高效抗虫转基因烟草的研究

苏云金杆菌HD-1的杀虫蛋白基因经5′端改造,3′端进行4种不同长度缺失后插入到含有双增强子的35S启动子,翻译增强子“Ω′”片段的双元载体中,借助土壤农杆菌LBA 4404将在此双元载体上的杀虫蛋白基因及新霉素磷酸转移酶基因(NPTII)转入到生产品种烟草NC89的染色体上,从而获得了抗卡那霉素的转化再生烟草植株。用1—3龄烟青虫对这些转化植株进行大量重复虫试结果表明用4种不同长度B.t.基因转化的再生植株中都有抗虫性高的植株,其中以1.8kb的B.t.Cry IA(c)基因转化的植株杀虫效果最好,这一组转基因植株的平均杀虫率在90—100％的约占该组总虫试植株的50％。对高抗虫性植株的子一代(T1)和子二代(T2)进行遗传分析,分子生物学分析和进一步的抗虫试验表明B.t.基因已遗传到子代并初步选到了高抗虫性的转基因纯合株系D8-14和D19-8等。     

调节肽在休克发病中的作用

本文探讨了三种调节肽在休克发病中的作用。结果表明:(1)败血症休克大鼠血浆内皮素(ET)成倍增加,给健康大鼠持续滴注低剂量ET可致明显的休克表现,而给轻度失血休克大鼠静滴ET,则致休克不可逆,用特异的ET-抗血清治疗休克,具有明显疗效;(2)败血症休克大鼠血浆降钙素基因相关肽(CGRP)增加2.6倍,休克早期或晚期运用低剂量CGRP治疗都具有显著疗效;(3)休克大鼠心肌、主动脉组织血管紧张素Ⅱ明显增加,休克早期抑制其增加可加剧休克,晚期抑制其升高则具有显著疗效.结论认为,ET是参与休克发病的重要体液因素,CGRP参与休克时机体的代偿调节,组织血管紧张素Ⅱ在休克不同时期作用不同。     

大肠杆菌(Escherichia coli)K99抗原基因在小肠结肠炎耶氏菌(Yersinia enterocolitica)中的表达

本文通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、双向免疫扩散及Western吸印实验,证明大肠杆菌(Escherichia coli)K99抗原基因在小肠结肠炎耶氏菌(Yersinia entero-colitica)无毒菌株D29(pFS239)和L15(pFS239)中表达,比较了K99基因在Y. enterocolitica与E. coli中表达条件的异同,并推测K99抗原蛋白在Y. ente-rocolitica中以纤毛的状态存在于细胞表面。本文是关于不同属的经克隆的基因在Y. enterocolitica中进行表达的首次报道。     

PEG化壳聚糖/DNA自组装复合物的制备、表征和体外Hela细胞转染研究

通过有机合成和高分子聚合等方法将亲水性的聚乙二醇接枝到壳聚糖的氨基侧链上，得到了改性的壳聚糖—聚乙二醇接枝共聚物，应用现代波谱等技术对中间产物和最终产物进行了表征，采用绿色荧光蛋白基因质粒pEGFP—N1为DNA模型，在溶液中通过自动(静电)吸附得到PEG化的壳聚糖／DNA自组装复合物，初步研究了该自组装复合物对Hela细胞的体外转染效率。结果表明，活化的聚乙二醇被成功地接枝到壳聚糖上，使不溶于水的壳聚糖改性为水溶性的PEG化的壳聚糖。PEG化壳聚糖／DNA自组装复合物在Hela细胞体外转染率达到81％。因此，PEG化的壳聚糖有可能成为基因转染的非病毒载体。     

aprE基因表达的分子生物学和微量热法分析

利用分子生物学方法(SDS-PAGE和酶活检测法)未检测到所克隆的aprE基因在大肠杆菌中的表达产物(碱性蛋白酶), 而微量热法检测结果发现: 重组菌株的生长代谢产热曲线之间存在明显的差异. 根据这些差异, 分析了该基因的上、下游调控序列对该基因在大肠杆菌中表达的重要作用, 从而进一步对该基因进行了亚克隆, 得到了生物学方法可检测到的表达产物. 由此推测, 微量热技术有可能为检测外源基因表达及其调控, 以及为指导进一步基因工程操作提供一种新的快速灵敏的技术和方法.     

Imaging Array SPR Biosensor Immunoassays for Sulfamethoxazole and Sulfamethazine

A homemade array surface plasmon resonance (SPR)-based imaging biosensor was used to develop sensitive and fast immunoassays to determine sulfamethoxazole (SMOZ) and sulfamethazine (SMT) in buffer. Two conjugations of sulfonamide-bovine serum albumin (BSA) were separately immobilized on two different rows of the array chip with one row as reference. The immobilization was carried out in the instrument to monitor the quantity of the conjugations immobilized. The antibody mixed with the sulfonamide in the buffer was injected over the surface of the chip to get a relative response which was inversely proportional to the concentration of the sulfonamide in the PBS buffer. Two calibration curves were constructed and the limit of detection for sufamethoxazole in buffer was 3.5 ng/mL and for sulfamethazine 0.6 ng/mL. The stability and specificity of the antibody were also studied. The monoclonal antibody did not bind with BSA.     

中国春Ta1 kr ph1b综合体的培育、鉴定及在外源基因导入中的利用

本文利用带有Tal基因的普通小麦与中国春phlb突变体杂交,并用中国春phlb突变体连续回交,培育出了中国春Tal kr phlb基因综合体。由于在这个综合体中含有Tal和kr基因,所以用它与野生小麦杂交时不用人工去雄授粉便可获得较大量的远缘杂种种子,又因它具有phlb基因,杂种F_1部分同源染色体又可配对交换。而把外源有益基因多快地导入普通小麦中。所以这个综合体是一个强有力的远缘杂交及外源基因导入到普通小麦中的工具。     

国家自然科学基金委员会化学科学部色谱分析化学发展战略研讨会纪要

上世纪末“人类基因测序”被认为是一项类似人类登月的伟大工程，正是分析化学家对毛细管电泳分析方法的重大革新，促使这项伟大的工程得以提前完成，从而揭开了后基因时代的序幕。功能基因组学、蛋白组学、代谢组学和糖组学等组学的发展，生命科学、环境科学和材料科学等领域的发展，向分析化学提出了更高、更严峻的挑战，也为分析化学的发展提供了新的机遇。     

壳聚糖和普朗尼克介导猪白细胞介素-23基因体内表达对PRRSV疫苗的免疫增强效应

猪繁殖和呼吸综合征(PRRS)是一种严重影响养猪业的高度传染性疾病,目前预防这种疾病的疫苗免疫还存在一定缺陷。本研究旨在探索一种有效的佐剂以提高其免疫效力。将猪IL-23基因重组质粒用壳聚糖和普朗尼克材料包裹制成纳米颗粒,命名为VRIL23-CNP-Pluronic。将28日龄小鼠分为两组,分别肌肉注射VRIL23-CNP-Pluronic(实验组)和VR1020-Pluronic(对照组),两组均同时接种PRRSV疫苗,在接种后第0、7、14、28和35天采集血样并分析免疫变化。实验组中PRRSV特异性抗体、IgG1和IgG2a水平、CD4+和CD8+T淋巴细胞数量均极显著高于对照组(p0.01);经qRT-PCR分析,与对照组相比,实验组小鼠的IL-23、TLR1、TLR6、STAT1、IL-10、TNF-α、IL-15和CD62L基因表达水平均极显著上调(p0.01)。结果表明,VRIL23-CNP-Pluronic能促进小鼠对PRRSV疫苗的免疫应答,并为其作为新型PRRSV疫苗佐剂的开发提供理论基础。     

乙型肝炎病毒DNA的结构研究

本文用末端终止法测定的HBV adr NC-1 DNA全顺序与其它五株HBV DNA进行了比较,发现一些共同的结构特点,在DNA中有多处与原核生物启动子核心相同或相似的顺序和二元对称结构,二者紧密相连或相重叠,在框架后有ATAA,在adrNC-1s基因前有增强子核心顺序,将框架及其前后的调控顺序作为转录单元,对可能存在的新框架进行了讨论。