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11.
耐热碱性磷酸酯酶基因的亚克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
根据耐热碱磷酸酯酶基因的酶切图谱和DNA序列,分别在基因的起始密友子和终止密码子设计2个突变引物。引物的5‘端分别带有NdeⅠ和BamHⅠ酶切全点。通过PCR从质粒pTAP118B中扩增获得了FD-TAP基因的全序列。经过酶切将基因亚克隆于高达载体pJLA503。 相似文献
12.
统计了大肠杆菌1288个编码序列开始的33个碱基位点(11个密码子)上各碱基出现的概率,发现第2、第3密码子各位点上的碱基概率分布与其它密码子上的碱基分布概率不一样;碱基G和T出现的概率从第4个密码子后呈现明显的3周期分布.我们还研究了这些位点上的碱基概率分布与基因表达水平的关系,发现高表达基因和低表达基因在第2、第3密码子各位点上,其各种碱基的概率分布是有区别的;高表达基因碱基G和T的概率分布3周期性更明显. 相似文献
13.
改造人干扰素α2b基因在大肠杆菌中获得高效表达的理论方法 总被引:2,自引:1,他引:1
按照E.coli甚高表达基因中同义密码子使用,密码子内和密码之间碱基关联的EENS模式,对人干扰素α2b基因编码区中的同义密码子进行置换,理论上使得人干扰素α2b基因在E.coli中的表达水平有非常显的提高,在理论上,未改造的人干扰素α2b基因在E.coli中的表达水平为CAI=0.323,CDI=0.574,CEI=0.629,是较低表达水平的基因,估计实际表达水平在10~10^3mol/ce 相似文献
14.
15.
应用PCR技术从人胎肺cDNA文库中扩增tumstatin基因编码序列,克隆至pET-3c载体构建非融合表达的重组质粒pET-3c-tum,并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中获得高效表达.表达蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离、切胶回收后免疫新西兰大白兔,获得ELISA效价高达1∶1 000的特异性兔抗人tumstatin抗血清. 相似文献
16.
信息素在八肋游仆虫接合生殖过程中起着重要的诱导配对作用,为了进一步研究其诱导机制,根据已知的基因序列,应用PCR技术,扩增信息素G3基因,并将该基因插入表达载体pGEX-6P1中,构建了重组表达质粒pGEX-6P1-G3.重组菌在37℃下,经1.0mmol/L IPTG诱导,12%SDS-PAGE分析,在37kDa处出现明显的特异目的带。 相似文献
17.
以甘蓝(Brassiaca oleracea)为材料,取幼叶分离mRNA,反转录合成cDNA,以cDNA第一链为模板,通过PCR扩增,获得甘蓝磷酯酶D(Phosphorate Lipid Dehydrolase,PLD)HKD2功能区的基因片段.对其进行Blast分析,结果表明,分离的目的片段核苷酸序列与Genbank中报道的甘蓝PLD基因相比同源率为99.7%,只有2个碱基发生改变.将得到的PLD基因片段插入植物表达载体pAT940,构建了PLD基因反义表达载体pATC—rPLD,为下一步进行抗逆转基因作物选育打下基础. 相似文献
18.
从牛泡沫病毒BFV3026感染的胎牛肺细胞中提取Hirt DNA,PCR扩增BFV3026 gag基因。序列分析确证后,将其克隆于原核表达载体pET32A,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,使Gag蛋白得以高效表达。SDS-PAGE及Western blot证实:表达蛋白占菌体总蛋白的40%,本工作的完成为Gag蛋白功能的研究奠定基础。 相似文献
19.
通过PCR从苋属植物千穗谷(Amarathus hypochondriacus)的总DNA中扩增出苋菜抗菌肽(Ah—AMP)的核基因片段,序列分析结果表明该基因长261bp,编码一个由86个氨基酸组成的Ah—AMP前体多肽。在构建Ah—AMP基因的植物表达载体pBinAH916后,通过根癌土壤杆菌介导方法转化了烟草。转化再生植株和T1代转基因烟草的PCR和Southern blot分析表明,AA—AMP基因已整合到烟草的染色体中,并为单拷贝整合。T1代转基因烟草的Nouthern blot分析结果表明,AA—AMP基因在转基因烟草中至少在mRNA水平上能正常表达。对T0代转基因烟草进行烟草青枯病的抗病性试验,筛选出两株抗性较强的植株。对T1代抗青枯病的统计分析发现,其抗病性比起始品种SRl分别提高了2.24和1.62个级别;其病情指数比起始品种降低49.6%和37.3%。对黑烃病也表现一定的抗性,主要表现在推迟发病时间,减缓发病速度上。这些结果表明AA—AMP基因在植物抗病基因工程研究中可能是一个有潜在应用价值的基因。 相似文献
20.
纳豆激酶基因克隆及其在大肠杆菌中活性表达研究 总被引:5,自引:1,他引:5
以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增了纳豆激酶基因(natto kinase gene)中编码前肽、成熟肽的核苷酸序列(pro-NK),构建大肠杆菌表达质粒pTYB102,转化大肠杆菌ER2566。在IPTG诱导下,分别在15℃(14h)、30℃(3h)、37℃(2h)条件下培养,pTYB102均能表达出有活性的纳豆激酶。实验证实纳豆激酶基因得到活性表达需要Pro序列。SDS-PAGE表明,15℃和30℃和37℃培养表达的杂蛋白更少。薄层扫描测定表达的纳豆激酶占菌体总蛋白30%以上。 相似文献