RNA干扰技术及用于基因治疗的研究现状

RNAi是双链RNA介导的转录后基因沉默作用的重要机制之一,笔者主要介绍了RNAi技术的原理和用于基因治疗的研究现状.     

培养因素对龙牙楤木体细胞胚胎发生的影响

对龙牙楤木Aralia elate(Miq.）Seen幼芽体细胞胚胎发生过程中培养基的种类、2，4-D、BA、蔗糖浓度及活性碳等五个培养因素的影响进行了比较研究，结果表明，诱导体细胞胚胎发生的适宜基本培养基为MS培养基；蔗糖浓度从2％提高到3％诱导率逐渐下降；当2，4-D／BA比值低时，有利于体细胞胚胎发生频率的提高，但不利于胚状体的产生；当该比值高时，必须添加活性碳才有利于提高体细胞胚胎发生的数量和质量。     

用RAPD技术分析烟草与曼陀罗体细胞杂种

利用RAPD技术对普通烟草(Nicotiana tabacum L.cv Xanthi nc)和毛曼陀罗(Datura innoxia Mill)原生质体融合获得的体细胞杂种进行了分析.使用了9个10-mer随机引物对7个体细胞杂种和双亲进行RAPD指纹图谱分析,从7个杂种的9组DNA指纹图谱上共得到570条扩增带,其中与烟草特征谱带相同的带数占了67.8%,与双亲共有的谱带相同的带数为24.6%,而与曼陀罗特征谱带相同的带数仅有2.8%.由此可见,杂种组织倾向于排除毛曼陀罗的DNA,融合体是一个高度不对称的体细胞杂种.此外,杂种中还出现了双亲没有的谱带(新带占4.8%).     

明胶改性聚醚醚酮微载体的制备、表征及性能

微载体因其具有较高的表面积/体积比等优点可以大大提高哺乳动物细胞培养效率,被广泛应用于生物制药和组织工程等领域。 但微载体多为一次性使用,不耐高温,且主要依赖进口,价格昂贵,因而限制了其国内的应用和推广。 聚醚醚酮(PEEK)材料具有良好的生物相容性、化学稳定性及耐高温等特性,是一种优异的微载体材料,但存在熔点高,加工方法单一和生物惰性等缺陷。 本文以浓硫酸为溶剂,乙醇溶液为萃取剂,采用气流辅助滴注/相分离法,将PEEK制备成448 μm左右,尺寸均匀的微球;经氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)处理,获得表面氨基化修饰的PEEK微球(PEEK-N);进一步,以N,N'-羰基二咪唑(CDI)为活性中间体,将明胶分子接枝到PEEK-N微球表面,获得表面明胶修饰的PEEK微载体(PEEK-G)。 对材料的物理化学性质、表面接枝量进行表征;并通过体外细胞实验评估其细胞毒性、细胞粘附效率和细胞增殖能力。 结果显示,通过该方法制备成功了3种不同明胶接枝含量的PEEK细胞微载体(PEEK-G1,PEEK-G2,PEEK-G3),其中明胶含量较高的PEEK-G3毒性最低,细胞粘附和增殖效果最理想。     

人凝血因子Ⅸ在家兔体内的持续表达

本文报道用构建有人凝血因子Ⅸ cDNA的重组质粒(pCMV Ⅸ)或重组反转录病毒(XLⅨ和N2CMVⅨ)转染家兔原代培养的皮肤成纤维细胞(RSF),经过选择后将转有人Ⅸ因子cDNA的细胞包埋于胶原基质,然后进行自体或同种异体移植。腹腔移植有RSF-XLⅨ转化细胞的家兔血浆中人Ⅸ因子表达水平可达100ng/ml,表达持续5个半月;腹腔移植有RSF-pCMVⅨ细胞的家兔血浆中人Ⅸ因子水平可高达2.95ng/ml,表达至今已超过10个月,而且仍在继续检测中。在移植方法上,我们做了进一步改进,将收缩后的细胞胶原块移植改为细胞胶原液注射,使移植方法更简便有效,无需进行手术,用此法皮下移植有RSF-N2CMVⅨ转化细胞的家兔血浆中,人Ⅸ因子表达水平可高达480ng/ml,表达至今已有3个多月,其持续表达的趋势仍很乐观,为基因治疗的临床试验提供了一条更加切实可行的技术路线。     

转录靶向性KDR启动子调控双自杀基因治疗肺癌的实验研究

从人肺癌细胞株中克隆KDR基因的启动子(kinasedomainreceptorpromotor,KDRp),构建KDR基因启动子调控的双自杀基因(CDglyTK)真核表达质粒pcDNA3-KDRp-CdglyTK,将其导入ECV304、L9981和NL9980细胞,建立相应的转基因细胞系,并应用不同的前药处理。体内、外实验结果显示:KDR启动子调控的双自杀基因在KDR高表达人肺癌细胞和人脐静脉内皮细胞靶向表达,而在KDR不表达的正常细胞或正常血管内皮细胞中未检测到双自杀基因表达;联合应用5-FC和GCV处理,对转双自杀基因细胞的杀伤作用显著高于单独应用5-FC或GCV,且二者显示了良好的药物协同作用。     

金价心磷脂打造的“时光面霜”

2009年3月，安利推出了其2009年首款新品——雅姿·臻萃焕能乳霜，此款乳霜融入了贵比软黄金的人体细胞内稀有脂质心磷脂，而被冠以“时光面霜”的称号。     

石防风胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚的发生

石防风幼苗的根在含0.1-50mg/L 2,4-D的 MS 培养基中能诱导产生愈伤组织,最适浓度为0.5mg/L.愈伤组织来源于中柱内部的细胞。在0.5mg/L2,4-D 存在下,细胞分裂生长并发育至胚性细胞团或原胚,转移至无激素培养基后,愈伤组织表面及内部分化出发育阶段不同的体细胞胚,最后发育成为完整植株。在初生幼苗的胚轴上(有时在根或叶)常有次级胚的发生,它们能继续长成次级苗,并在苗上再次长胚,如此不断,直至多次。由此可见石防风体细胞胚发生的能力,是十分强大的。     

细胞型和染色体型与群体细胞遗传学

根据细胞遗传标记的特点，提出了细胞型和染色体型、平均细胞型和平均染色体型的概念及其频率的估计方法．通过对猪Ａｇ－ＮＯＲｓ（ｒＲＮＡ）基因的分析，发现（平均）细胞型频率和（平均）染色体型频率之间存在着类似于ＨａｒｄｙＷｅｉｎｂｅｒｇ定律的相互关系．平均染色体型频率的功用类似于基因频率，可用来表示群体的细胞遗传结构并进行群体间的遗传相似性分析．因此，建议在此基石出上开展动物的群体细胞遗传学研究．