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51.
朊圆酵母Y0401尿酸酶的基本特性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0~12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时活性保持90%,在60℃处理30min时活性仍保持80%.在最适条件下,该酶催化尿酸的米氏常数(Km)为3.34×10-5mol/L.一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究. 相似文献
52.
通过平板初筛和摇瓶复筛,从105株菌中筛得一株甘油激酶的高产菌株,并研究了其所产甘油激酶的动力学性质.研究结果表明:在MES系统中,甘油激酶有较好的酸碱稳定性,pH稳定范围为5.5~10.5;最适pH和最适温度分别为pH 8.0和50℃,该酶催化甘油的米氏常数(Km)为3.5×10-5mol/L,催化ATP的Km为4.46×10-4mol/L.同时对一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究. 相似文献
53.
总状共头霉产生杀线虫活性物质的条件和产物性质的初步研究 总被引:1,自引:1,他引:1
研究了培养基组分和培养条件对Sr.菌产生杀线虫活性物质的影响,并经过发酵放大表明,该菌代谢产物具有很强的杀线虫活性。该菌的最适培养基配方为lL土豆汁(200g/L)中加入20g蔗糖,pH自然。最佳培养条件采用500mL三角瓶装量100mL,接种量2%,170r/min,26℃,培养4d,将发酵滤液稀释为原浓度的1/2,其杀线率达到80%;在5L发酵罐上进行放大试验,发酵(44—52)h,将发酵滤液稀释为原浓度的1/2,其杀线率稳定在95%以上。该活性代谢物热稳定性强,呈水溶性,经分离证实活性组分中包含有机酸类物质。 相似文献
54.
固定化酵母流化床生物反应器发酵玉米淀粉的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
王晓丹 《西南师范大学学报(自然科学版)》2004,29(1):98-101
对固定化酵母流化床生物反应器发酵玉米淀粉进行了研究.结果表明,在南阳混合酵母、拉斯12号酵母以及古巴Ⅱ号酵母3种酵母中,南阳混合酵母最适合作为固定化的菌种.发酵醪初糖为9 86~15 88°Bx,发酵时间为6~11h,成熟发酵醪中酒精的体积百分比含量达4 8%~9 2%,反应器的乙醇生产能力为3 8~4 5g/(L·h),凝胶的乙醇生产能力为11 3~13 6g/(L·h),残糖均低于1 0°Bx. 相似文献
55.
酿酒酵母与雨生红球藻的细胞融合子的RAPD鉴定 总被引:4,自引:0,他引:4
用7条随机引物对雨生红球藻(Haemotococcumpluvies)、酿酒酵母(Saccaromycescerevisiae)及其融合酵母变株进行RAPD分析.在融合子的54条谱带中,有7条为双亲共有,占12.96%,与酿酒酵母相同的18条(33%),与雨生红球藻相同的17条(30.9%),其余12条(23.54%)为融合子的新谱带,结果表明该融合子很可能是雨生红球藻、酿酒酵母细胞杂种. 相似文献
56.
重组人源性抗HBsAg Fab抗体的特性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
通过噬菌体展示技术从含高滴度抗乙肝表面抗原(HBsAg)抗体的人外周血淋巴细胞获得抗HBsAg Fab抗体的轻、重链基因.将Fab的轻、重链基因分别整合到巴斯德毕赤酵母(Pichua pastons)GS115菌株的染色体上,成功构建了高效分泌表达抗HBsAg Fab抗体的酵母工程菌.对酵母表达的重组Fab抗体进行了纯化,并对其相对分子质量、糖基化以及抗原结合能力等特性进行了分析,结果显示重组酵母分泌表达的重组人源性抗HBsAg Fab是一个相对分子质量为50000左右的低糖基化糖蛋白,1mg重组Fab抗体相当于40u的抗乙肝表面抗原抗体(20U/mg).表明重组Fab抗体具有较强的结合HBsAg的能力. 相似文献
57.
分泌性表达人rPA毕赤酵母工程菌株的构建及发酵条件的初步优化 总被引:2,自引:0,他引:2
通过PCR扩增得到组织型纤溶酶原激活剂突变体Reteplase(rPA)基因片断,将该基因片断插入到含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列载体pPIC9K中,构建了重组表达质粒pPICgK/rPA,转化Pichia pastoris GS115宿主菌.通过比较转化子在MM和MD平板上的生长状况,筛选His^ Mut^s表型转化子.并在2.0mg/mL G418平板筛选得到多拷贝转化子GR10,GR11.摇瓶培养,甲醇诱导外源基因表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明重组蛋白分子量约39ku,能与特异性单克隆抗体发生免疫反应;体外气泡法测定rPA活性,结果显示重组蛋白具有较好的纤溶活性.通过正交试验,优化发酵条件,表达活性最高为1050IU/mL. 相似文献
58.
利用枯草杆菌整合表达嗜铬粒蛋白抗真菌片段 总被引:4,自引:0,他引:4
为实现CGA1-76片段基因在枯草杆菌中的稳定表达,将CGA1-76片段基因的表达元件重组到枯草杆菌转座子质粒pHV1249微转座子mini-Tn10内,利用mini-Tn10将CGA1-76片段基因的表达元件整合到枯草杆菌DB1342染色体上,用氯霉素和红霉素筛选枯草杆菌转座工程菌DB1342(TnSVTQ).DB1342(TnSVTQ)在无选择压力条件下经10 d连续传代培养,转座子内氯霉素抗性丢失率为0%,说明转座子稳定整合在DB1342染色体上.SDS-PAGE和免疫印迹分析结果表明,在蔗糖诱导下,CGA1-76片段基因在DB1342(TnSVTQ)中获得表达,产物被分泌到细胞外.孔穴琼脂扩散法测定表达上清的抑制真菌活性,结果表明重组CGA1-76能抑制烟曲霉菌和黄曲霉菌的生长,抑菌圈直径分别为9 mm和8 mm. 相似文献
59.
将化学法合成的apoAI基因插入分泌型载体pPIC9K.将重组的pPIC9K—apoAI用BglⅡ酶切后,转化Pichia pastoris GS115菌株,筛选获得G418高抗性转化子.转化子经摇瓶发酵和甲醇诱导,上清液用SDS-PAGE检测,有明显的rApoAI表达.经Phenyl—sepharose 6(Fast Flow)疏水层析柱和Sephadex G-50(coarse)分子筛层析,得到rApoAI蛋白纯品.经Western blotting,N末端氮基酸顺序测定证明,毕赤氏酵母表达的rApoAI与人血浆提取的ApoAI基本一致. 相似文献
60.
将PCR扩增得到的αpoAⅠ基因片段插入胞内表达质粒pPIC3.5K,重组的pPIC3.5K-αpoAⅠ用BglⅡ酶切后,转化Pichia pastoris GS115菌株,筛选获得G418高抗性转化子,再通过PCR鉴定证实口αpoAⅠ基因已整合到染色体上.其转化子经摇瓶发酵和甲醇诱导,收集细胞裂解后,用SDS-PAGE与Western blotting检测,证明胞内有明显的rApoAⅠ表达,其分子质量与人血浆提取的ApoAⅠ相同. 相似文献