葡萄糖供应速率对大肠杆菌表达及分泌人表皮生长因子的影响

采用一株大肠杆菌BL 21(DE 3)[pBLMVL 2EGF]生产人表皮生长因子(hEGF),其中hEGF表达由PL启动子控制并通过phoA信号肽分泌到胞外。实验结果表明:诱导阶段以恒定比供应速率流加葡萄糖时,流加速率对hEGF的表达和分泌有很大影响。当葡萄糖比供应速率为0.122g/(g.h)时,hEGF表达水平最低,分泌效率最差,只有37.5%;随着葡萄糖比供应速率的增加,胞外和胞内hEGF比生产速率明显增加,当葡萄糖比供应速率为0.196 g/(g.h)时,单位菌体产生的hEGF水平最高(121.6 m g/g),其中分泌至胞外的hEGF占42%。此外,诱导前补充有机氮源有利于提高诱导初始hEGF的生产速率。     

嗜碱芽孢杆菌NTT89启动子的克隆及其表达

报导了以启动子探测质粒pKK232-8为载体克隆嗜碱芽孢杆菌NTT89启动子的研究.用限制性内切酶Hindl分别消化嗜碱芽孢杆菌NTT89染色体DNA和质粒pKK232-8,在体外重组,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,在含氨苄青霉素和氯霉素的选择性平板上筛选转化子,结果从NTT89染色体DNA中克隆到一系列带有启动子活性的DNA片段,并在大肠杆菌中得到表达,这些转化子抗氯霉素水平在34～500mg/L不等,随机挑选10个转化子,提取其重组质粒进行限制性酶切,表明转化子中的重组质粒外源片段插入的效率很高,插入片段大小在500～5500bp之间,通过地高辛标记的点杂交和Southern杂交均证明重组质粒上插入的具启动子功能的DNA片段来自于嗜碱芽孢杆菌的染色体DNA.     

棉花曲叶病毒反式作用因子AC2对病毒链基因启动子的调控作用

以棉花曲叶病毒(CLCuV)侵染的烟草叶片组织总DNA为模板,通过聚合酶链反应扩增CLCuV反式作用因子AC2并插入克隆载体.将AC2置于CaMV35S启动子下构建了瞬时的表达载体.通过基因枪法将质粒载体导入烟草和棉花叶片细胞中进行瞬时表达.结果表明,在反式作用因子AC2的激活下,病毒链基因启动子的活性明显增强,然而激活后的病毒链基因启动子的活性仍低于互补链基因方向启动子;其表达方式与互补链基因启动子相似,即在叶肉及维管组织均有较高的活性.此外还探讨了AC2应用于植物遗传操作的可能性.     

NM23—H1和NM23—H2可切割血小板起源的生长因子—A基因启动子中的核酸酶敏感成发

PDGF－A基因的转录由几个GC丰富的、高度单链的、非B型结构的增强子和沉寂成发所调节，其中一个沉寂子位于PDGF－A启动了远上游5′端（－1418－1388），命名为5′SHS。重组人NM23－1T上和NM23-H2可分别在3′和5′端切割单链、双链形式的5′SHS的两条链，表明NM23－H1和NM23－H2在不同位点，以不同机制切割5′SHS.NM23－H1和NM23－H2也可分别在3′和5′端切割双链形式的PDGF－A启动子中的NHE成分（－82－－50）；此外，NM23－H1也可在3′端切割PDGF－ANHE成分的无意义链（Py链）。     

烟草NFL1基因启动子区的克隆和初步的功能分析

植物的开花过程是一个复杂的发育过程,涉及到许多基因的表达和调控,其中LFY同源基因(LFY-like genes)发挥着重要的作用[1～7].在拟南芥中,LFY基因发生突变而失去功能后,花芽分生组织的形成受到显著的抑制[8];将LFY基因在植株中的表达水平提高后则可以有效地促进开花[9].     

黄牛Sry基因5'端调控区序列研究

采用聚合酶链式反应(PCR)技术,以中国湖北雄性黄牛基因组DNA为模板,扩增出Sry基因5'端调控区680bp和640bp两个片段,并分别克隆到pUC18上,测序拼接出完整的5'调控序列1040bp,该序列含核心启动子和ATG起始密码.比较分析显示种内高度的进化保守性.这为Sry基因表达的时序控制、性别决定机制及进化等的深入研究奠定了基础.     

丝状真菌启动子的基因工程改造进展

丝状真菌是重要的工业酶生产菌,具有优异的蛋白表达和分泌能力,如里氏木霉在工业发酵中其内源纤维素酶产量可高达100g/L。目前,丝状真菌已被成功用于表达外源基因,但与内源基因相比,外源基因的表达效率常常不高。使用强启动子来驱动基因转录可有效提高外源基因的表达水平,因此本文就通过基因工程的方法对丝状真菌的启动子进行改造以提高内、外源基因的转录效率的研究进行总结与展望。     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因启动子的克隆及功能分析

根据已报道的aiiA基因序列(AY460124)设计特异性PCR引物,扩增得到aiiA基因启动子序列的单一产物.将该启动子序列代替pET-28a-GFP质粒上的T7启动子,构建绿色荧光蛋白功能分析载体.经测序比对和生物信息学软件分析发现该序列含有6个可能的启动区域和19个不同类型的转录结合位点.最后通过荧光显微镜观察到...