幽门螺杆菌的左氧氟沙星耐药性及其基因分析

分析了宁波地区幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）对左氧氟沙星的耐药情况,探讨了Hp对左氧氟沙星的耐药机制.取患者胃黏膜组织分离培养Hp,检测Hp对左氧氟沙星的耐药率;提取左氧氟沙星耐药Hp DNA,PCR扩增并测序比较.结果表明：宁波地区Hp对左氧氟沙星的耐药率为22.5%,左氧氟沙星耐药Hp菌株gyrA基因91位密码子发生点突变.提示宁波地区Hp对左氧氟沙星已产生一定的耐药性;左氧氟沙星耐药Hp gyrA基因突变可能是本地区左氧氟沙星耐药的重要原因之一.     

毛细管电泳法检测肺癌p53基因第七外显子的突变

p53基因点突变在肺癌的发生过程中起重要作用,检测基因点突变的方法学研究将有助于临床准确诊断肺癌.本实验用PCR扩增包含249位密码子的肺癌及癌旁正常组织p53基因第七外显子,扩增样品分别经96 ℃变性和HaeⅢ酶切处理,以CE-SSCP、CE-RFLP、PAGE-SSCP和PAGE-RFLP对其突变情况进行检测,并从上样量、时间、检出限和检出率4个方面进行比较.PAGE凝胶浓度为15%;CE筛分介质PEO浓度3.0%,pH 8.2,电压15 kV,温度15 ℃,λex=488 nm,λem=520 nm荧光检测.检出率由高到低分别为:CE-SSCP>PAGE-SSCP>CE-RFLP>PAGE-RFLP.CE-SSCP可作为大规模肺癌早期诊断的简便可靠的方法.     

2’-脱氧胞苷-5’-磷酸羟基加合物的分子结构与电子结构

使用密度泛函理论(DFT)的B3LYP/DZP++研究了羟基自由基与2’-脱氧胞苷-5’-磷酸(dCMP)的胞嘧啶环加成产物的分子结构与电子结构. 结果表明, dCMP胞嘧啶环中各C原子上的单羟基加合物的相对稳定性顺序为C5>C6>>C4≥C2. 加合物的稳定性、自旋密度、静电势以及dCMP的电子密度、静电势、电荷分布分析表明, dCMP遭遇多个羟基自由基攻击时, 第一个羟基自由基加在dCMP的C5上, 而C6则成为第二个羟基自由基的进攻目标. 反应中一旦形成了C2-位单羟基加合物, 则极有可能在DNA复制过程中引起致命的基因突变, 也可能诱发DNA-DNA以及DNA-蛋白质的链间交联, 引起更复杂的损伤. 相反, C5、C6-位上单羟基加合物的形成对DNA的稳定性不构成直接威胁.     

毛细管电泳-限制性片段长度多态性快速检测胃癌组织中P53基因点突变的方法

为建立毛细管电泳快速高效检测小于70bp双链DNA的方法。对毛细管电泳过程中的各参数进行了考察,最终得到最佳分离体系(筛分介质浓度8%,添加剂甘露醇浓度8%,pH6.5,温度15℃,电场强度275V/cm),并将该体系用于临床59例胃癌患者肿瘤组织基因248位、249位密码子点突变情况的检测,30min之内同时检测了两个密码子位点的突变情况,实现了35bp和40bpDNA片段的基线分离,且分离度较高(1.642),初步建立了快速、高分辨诊断胃癌的方法。     

遗传算法过早收敛现象的马氏链分析

GeneticAlgorithmsarealtitudeparalleling ,self_adaptingandrandomsearchmethodsthatbasedonideasfromnaturalchoiceandnaturalgenetics.Theyarealsobionicoptimumalgo rithmsdrewonbiologicalevolutionespeciallygenetictermsandprincipal.ThedefinitionofconvergenceofGAshadmayvarieties ,includingconvergenceindistribution ,inprobability ,inprobability 1andconvergencealmosteverywhere ,etc ..EvenforGAsmodel,differentdefini tionhaddifferentlimit.Itmightbeglobaloptimalsolution ,localoptimalsolutionornonopti malso…     

毛细管电泳检测肺癌基因突变的方法学研究

建立了一种毛细管电泳快速高效检测聚合酶链反应(PCR)扩增产物以及限制性内切酶酶切产物的方法,使其更好地用于基因诊断.以聚环氧乙烷(poly(ethylene oxide),PEO)为筛分介质,用涂层的毛细管柱(37 cm×75 μm,有效长度27 cm)分离pUC19 DNA/MspⅠ(HpaⅡ) Marker标准DNA片段.考察了筛分介质的质量浓度、pH值、毛细管柱的温度和运行电压.在1×TBE (pH 8.2)电泳液、电压15 kV、温度15 ℃,于10 min内成功分离了Marker标准DNA片段.该方法快速、灵敏、准确,用于临床76例肺癌患者正常组织和肿瘤组织p53基因和ras基因点突变情况的检测,结果满意.     

多态性及基因测序分析方法研究苯丙酮尿症患者的基因突变

应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析及基因测序的方法,分析35例苯丙酮尿症患者PAH基因第6和7外显子以及其两侧部分内含子序列,进行了突变的筛查和确定.研究吉林地区苯丙酮尿症人群中苯丙氨酸羟化酶(Phenylalanine hydroxylase,PAH)基因突变特征.结果显示:(1)在70个PAH等位基因中共检测出9...     

人新型肿瘤坏死因子在E.coli中的 高效表达、纯化及诱导凋亡活性

采用PCR技术获得了新型的人肿瘤坏死因子基因,在153位氨基酸处引入突变,使Gly突变为Leu.将突变体hTNF基因克隆到表达载体pQE30中,SDS-PAGE结果显示经IPTG诱导后,hTNF基因获得大量表达.通过Ni金属鳌合层析柱亲和层析获得到纯化的hTNF融合蛋白,Westernblot结果表明hTNF蛋白可与抗TNF的抗血清发生特异性反应.荧光染色实验检测了hTNF蛋白诱导细胞发生凋亡的活性.     

遗传密码是怎样破译的

文章具体介绍了遗传密码破译的过程：三联体密码的提出；克里克对遗传密码性质的阐述和实验证明；尼伦伯格关于同聚核苷酸对应的氨基酸的发现；奥乔亚关于异聚核苷酸对应的氨基酸的发现；科拉纳关于密码子系列次序的确定；全部密码子的破译及其特征．