牛血清白蛋白与金霉素结合反应的机制研究

以光谱技术与微量热技术相结合的方法研究水溶液中金霉素与牛血清白蛋白分子间结合作用的热力学性质 .荧光猝灭法测得该反应的结合常数K =2 .0 9× 10 5L/mol,结合位点数n =1.75 ,微量法测得反应的焓变△rHm=- 17.5 0kJ/mol;依据Forster非辐射能量转移机制 ,得到授体 受体间的结合距离 (r1=1.6 7nm ,r2 =1.4 6nm)和能量转移效率 (E1=0 .4 1,E2 =0 .6 6 ) .金霉素与牛血清白蛋白分子间有较强的结合作用 ,且结合力以疏水作用为主 .     

以香草素为内标之气相层析光谱法定量牛樟木精油指标成分松油醇的快速分析方法

牛樟精油具有独特浓郁的香气,其中以α-松油醇(α-terpineol)为牛樟精油主要成分。由于樟树精油制品可依种类、变种、亚种等不同而有不同成分,以松油醇最具独特性,可作为牛樟木精油品质重要指标成分,应用以区别牛樟树与冇樟以及香樟等木材精油的方法,因此建立市售牛樟木精油指标成分α-松油醇含量的简便快速又准确的检验方法便有其必要性。该研究拟以市售精油液体样品,不经任何前处理,加入适当之内标准溶液溶解后,直接注入气相层析光谱仪中,配合适当的分离管柱及气相层析条件,以期建立简便快速又准确的牛樟木精油指标成分α-松油醇之定量方法。毛细管柱气相层析具有高解析度及高灵敏度等优点,仍为现代最重要分析技术之一,因此研究建立了以香草素为内标准定量牛樟木精油指标成分α-松油醇(α-terpineol)之气相色谱层析法的快速分析方法。牛樟木精油液体样品,加入适当量之香草素内标准溶液混合溶解后,即可直接注入配有广口径之毛细管柱(megabore column)气相色谱仪中分析,相当简便,每分析一个样品仅需约30 min。结果显示松油醇之最低定量浓度（limit of quantitation, LOQ）为1 μg·mL-1左右。在添加回收试验中添加松油醇1.0及10.0 mg 于市售冇樟精油及牛樟精油中,其回收率在98%~103%,变异系数均在10.8%以下,显示该方法的精密度相当高。以该研究建立的方法分析15件市售牛樟精油中松油醇含量,结果显示,市售牛樟木精油的松油醇含量最高约51.6%及最低为21.3%左右,此结果显示以定量松油醇作为市售牛樟精油品质指标是一快速、准确且可行的方法。     

固态纳米孔对蛋白质易位的实验研究

蛋白质因其多样性和功能性,是生物体内一类非常重要的分子.通常蛋白质的表征需要借助荧光或者酶的标记.而纳米孔技术,得益于免标记、单分子检测等优势,为蛋白质的表征提供了新方向.我们使用固态纳米孔完成了单个蛋白质分子及蛋白质-蛋白质结合物的检测.可以发现,外部电压和电解质溶液的酸碱度会直接影响蛋白质分子表面带电量,从而加快或延迟其在孔内的易位时间.抗原、抗体本质上都是蛋白质,两者之间具有高度特异性.通过比较抗体溶液在添加特异性抗原前后的易位事件,实现了单个蛋白质分子和蛋白质-蛋白质结合物的区分.未来,纳米孔技术有望应用于多蛋白质分子的辨识、蛋白质分子相互作用机制等方面的研究.     

丁基罗丹明B-表面活性剂体系荧光光谱法测定人血清蛋白

研究了阳离子染料丁基罗丹明 B在阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠存在时的吸收光谱和荧光性能 ,发现随蛋白质浓度增大荧光强度逐渐增强 ,在一定范围内增强程度与蛋白质浓度成正比 ,据此建立了一种测定人血清蛋白的新方法 ,线性范围 0— 6 .0 mg·L-1 ,检出限为 4 .4 μg/ L。用于合成样品测定 ,结果令人满意。     

偶氮胂Ⅲ-镝(Ⅲ)反射散射光度法测定蛋白质

研究了微晶石蜡吸萃蛋白质—偶氮胂Ⅲ-镝(Ⅲ)复合物的条件,并设计了固相反射散射分光光度直接测定石蜡相中牛血清白蛋白(BSA)的方法,所拟定的方法有较好的选择性,可以用于25—300μg／25mLBSA的测定．     

牛血清白蛋白的光损伤和光氧化机理

运用激光闪光光解瞬态吸收技术, 在266 nm激光激励下, 研究了牛血清白蛋白(BSA)光损伤和被SO4-·单电子氧化的反应机理, 表征了反应过程中生成的自由基. 结果表明, 在266 nm激光照射下, BSA可同时发生光电离和光激发, 生成色氨酸阳离子自由基(Trp/NH+·), 由Trp/NH+·快速脱质子形成的色氨酸中性自由基(Trp/N·)及色氨酸三重激发态(3Trp*), 3Trp*再与酪氨酸(Tyr)发生分子内电子转移生成酪氨酸中性自由基(Tyr/O·). 在SO4-·单电子氧化的反应中, 借助减谱技术, 求得BSA中Tyr和色氨酸(Trp)自由基的表观生成速率常数, 但未发现分子内电子转移现象, 阐明了SO4-·自由基是通过与BSA中的Tyr和Trp发生电子转移反应来氧化BSA的, SO4-·氧化BSA的反应速率常数为1.51×10¹⁰ L·mol^-1·s^-1, 从而为进一步研究血清白蛋白的氧化还原代谢过程提供理论基础.     

高效液相色谱法对牦牛血浆与尿中嘌呤衍生物及肌酐含量的测定

建立了牦牛血浆及尿中的嘌呤衍生物及肌酐含量测定的HPLC/UVD方法.在室温条件下,以乙酸铵为流动相,分别以Lichrospher RP-C18 Merck(4.6×250 mm,5 μm i.d.)和5C18-AR-Ⅲ Waters(4.6×250 mm)为色谱柱,检测波长220 nm,流速1 mL/min,对尿囊素、尿酸、肌酐、黄嘌呤和次黄嘌呤进行了检测.方法检出限(LOD)为0.2 ~0.4 μmol/L,血样和尿样的加标回收率分别为81% ~103%、83% ~104%.     

偶氮氯膦Ⅰ分光光度法测定血清蛋白质的效果分析

在Na2HPO4-柠檬酸酸性缓冲液中,加入非离子表面活性剂聚氧乙烯月桂醚（Brij-35）,使偶氮氯膦Ⅰ（CPA—Ⅰ）与牛血清白蛋白形成复合物,复合物的最大吸收波长在570nm,比试剂本身红移了70nm,表观摩尔吸光系数为5．88×10^4L／（mol·cm^-1）,线性范围0—166mg／L,采用分光光度法研究该结合反应的最佳反应条件,并据此建立了一种测定血清蛋白质的新方法。结果表明,该法回收率为98．7％～102．2％,批内变异系数为2．4％,血清用量少,线性范围宽,具有操作快速、简便、结果灵敏可靠等优点,与双缩脲法相关性良好。     

金属离子对一种分子内电荷转移荧光探针与牛血清白蛋白相互作用的影响

采用荧光光谱法研究了Fe~(3+)、Cu~(2+)、Pb~(2+)三种离子对1-酮-2-(对二甲氨基苯亚甲基)-四氢萘与牛血清白蛋白相互作用的影响.三种金属离子分别存在时能增强1-酮-2-(对二甲氨基苯亚甲基)-四氢萘对牛血清白蛋白的猝灭作用及二者的结合作用,使体系的猝灭常数及结合常数增大,且影响顺序为Fe~(3+)>Cu~(2+)>Pb~(2+).实验表明金属离子对蛋白质在物质的贮存、运转、代谢等方面有重要意义.