草鱼CCL4基因的克隆及表达

草鱼CCL4基因全长854 bp,最大开放阅读框位于104~397 bp,编码97个氨基酸,其中32~73氨基酸为其保守的CC趋化因子家族结构域,N-端有1个由24个氨基酸组成的信号肽。草鱼CCL4与斑马鱼的同源性为69%,与其他鱼类和哺乳类的同源性在50%以下。系统进化分析也显示其与斑马鱼CCL4基因的亲     

D-氨基酸氧化酶基因在大肠杆菌中的诱导表达

利用乳糖代替IPTG作为诱导剂,对重组大肠杆菌BL21(DE3)/pWY中的D-氨基酸氧化酶进行诱导表达。分别研究了乳糖浓度、菌体浓度、诱导温度、诱导时间对DAAO酶活的影响。结果显示,当菌浓OD600达1.0左右、乳糖浓度为10 g/L、28℃下诱导约6 h,摇瓶发酵得到的DAAO酶活高达2 400 IU/L,     

岱衢族大黄鱼不同组织的同工酶谱

于2006年11月,在象山港采集30尾网养岱衢族大黄鱼,采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳方法,研究分析了岱衢族大黄鱼眼睛、肌肉、肝脏、肾脏、脾脏、心脏、胸鳍、鳃和脑9种组织中16种同工酶（LDH、ADH、MDH、ME、SOD、POD、EST、GAD、ALP、ATP、FDH、SCD、IDH、GDH、ACP、GcDH）的表达情况,发现除IDH、GDH、ACP、GcDH 4种酶只显示微弱且不稳定的区带外,其他酶类在各组织中都显示出清晰稳定的酶谱,且这些酶在表型、分布和活性上均表现出高度的组织特异性,与各组织的生理功能相一致.     

幽门螺杆菌临床菌株主要蛋白抗原表达及其诱导宿主产生抗体差异性的研究

建立了基于幽门螺杆菌重组蛋白抗原rUreB、rHpaA、rVacA、rCagAl、rNapA、rFlaA和rFlaB的ELISAs,用于检测幽门螺杆菌临床菌株上述抗原表达率和幽门螺杆菌感染病人血清IgG阳性率,另采用PCR检测临床菌株中上述抗原编码基因携带率,以期为选择幽门螺杆菌基因工程疫苗抗原提供依据．实验结果显示,rUreB、rHpaA、rVacA、rCagAl、rNapA、rFlaA和rFlaB表达量分别约为细菌总蛋白的35％、32％、15％、230．4、56％、25％和20％．各重组抗原均能与商品化幽门螺杆菌抗血清（DAKO）产生阳性WesternBolt结果,免疫家兔能产生特异性抗体．从332例慢性胃炎或消化性溃疡病人胃黏膜活检标本中,分离获得145株幽门螺杆菌,其阳性率为43．8％．所有幽门螺杆菌临床菌株均表达UreB、HpaA、FlaA和FlaB,52．4％、91．7％和93．1％菌株分别表达VacA、CagA和NapA．145例幽门螺杆菌感染的病人血清中,UreB、HpaA、VaeA、CagA、NapA、FlaA和FIaB的IgO抗体阳性率分别为100％、86．9％、42．8％、70．3％、89．7％、84．8％和79．3％．此外,不同胃疾病标本中幽门螺杆菌分离率均无显著性（P〉0．05）,但菌株VaeA和NapA表达率与疾病严重程度相关（P〈0．05）．综合分析实验结果,ureB是研制幽门螺杆菌基因工程疫苗首选抗原,其次是NapA和HpaA;各病种与幽门螺杆菌感染率无关,但与菌株毒力有关．     

可溶性人源含硒抗体酶GPx的研究

对噬菌体展示人单链抗体库进行筛选,得到与半抗原S-二硝基苯取代的谷胱甘肽二丁酯特异结合的单链抗体3B10。用计算机模拟分析了单链抗体的空间结构,发现抗原结合的CDR3区位于抗体的表面,推测其可能进一步参加硒化反。利用突变引物,在大肠杆菌中表达了可溶性抗体蛋白,并用化学方法将催化必需基团硒代半胱氨酸（Sec）组装到3B10抗原结合部位,获得了具有谷胱甘肽过氧化酶活力的人源抗体酶。动力学研究结果表明,抗体酶和天然酶一样,符合乒乓反应机制。     

P53蛋白在胃肠道恶性肿瘤切缘组织中表达的临床研究

目的：探讨了以P53蛋白为代表的分子切缘与常规细胞病理切缘的关系以及切除肿瘤各边缘5．0cm的组织是否安全可靠,方法：对49例胃肠道恶性肿瘤的瘤中心组织及肿瘤边缘每隔0．5cm取材至上,下切缘5．0cm处,采用免疫组织化S－P法检测P53蛋白,并对应位点的病理切片相比较,结果：距肿瘤切缘愈远,P53蛋白表达率愈低,P53蛋白阳性表达与细胞病理切缘阳性在各位点上相一致,在胃癌中,上切缘阳性范围不超过2．5cm,下切缘不超过3．0cm;在大肠癌中,上切缘阳性不超过1．0cm,下切缘阳性不超过1．5cm,结论：以P53为代表的分子切缘的概念可补充细胞切缘的概念,两者结合有助于提高病理诊断的准确性和可信度,距胃肠道恶性肿瘤各边缘5．0cm的切缘范围是安全可靠的。     

双龙方组分诱导大鼠BMSCs分化的差异基因筛选及聚类分析

利用基因芯片筛选双龙方有效组分(总人参皂苷及总丹酚酸)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)类心肌细胞分化过程中的差异表达基因, 并对其进行聚类分析, 在基因水平研究了双龙方组分对大鼠BMSCs分化的影响. 对大鼠BMSCs进行分组培养, 分别收集10, 20, 30及40 d的细胞样本, 提取tRNA, 经基因芯片检测, 筛选出BMSCs变化过程中的差异表达基因并进行生物信息学分析, 同时通过差异表达基因对样本进行Hierarchical聚类分析. 在BMSCs的分化过程中, 筛选出179条差异表达基因, 经分析发现它们与能量代谢和信号传导等多类基因密切相关. 对样本进行聚类分析发现其聚为两大类: 10和20 d的样本聚为一类, 30和40 d的样本聚为一类. 说明BMSCs在20~30 d之间可能发生了显著的改变.     

关于有机物通式的推导

在中学化学教材中有很多化学基本概念,是进一步深入学习化学知识的基础。学习有机物有关知识时,同系物及通式是一个重要概念,烷烃、烯烃、炔烃及苯的同系物等的通式在教材中只是直接给出,没有推导过程。而同系物通式的推导,既能培养学生寻找规律的能力,又能训练表达规律的技能,同时能深刻理解通式的内涵。在学生“最近发展区”内编制针对性练习,来充实、丰富概念的内涵和外延,一者可使学习概念赋予“新意”,     

人t-PA P区在大肠杆菌中表达及其活性研究

用PCR方法获得编码人组织型纤溶酶原激活物（tissure-typeplasminogenactivator,t-PA）C端P区肽段的DNA,并经测序证实,长810bp,含有全部的t-PA的丝氨酸蛋白酶编码序列.将这段序列克隆到表达载体pQE30中转化大肠杆菌JM109菌株,经SDS-PAGE检测转化菌株中表达出分子量约29×103的蛋白,用纤维平板法测定激活纤溶活性,结果表明表达的t-PA蛋白C端P区具有很强的激活纤溶蛋白酶原的活性.证实t-PA蛋白C端P区的酶结构区的功能是独立的,其生物活性不受其它区域影响．