丝状真菌米曲霉外源基因表达系统的构建

以米曲霉Aspergillus oryzae RIB40的基因组DNA为模板,PCR扩增得到启动子、终止子、筛选标记基因等表达元件,依次连接到载体pUC119上,构建了米曲霉的重组表达载体pNMA. 将米赫根毛霉脂肪酶基因(RML)连接于pNMA的启动子下,得到表达载体pNMA-RML,通过ApaI酶切线性化转化米曲霉宿主菌A.oryzae niaD300,得到整合型的阳性转化子A.oryzae ONL1. 其培养7天的培养液上清在以三丁酸甘油酯为底物的平板上形成清晰的水解透明圈,碱滴定法酶活测定表明培养液酶活可达2.5 U/mL,培养液上清的SDS-PAGE图谱在32.5 kDa处有RML的特征条带. 以上结果表明RML已经在米曲霉中成功表达,同时证明所构建的米曲霉外源基因表达系统是有效的.     

加昧四物汤对SHR心肌组织基因表达谱的影响

本文观察加味四物汤对自发性高血压大鼠（SHR）的心肌组织基因表达谱的影响。提取实验组和对照组SHR心肌组织RNA,用Cy-5、Cy-3逆转录荧光标记制作cDNA探针与表达谱基因芯片杂交,Scan Array4000扫描仪扫描杂交信号荧光强度,ImaGENE3．0软件分析扫描结果,筛选比率在0．5至2．0之间非差异表达基因和比率在0．5到2．0范围之外差异表达基因。结果表明阳性基因重叠有18条,其中高表达的基因有4条,低表达的有14条。该方作用靶点较多,可上调或下调SHR的某些与生物酶、血管活性物质、心肌纤维化、脂肪酸代谢有关基因的表达,这可能是其产生药理作用的重要因素。     

小麦苗期根系mRNA的稳定性分析

转录后调控是基因表达调控的重要方式,其中mRNA稳定性是转录后调控的有效途径之一.实验采用cDNA-AFLP技术,对小麦杂交种3338/2463与其亲本苗期根系中的mRNA稳定性进行了分析.结果显示,在所检测到的2995条带中,有96条的丰度经3′脱氧腺苷处理60 min后在至少一个材料中表现为明显降低,占总数的3.21%,表明这些条带所代表的mRNA半衰期比较短,可能是不稳定mRNA.同源比对分析结果显示,在所鉴定出的74个编码不稳定mRNA的基因中,有30个与已知功能基因具有较高的同源性,其中既有转录因子和信号转导基因,还有一些结构基因,而其余44个为功能未知基因.比较分析发现,杂交种与亲本之间不稳定mRNA的比例没有显著差异,但是不同基因型之间不稳定mRNA的降解速度不同,其中WRKY和线粒体半ABC转运蛋白基因在杂交种中的下调表达可能与其mRNA在杂交种与亲本中的稳定性差异有关.     

钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)4个跨膜Ser/Thr蛋白激酶基因对不同温度诱导的响应

Ser/Thr蛋白激酶（STK）是生物体信号转导系统的重要组成部分．实验以钝顶螺旋藻（Spirulina platensis）为材料,经过本地BLAST搜索、SMART结构域预测排除假阳性结果得到钝顶螺旋藻Ser/Thr蛋白激酶的基因序列．测定不同温度下的生长曲线确定该藻的最适生长温度为30℃,经低温15,20,25℃和高温37,43℃分别诱导60 min,利用半定量RTPCR方法,分析4个具有跨膜结构域的Ser/Thr蛋白激酶基因在正常生长温度下和经低温、高温诱导后表达量的变化情况．发现stk1850在所有温度下都不表达;stk1993,stk2111的表达量在不同温度下没有显著差异;stk2103在低温诱导后的表达量降低,高温诱导后的表达量升高,提示该基因的表达可能参与了钝顶螺旋藻对温度的适应．     

文昌鱼Rbx1同源基因的克隆，进化分析和表达图式的研究（英文）

在青岛文昌鱼中首次克隆到一个RING box同源基因,对其进行了序列特征和系统进化学分析,并且研究了该基因的胚胎发育和成体表达图式 。AmphiRbx1演绎的蛋白序列与已知其他无脊椎动物和脊椎动物的同源分子表现出很高的相似性。利用原位杂交和RT PCR技术研究该基因的表达,结果显示AmphiRbx1在胚胎发育各期均有表达,特别是在 卵裂期胚胎和有高速分裂细胞的组织中有很强的表达。实验结果表明,Rbx1基因在进化中相当保守,AmphiRbx1可能在细胞分裂的调节中发挥作用。
     

血管生成抑制因子canstatin基因的克隆及表达

Canstatin是最近发现的能抑制新生血管生成和肿瘤生长的又一血管生成抑制因子。从胎盘组织中提取总RNA,根据已知canstatin基因序列,设计特异引物,应用RT－PCR方法扩增出该基因片段。DNA序列测定表明,与文献报道的该基因比较,核苷酸序列完全一致。将扩增得到的该基因克隆于原核表达载体pPROEX-HTb中,在大肠杆菌E;coli BL21中经IPTG诱导获得了表达,表达量约占菌体总蛋白量的20％以上。     

玉米kn-1同源盒的高效表达

同源盒基因(homeoboxgenes)在植物,动物,真菌的广泛存在说明这种结构在真核生物进化过程中高度保守,并暗示其具有重要功能.本文将玉米kn-1同源盒插入表达载体pGEM△XbaI,并将形成的重组克隆pGEM△MK转化BL21(DE3)而获得高效表达;表达产物的分子量为29×103,并主要以可溶性蛋白形式存在.Kn-1,Quox-1,OSIH-1间的交叉免疫反应证实三者在蛋白质水平具同源性.而Kn-1同源结构域(Homeodomain)高效表达有助于进一步寻找其靶基因.     

黄牛Sry基因5‘端调控区序列研究

采用聚合酶链式反应技术,以中国湖北雄性黄牛基因组ＤＮＡ为模板,扩增出Ｓｒｙ基因５’端调控区６８０ｂｐ和６４０ｂｐ两个片段,并分别克隆到ｐＵＣ１８上,测序拼接出完整的５’调控序列１０４０ｂｐ,该列含核心启动子和ＡＴＧ起始密码。     

酵母snR72￣78snoRNA基因簇的研究

通过ＰＣＲ分析发现ｋｌｕｙｕｅｒｏｍｙｃｅｓ ｄｅｌｐｈｅｎｓｉｓ中存在与酿酒酵母相似的ｓｎＲ７２～７８ｓｏｎＲＮＡ基因簇。对该基因簇进行序列测定并与酿酒酵母比较分析,发现基因簇中各个ｓｎｏＲＮＡ编码区具有一定的保守性,但是基因间隔区却有完全不同的序列,这表明ＲＮａｓｅⅢ对ｓｎｏＲＮＡ前体加工的识别信号存在于各ｓｎｏＲＮＡ基因间隔的高级区的高级结构中。进一步对另外４种酵母进行ＰＣＲ分析,结果表明ｓ     

P15INK4b对人黑色素瘤细胞周期及G1期相关调控基因的影响

人黑色素瘤细胞A375是P15INK4b缺失细胞系,通过细胞转染技术将外源P15INK4bcDNA转染A375细胞,经PCR和Western blot检测,证明构建了P15INK4b稳定表达细胞模型MLIK6.流式细胞光度术结果显示,与对照组MLC2相比,MLIK6细胞G1期升高11%,S期下降14%.利用TdR-N2O同步法所得同步的MLIK6和MLC2的M期细胞比例分别达到89.1%和76.8%,而G1期的比例分别为74.3%和76.4%.3H-TdR掺入的结果显示,MLIK6从G1期进入S期的时间比MLC2延长2 h,并且掺入强度明显减弱.进一步探讨P15INK4b对G1/S相关调控基因的影响,发现G1期的MLIK6细胞在诱导P27表达升高的同时,cyclinD1,CdK4,cyclinE和c-myc的蛋白水平均降低,其中cyclinD1的抑制在晚G1期附近最显著,而对cyclinE的抑制则在G1/S转换处表现突出,癌基因c-myc表达受到明显抑制并贯穿于G1→S全部时间进程中.说明P15INK4b是通过对G1期不同阶段细胞周期引擎分子cyclinD1,CdK4,cyclinE和癌基因c-myc的抑制及增加CKI P27延缓了G1/S进程.