dadef2和 Dadef3聚为一枝。基因表达分析表明针刺能明显影响葱蝇防御素基因的表达。【结论】葱蝇防御素基因家族序列保守性高,具有典型的家族特征;它们的表达模式在冬滞育和非滞育蛹的不同发育时期存在明显差异,说明葱蝇冬滞育蛹和非滞育蛹的免疫应答存在差异。研究结果为进一步研究昆虫防御素类抗菌肽的结构特征、进化以及滞育条件下免疫活动提供理论基础。
     

表达5aG株狂犬病毒糖蛋白基因的重组痘苗病毒的构建及鉴定

采用同源重组的方法，将５ａＧ株狂犬病毒糖蛋白基因插入天坛株痘苗病毒基因组ＴＫ区段，置于痘苗病毒晚期启动子Ｐ１１控制之下，通过筛选，得到一株重组病毒ＶＶａＧ，实验结果表明：该株病毒可表达５ａＧ株糖蛋白基因，表达产物位于感染细胞膜表面，分子量６４×１０＾３，并可与抗狂犬病毒糖蛋白抗特异组合，用ＶＶａＧ免疫小鼠，可诱导机体产生抗狂犬病毒中和抗体，抵抗致死剂量狂犬病毒的攻击，中和抗体滴度在免疫后１４ｄ达到     

抗冻肽基因在热激表达盒式载体中的构建

克隆于细菌表达载体ｐ＾ＧＥＭ－３ｘｆ（－）中的ＡＦＰ基因经ＳａｌＩ和ＫｐｎＩＩ消化后，插入到热激盒式表达载体ｐ＾ＭＡ４１２的ＳａｌＩ和ＫｐｎＩ位点中，连接于可融合的报道基因元。