定量分析小鼠肝和肌肉组织磷酸腺苷含量及其影响因素

在定量分析动物组织ATP、ADP和AMP方法中，HPLC法已成为一种快速、灵敏、准确、廉价的检测手段。然而，有关其影响因素方面的研究报道较少，且主要集中在色谱柱、流动相和流速等方面。本实验着重探讨动物组织样品的保存条件和前处理过程对检测结果的影响，以便在动物组织样品ATP、ADP和AMP含量的检测中更合理地使用HPLC法，准确反映各成分的真实含量。     

高脂饮食对小鼠脂肪代谢和矿物元素代谢的影响

为探讨高脂饮食对小鼠脂肪代谢和矿物元素代谢的影响,用昆明(KM)小鼠24只,出生28 d后随机分成2组,各12只,分别给予高脂饲料与普通饲料,饲养至第9周眼球取血处死,取皮下、腹腔、肠系膜脂肪,毛,肝,血,计算体质量脂肪质量比,测定毛、肝、血中Zn、Ca、Cu、Mn、Mg、Fe含量。结果表明,高脂饮食小鼠体质量增加(P<0.05),单位腹腔脂肪及血Ch显著性增加(P<0.01)。肝Zn、Cu、Mg、Fe、Mn显著降低(P<0.01),血凝块Zn升高(P<0.05),Cu降低(P<0.05),毛Mg降低(P<0.05)。提示高脂饮食引起体质量与血脂增加,脂肪堆积,矿物元素代谢紊乱;不同器官矿物元素的代谢紊乱有差异,以肝脏最显著。     

高效液相色谱-串联质谱法测定小鼠组织中的新型抗心力衰竭化合物AF-HF001

建立了基于高效液相色谱-质谱联用技术的新型抗心力衰竭化合物AF-HF001在小鼠组织中的测定方法,并考察了其在小鼠体内的组织分布。采用液-液萃取对样品进行预处理,以Thermo Hypersil Gold C18色谱柱进行分离,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,采用选择性反应监测(SRM)正离子模式检测分析物。小鼠组织中AF-HF001含量在0.5~10μg/mL范围内线性关系良好(r>0.996),在加标量为1.5,4,10μg/mL的组织样品中,提取回收率大于58%,基质效应在100.38%~109.99%之间,日内和日间精密度RSD均小于15%。该方法为AF-HF001的体内分布研究及进一步药物研发提供了依据。初步结果表明,该化合物能够迅速到达心脏并迅速代谢,主要分布在肝脏组织中,其他组织中分布较少。     

明胶改性聚醚醚酮微载体的制备、表征及性能

微载体因其具有较高的表面积/体积比等优点可以大大提高哺乳动物细胞培养效率,被广泛应用于生物制药和组织工程等领域。 但微载体多为一次性使用,不耐高温,且主要依赖进口,价格昂贵,因而限制了其国内的应用和推广。 聚醚醚酮(PEEK)材料具有良好的生物相容性、化学稳定性及耐高温等特性,是一种优异的微载体材料,但存在熔点高,加工方法单一和生物惰性等缺陷。 本文以浓硫酸为溶剂,乙醇溶液为萃取剂,采用气流辅助滴注/相分离法,将PEEK制备成448 μm左右,尺寸均匀的微球;经氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)处理,获得表面氨基化修饰的PEEK微球(PEEK-N);进一步,以N,N'-羰基二咪唑(CDI)为活性中间体,将明胶分子接枝到PEEK-N微球表面,获得表面明胶修饰的PEEK微载体(PEEK-G)。 对材料的物理化学性质、表面接枝量进行表征;并通过体外细胞实验评估其细胞毒性、细胞粘附效率和细胞增殖能力。 结果显示,通过该方法制备成功了3种不同明胶接枝含量的PEEK细胞微载体(PEEK-G1,PEEK-G2,PEEK-G3),其中明胶含量较高的PEEK-G3毒性最低,细胞粘附和增殖效果最理想。     

高效液相色谱法测定小鼠肝脏中的两种苯并三唑类紫外线吸收剂

建立了小鼠肝脏中UV-327和UV-328两种苯并三唑类紫外线吸收剂的高效液相色谱测定方法.样品经正己烷-丙酮(体积比1∶1)提取,Waters Symmetry? C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)分离,以甲醇为流动相,检测波长为340 nm.紫外线吸收剂UV-327和UV-328均在0.05～20.0...     

小鼠2-细胞胚胎电融合的研究

本试验对影响小鼠2-细胞胚胎电融合诸因素进行了研究。胚胎细胞融合面与两电极相平行或相垂直;胚胎细胞在0.3 mol/L甘露醇液、0.25mol/L蔗糖液和杜氏磷酸缓冲液(PBS)中;当电脉冲的持续时间为80μs,电场强度为0,800,1000,1200,1400和1600V/cm时以及当电脉冲的电场强度为1200V/cm,持续时间为10,20,40,80,160和320μs时,胚胎细胞融合效果的比较结果表明:融合面与两电极相平行,以0.3mol/L甘露醇液为融合液,电脉冲在1000—1200V/cm,20—160μs范围内的条件下,可获得满意的胚胎细胞融合率(88.6—94.5％),平均为92.2％。     

立得益片对铅中毒小鼠(生殖系统、脑、血液、心脏)促排铅的作用

研究了立得益片对铅中毒小鼠促排铅的作用。给小鼠腹腔注射醋酸铅溶液染毒 7d ,建立铅中毒模型后 ,灌胃给药不同剂量立得益片及阳性对照药物EDTA ,极谱法测定不同时间生殖系统、脑、血液、心脏中的铅含量 ,观察及统计立得益片对铅中毒小鼠上述各脏器的促排铅作用。结果表明 ,铅中毒小鼠给药 6、 1 3d后脑、心脏、血液中的铅含量明显下降 ,生殖系统中仅卵巢和子宫中的铅含量在给药 1 3d后 ,立得益片高剂量组与模型对照组有显著性差异 (P <0 0 1 )。提示立得益片对铅中毒小鼠血液及脏器有明显促排铅作用 ,降低机体的铅负荷且存在时效、量效关系     

多维离子交换色谱分离和串联质谱鉴定在小鼠肝脏膜蛋白质组分析中的应用

膜蛋白质在变性剂作用下能够较充分地溶解。根据这一特点,我们试图在变性剂溶液中采用串联离子交换色谱法分离小鼠肝脏膜蛋白质。将小鼠肝脏膜蛋白质溶解于含有4 mol/L尿素,20 mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲液(pH 9.0)中,用Q-Sepharose FF和Sephacryl S-200HR树脂组成的色谱柱结合大部分溶解的膜蛋白质,然后采用氯化钠线性梯度洗脱蛋白质,分步收集后采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进一步分离洗脱组分的蛋白质。利用胶内胰蛋白酶消化技术将SDS-PAGE胶内分离的蛋白质降解为相应的肽段,然后以反相高效液相色谱分离和离子阱质谱仪鉴定肽段。根据文献报道和蛋白质的功能分类,在所鉴定的392个蛋白质中有306个可能为膜蛋白质或膜结合蛋白质。蛋白质的疏水性计算表明,GRAVY(grand average of hydropathicity)得分大于或等于0.00的蛋白质有83个。综上所述,我们有理由认为本实验方法基本符合小鼠肝脏膜蛋白质组学研究的要求。     

双光子激发荧光成像技术对小鼠植入前胚胎的实时观测

双光子激发的蓝移效应可使利用同一束超快激光同时激发多种不同荧光特性的生物荧光染料的设想得以实现。选取锁模飞秒掺钛蓝宝石(Ti-sapphire)激光器输出的730nm激光,分别激发Hoechst33342,Fluo-4,PI和Indo-1四种常用生物荧光染料,分别利用(455±15)nm,(540±15)nm,(580±16)nm和(500±15)nm四种滤光片获得特异性荧光图像。结合双光子激发荧光成像技术穿透深,光损伤小,信噪比好等优势,选取合适的荧光染料组,应用单束激光激发、双染双通道成像方法,对小鼠植入前胚胎内细胞中的钙信号和染色体进行三维、四维实时成像,为探究小鼠植入前胚胎发育规律提供一种全新的多参数观测手段。