9.4T下TX模型小鼠脑组织的扩散张量成像研究

本文首次应用9.4 T高场磁共振扩散张量成像（diffusion tensor imaging,DTI）技术,研究了Wilson疾病模型TX（toxic milk）小鼠的脑组织微观结构改变和结构连接情况.基于感兴趣区域（region of interest,ROI）的分析发现,与对照组相比,TX模型组的各向异性比值（fractional anisotropy,FA）在海马、尾状核和苍白球显著下降;平均扩散率（mean diffusivity,MD）则呈现上升趋势,但无统计学意义.纤维束追踪法结果表明TX模型组小鼠的脑结构连接并未受到严重破坏,证明了铜累积对脑组织的损伤具有区域性.     

小鼠卵透明带3(mZP3)cDNA的克隆、测序及mZP3 DNA疫苗的构建

卵透明带3（ZP3）蛋白是透明带中的一种主要蛋白，在精卵结合过程中作为精子的初级受体起重要的作用，抗ZP3抗体可以阻断精卵的相互作用，ZP3被认为是一种潜在的避孕疫苗的靶抗原，本文根据小鼠卵透明带（mZP3)cDNA序列（1317bp）设计了上游和下游引物，从小鼠卵巢中提取总RNA，经RT－PCR克隆了鼠卵透明带3基因的cDNA，将其亚克隆至pUCm-T载体后利用蓝白斑特性筛选出阳性克隆，酶切鉴定后测序比较，与Gene Bank小鼠ZP3 cDNA序列完全相同，证明克隆出正确的小鼠ZP3 cDNA。将mZP3克隆至真核表达质粒pCMV4上，构建完成了DNA避孕疫苗的载体pCMV4-mZP3，为应用DNA疫苗免疫小鼠达到控制鼠害的研究奠定了基础。     

氯化汞染毒小鼠各脏器中汞和微量元素的测定及分析

本文研究了荧光光度法和原子吸收分光光度法测定氯化汞染毒小鼠各脏器中汞、钙、铁、锌、铜等金属浓度,结果显示染毒组小鼠多数脏器中上述金属浓度显著高于对照组,提示脏器中钙、铁、锌、铜等微量元素含量异常可能是氯化汞引起物重要因素之一。     

基于代谢组学和特征分子网络技术分析小鼠体内氧氟沙星的代谢产物

借助超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱（UHPLC-Q-TOF MS）,结合代谢组学及特征分子网络（FBMN）技术,分析氧氟沙星在小鼠肌肉、结肠、肝脏、肾脏、回肠及内容物中的代谢产物。依据人类代谢组数据库（HMDB）,利用代谢组学软件Progenesis QI鉴定出小鼠体内氧氟沙星的2种代谢产物,分别为N-氧化产物和培氟沙星;在FBMN技术下,依据可视化结果鉴定出5种代谢产物,其中两种与QI鉴定结果相同,另外3种分别为脱羧产物、脱羧后N-脱烷基化产物、脱氨后开环脱羧产物。采用所建立的方法快速分析了小鼠体内氧氟沙星的代谢产物。该方法具有快速、准确、无需标准品等特点,在其他代谢产物的分析方面具有广泛的应用前景。     

环磷酰胺诱导的小鼠骨髓细胞微核率的时间、剂量-效应观察

为研究环磷酰胺(CP)诱导的小鼠骨髓细胞微核率的时间-效应关系和剂量-反应关系,给小鼠一次腹腔注射不同剂量(按体质量计)CP(0、30、60、90 mg/kg)后,于不同时间(给药后12、24、36、486、0 h)、不同部位(胸骨与股骨)取材来观察小鼠骨髓细胞微核率的变化。结果表明,高、中、低三个剂量组的小鼠骨髓细胞微核率与0 mg/kg组相比较,其差异具有统计学意义(P<0.01),且4个剂量组之间两两比较也均有统计学意义(P<0.05),并表现出明显的剂量-反应关系;不同取样时间对小鼠骨髓细胞微核率的影响具有统计学意义(P<0.05),在36~48 h这个时间段能够观察到更高的微核率,通过线性回归的曲线拟合分析,以41 h取材最佳;胸骨取材与股骨取材之间的微核率差异无统计学意义(P>0.05)。环磷酰胺可作为诱导小鼠骨髓细胞微核的阳性对照,在一定范围内,具有剂量-反应关系和时间-效应关系。给小鼠一次腹腔注射量(按体质量计)60~90 mg/kg后36~48 h胸骨取材可取得较高微核率,结果满意。     

体外分阶段共培养法扩增的脐血造血干/祖细胞移植于NOD/SCID小鼠的实验研究

研究用分阶段共培养法进行体外扩增的脐血造血干/祖细胞对NOD/SCID小鼠重建造血功能的作用,探讨新扩增技术体系对将来临床移植的可行性.分离脐血单个核细胞,分别用rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF组合(非共培养组合)和rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF+人骨髓间充质干细胞组合(共培养组合)进行脐血造血干/祖细胞的体外扩增,并对扩增细胞进行流式细胞术和细胞集落形成能力分析.在移植实验中,将经致死剂量射线照射后的NOD/SCID小鼠随机分为3组,每组10只.A组:每只移植8.5×106个用rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF+人骨髓间充质干细胞组合扩增的细胞;B组:每只移植8.5×106个用rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF组合扩增的细胞;C组:每只仅输注0.5 mL生理盐水.移植后定期眼眶底部采血,分析重建造血.12周后取存活小鼠骨髓,检测人特异Alu基因的存在率.实验结果表明,rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF+人骨髓间充质干细胞组合的共培养法显著提高了造血干/祖细胞的扩增倍数,并且有利于造血干/祖细胞的自我更新和提高细胞集落形成能力.两种组合扩增的细胞移植小鼠12 d后,小鼠的白细胞类群开始回升,25 d后基本恢复到了基数水平.在45～55 d后小鼠细胞有明显的第2个恢复期,并且共培养组合扩增细胞移植的小鼠中第2次恢复明显快于非共培养组合.12周后在两种组合移植的小鼠中检测到人特异Alu序列片段的概率分别为87.5%(7/8)和88.9%(8/9).由此可推论,分阶段共培养扩增体系有效地提高了脐血造血干/祖细胞的扩增能力和重建造血能力.