胶体金标记技术：———DNA,RNA,蛋白质和糖的定性与定位研究

胶体金标记技术──ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白质和糖的定性与定位研究丁明孝，梁凤霞，焦仁杰，翟中和（北京大学生命科学学院，北京１００８７１）近年来，我们曾应用胶体金标记技术进行了如下几方面的研究：（１）扫描样品的免疫标记￣［１］；（２）整装细胞的免疫标记及标...     

氯嘧磺隆胶体金免疫检测试纸条的制备与应用

利用胶体金标记的经亲和层析纯化的氯嘧磺隆单克隆抗体,氯嘧磺隆-牛血清白蛋白,羊抗鼠IgG制备了氯嘧磺隆胶体金免疫检测试纸条。该试纸条的最低检测极限为100μg/L,检测时间10 m in。8个土壤样品分别添加0~2000μg/L的氯嘧磺隆标样,用0.15 mol/L NaHCO3提取2 h后用气相色谱和试纸条进行检测,如果以100μg/L作为阳性与阴性样品的区分标准,气相色谱和试纸条检测结果完全一致。所制备的胶体金免疫检测试纸条可以用于土壤中氯嘧磺隆残留的筛选。     

低丰度蛋白Mlo的免疫金标记技术研究

小麦Mlo蛋白是一种低丰度蛋白。本文利用Mlo蛋白的2种抗血清对不同标记条件下的免疫胶体金标记情况进行了研究。结果表明,一抗结合时间对标记结果有影响,60min的标记时间对Mlo蛋白定位比较合适;小麦Mlo蛋白11．2抗血清对Mlo蛋白的标记效果要比CT抗血清的标记效果好;IgG胶体金探针要比蛋白A胶体金探针更适合于对低丰度蛋白的检测。     

麦胚凝集素与纤维素酶胶体金探针的混合一步法标记

免疫金双标记技术可在超薄切片上同时标记两种不同的细胞组分,但传统的方法是用各个探针分别进行标记处理,费时费力,且两次标记有时相互干扰。本文通过对麦胚凝集素与纤维素酶两种胶体金探针标记条件与标记活性、标记特异性之间关系的分析,实现了在一定条件下两种探针混合的一步法双标记,极大地提高了工作效率,减少了非特异性背景。     

基于免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗的便携式光电型传感器

利用免疫竞争抗制原理制备检测盐酸克伦特罗的免疫纳米金试纸条,盐酸克伦特罗与CLB-BSA复合物竞争性结合胶体金上抗体的有限位点,从而使试纸条上的检测带显色减弱或消失.将显色后的试纸条插入自行研制的光电型传感器的测试孔内,根据反射光的强弱计算出克伦特罗的浓度.结果表明:用光电传感方法检测盐酸克伦特罗的线性范围为1～10 μg/L,检出限为0.05 μg/L,回收率为85.5％～96.0％.此光电型传感器检测克伦特罗具有简便、快速、灵敏、特异性强的优点.     

胶体金和Taq DNA聚合酶的相互作用研究

聚合酶链反应（PCR）是体外扩增DNA序列的技术，据报道：一定浓度的胶体金可以提高PCR的特异性。本文研究了胶体金与Taq DNA聚合酶(Taq)的相互作用。紫外-可见光谱，X射线光电子能谱(XPS)和光子交叉相关光谱 (PCCS)的结果表明，当胶体金和Taq溶液混合时会生成Taq-金结合物。用透射电镜(TEM)进一步研究发现，Taq-金结合物颗粒仍然呈球形，并且具有很好的分散性。通过分析PCR扩增产量，发现胶体金的加入会抑制PCR反应，而添加聚合酶的用量可以明显地消除这种抑制现象，这表明胶体金和Taq的相互作用会导致Taq的活性下降。     

RFID技术在胶体金免疫层析中的应用研究

本文设计了一个应用于胶体金免疫层析检验的RFID系统,系统由射频读卡模块、射频标签和主控单片机组成,全部信息都存储于电子标签卡中,还可以通过RS-232串口将数据传输到计算机,实现测量数据的管理。     

胶体金免疫层析法快速检测牛奶、奶粉、饲料中的三聚氰胺

建立了快速检测牛奶、奶粉、饲料样品中三聚氰胺的胶体金免疫层析分析法。将三聚氰胺进行分子修饰得到两种衍生物,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)相连制得免疫原和包被抗原。运用杂交瘤抗体制备技术得到抗三聚氰胺的单克隆抗体(mAb)。利用柠檬酸三钠还原法制得平均粒径18 nm的胶体金,将胶体金与抗三聚氰胺单克隆抗体相连,所形成的金标抗体(Au-mAb)包被在胶体金垫上,包被抗原和羊抗鼠二抗分别包被在硝酸纤维素膜(NC)上作为检测线(T线)和质控线(C线)。将胶金垫、NC膜、样品垫和吸水纸组装成免疫层析快速检测试剂条。将标准溶液(或待测液)滴加到样品垫上,10 min后可在NC膜C线和T线位置上用肉眼观察到胶体金的颜色(红色),通过比对颜色的深浅判断样品中三聚氰胺的含量。结果表明,三聚氰胺的检出限为10μg/L;选用了其它10种物质对免疫层析试剂条进行了特异性实验,免疫层析试剂条与2-氯-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪和环丙氨嗪的交叉反应率约为1%,与其它8种物质没有交叉反应;加标样品用免疫层析试剂条和酶联免疫吸附分析法(ELISA)同时检查,结果一致。本方法适用于牛奶、奶粉、饲料样品中三聚氰胺的现场快速检测。     

胶体金免疫层析法对组织样品中磺胺甲嗯唑残留的快速检测

研究了用于快速检测组织样品中磺胺甲嗯唑残留的胶体金免疫层析检测试剂。采用免疫竞争法,将抗磺胺甲嗯唑多克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,同时将人工合成的磺胺甲嗯唑抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线（T线）,将抗磺胺甲嗯唑多克隆抗体的羊抗兔二抗包被在硝酸纤维素薄膜表面作为质控线（C线）。T线的人工抗原与待测样品中的磺胺甲嗯唑竞争结合胶体金标记的磺胺甲嗯唑多克隆抗体,通过T线与C线的显色对比读出结果。采用该检测试剂检测组织试样时,定量下限可达20μg／L,整个检测过程只需3—5min,且与磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、盐酸克伦特罗、四环素、青霉素、链霉素无交叉反应。检测试剂具有较高的灵敏度及特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为组织中磺胺甲嗯唑残留现场监控的有效筛检手段。     

光敏细胞质不育小麦花药发育过程中ABA免疫电镜定位

运用胶体金免疫电镜定位方法研究了不同光周期条件下光敏细胞质不育小麦发育过程中ABA的分布,短日照条件下,花粉母细胞细胞质基质及小液泡内有金颗粒分布;单核至二核花粉时期花粉内金颗粒逐渐增多,二核至成熟花粉时期花粉内金颗粒逐渐减少,不同发育时期的花粉内金颗粒的分布位置有变化,绒毡层或降解中的绒毡层细胞内有较多金颗粒分布,长日照条件下花粉败育,不同发育时期的花粉内金颗粒分布数量均比同时期的可育花粉内明显增多,单核期以前败育的花粉,解体的花粉细胞质及细胞核内有较多金颗粒分布;后期败育的花粉,花粉母细胞至二核花粉时期花粉（母细胞）内金颗粒有不断增加的趋势,二核期以后,花粉逐渐液泡化,解体的花粉细胞质及逐增大的中央液泡内在大量的金颗粒分布,绒毡层细胞内金颗粒有逐渐减少的趋势,文中对ABA在雄蕊,花粉发育过程中的作用,由光周期诱导的ABA含量增加在雄性不育中的作用进行了讨论。