CRISPR/Cas9基因编辑非病毒递送系统

规律间隔成簇短回文重复序列及相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统的基因编辑技术为哺乳细胞基因组的精准修饰与编辑研究提供了高效、快捷的工具,但其化学生物学应用依然面临着CRISPR基因编辑工具Cas9蛋白和g RNA的细胞及活体递送等问题.近年来,研究人员通过开发多种非病毒递送载体,实现了编码CRISPR/Cas9基因编辑工具的DNA和信使RNA(mRNA)以及Cas9/gRNA核糖核蛋白(RNP)复合物的递送,并应用于靶基因的化学修饰与编辑调控.本文主要概述了近期CRISPR/Cas9基因编辑递送的研究进展,并对其化学生物学应用前景进行了展望.     

肝素亲和层析介质制备方法及应用研究进展

肝素亲和层析是利用生物大分子与层析介质表面的肝素特异性结合而进行选择性分离的一种技术,使用条件温和,纯化过程中能较好保持目标蛋白的生物活性。本文在阐述肝素与层析介质化学反应机理的基础上,系统论述了溴化氰活化及偶联法、环氧活化及偶联法、席夫碱法和碳二亚胺缩合法四种肝素亲和层析介质制备方法,深入分析了各制备方法的优缺点,总结了肝素亲和层析在血液制品、病毒纯化方面的应用。最后,进一步分析了肝素亲和层析在蛋白分离纯化领域应用存在的问题,并展望了其未来发展趋势,以期为肝素亲和层析介质的制备方法提供新思路。     

Fe_3O_4纳米粒子与慢病毒载体共同感染内皮祖细胞的促血管新生和MRI示踪的应用

采用化学共沉淀法制备了柠檬酸钠修饰Fe_3O_4纳米粒子(NPs),使用胎牛血清(FBS)改善Fe_3O_4NPs的分散性.实验表明Fe_3O_4NPs尺寸均匀,且具有良好的稳定性,FBS浓度小于5%(体积分数)时,Fe_3O_4NPs无聚集沉淀;在300 K下,饱和磁化强度达到74.86×10~(-3)A·m~2/g(74.86 emu/g);核磁共振T2序列成像时,75μg/m L Fe_3O_4NPs与慢病毒载体(LV)共同标记内皮祖细胞(EPCs)成像效果良好;而且EPCs具有稳定过表达目的基因血管内皮生长因子(VEGF)的能力.利用Fe_3O_4NPs与LV共同感染EPCs,可有效促进大鼠血管生成.说明修饰后的EPCs兼具核磁共振成像(MRI)示踪和促血管生成双重功能.     

一种识别病毒和蠕虫的算法

对现有的恶意软件检测算法进行研究之后发现,某些检测算法只能检测一种恶意软件,并且部分传统的检测算法在检测恶意程序时漏检率偏高。针对目前现有的检测算法缺乏综合性检测能力的短板,在此文中提出了一种新的检测算法,该检测算法具有一定的综合检测能力。新算法的思路如下：第一步区分某种软件是恶意软件还是非恶意软件,如果是恶意软件则提取其特征码,然后使用决策树根据恶意软件的特征码对恶意软件进行识别和分类,如果存在特征码不能识别的恶意软件,那么再根据病毒和蠕虫的特征使用相似性计算算法对未知的恶意软件进行相似性计算,最后使用决策系统对相似性算法计算的结果进行决策,该恶意软件是病毒还是蠕虫。将相似性计算算法,决策树和决策系统在检测恶意软件算法中进行应用是本文的创新之处。     

用微束激光穿刺技术将商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA导入马铃薯的研究

以马铃薯(Solanum tuberosum L.)品种“津引8号”微薯切片作为外植体,采用微束激光穿刺技术获得了商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA的导入、整合与表达.实验首次利用庆大霉素筛选马铃薯再生苗,庆大霉素筛选浓度为80mg/L,共得到65株庆大霉素抗性苗,全部移栽成活.PCR扩增和PCR-Southern杂交分析表明,PAP cDNA已经稳定整合到马铃薯基因组.攻毒实验发现,多数转基因植株生长健康,对供试病毒PVX具有高度抗性.     

对土壤及玉米植株中均三氮苯类除草剂的残留分析

土壤或玉米植株样品用Ｖ（甲醇）∶Ｖ（乙腈）＝１∶１提取,提取液用石油醚净化后,浓缩液过Ｃ１８小柱净化,最后用Ｎｏｖａ－ＰａｋＣ１８柱进行ＨＰＬＣ分析。回收率：氰草津为８２．４％～９９．８％,莠去津为８５．６％～１０２．３％,西草净为８９．１％～１０８．４％。     

一阶导数法在裂解色谱法中的应用

运用一阶导数数学方法对色谱馏出曲线的基本速率方程求导,应用导数光谱装置实现模拟微分,得到一阶导数色谱图。不但为裂解色谱特征的定性鉴别提供了又一个有力的手段,而且给色谱图数学方法的处理理论及信息转换以新的启迪。     

艾滋病（AIDS）病毒抗体检测方法研究进展

对艾滋病(A IDS) 病毒抗体检测方法的研究进展作了较系统的评述。从抗原试剂的构成及样品的来源等方面对各种检测方法进行归纳分类。论述了病毒抗体检测方法研究发展的三个阶段, 分析比较了各种艾滋病毒抗体检测方法的优缺点。给出125 篇参考文献。     

多糖类免疫调节剂的研究和应用

本文综述了从自然界分离出来的多糖的研究进展、存在问题和应用前景。讨论了多糖的免疫调节特性和作用、多糖的结构与功能以及它们的应用。     

鸭源H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆、序列分析及原核表达

参照GenBank收录的H9N2亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因序列设计并合成引物,以鸭源H9N2亚型禽流感病毒RNA为模板,利用RT PCR方法扩增了预计约1700bp的HA基因,将此扩增产物克隆进pMD18 T载体,采用限制性酶切及序列测定鉴定阳性重组克隆子.测序结果表明HA基因长为1683bp.基于HA蛋白的信号肽在表达中的负面作用,本研究通过基因工程手段缺失HA蛋白位于起始的信号肽的编码序列,获得了缺失HA蛋白信号肽的HA基因,并将其亚克隆到pGEX KG中,与GST融合表达.SDS PAGE结果显示:融合表达的蛋白分子量约为90×103.Western印迹表明表达蛋白具有免疫活性.