全文获取类型
收费全文 | 339篇 |
免费 | 30篇 |
国内免费 | 86篇 |
专业分类
化学 | 250篇 |
力学 | 6篇 |
综合类 | 75篇 |
数学 | 48篇 |
物理学 | 76篇 |
出版年
2024年 | 2篇 |
2023年 | 10篇 |
2022年 | 6篇 |
2021年 | 5篇 |
2020年 | 12篇 |
2019年 | 8篇 |
2018年 | 1篇 |
2017年 | 10篇 |
2016年 | 8篇 |
2015年 | 8篇 |
2014年 | 21篇 |
2013年 | 17篇 |
2012年 | 19篇 |
2011年 | 17篇 |
2010年 | 26篇 |
2009年 | 31篇 |
2008年 | 29篇 |
2007年 | 21篇 |
2006年 | 29篇 |
2005年 | 23篇 |
2004年 | 20篇 |
2003年 | 13篇 |
2002年 | 15篇 |
2001年 | 12篇 |
2000年 | 14篇 |
1999年 | 10篇 |
1998年 | 13篇 |
1997年 | 5篇 |
1996年 | 7篇 |
1995年 | 6篇 |
1994年 | 10篇 |
1993年 | 4篇 |
1992年 | 2篇 |
1991年 | 7篇 |
1990年 | 9篇 |
1989年 | 3篇 |
1988年 | 1篇 |
1986年 | 1篇 |
排序方式: 共有455条查询结果,搜索用时 171 毫秒
101.
重组人干扰素—γ的凝胶色谱分离及其变性剂对分离结果的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
使用十二烷基硫酸钠,盐酸胍和尿素三种不同的变性剂溶解基因重组人干扰素-Gamma(r-IFN-γ)包含体,然后进行凝胶色谱分离。使用活性,电泳和高效疏水作用色谱三种方法,比较了三种变性剂对分离结果的影响,结果为:尿素溶解包含体后r-IFN-γ的分子量与杂质相差较大,盐酸胍溶解液经分离后r-IFN-γ比活最高,SDS对r-IFN-γ的构象影响较大。 相似文献
102.
103.
利用PCR以实验室构建的原核重组表达质粒pProEX-OCIF为模板扩增得到N末端融合有6×His标签和rTEV蛋白酶识别序列的人破骨细胞形成抑制因子(OsteoclastogenesisInhibitoryFactor,简称OCIF)结构域D1~D6(简称O CIFm)编码基因片段;将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌TOP10,筛选得到阳性重组质粒pMD18-OCIFm,双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm得到OCIFm基因片段;将其定向插入甲醇营养型酵母分泌表达载体pPIC9中,构建获得重组表达质粒pPIC9-OCIFm.测序验证后,以限制性内切酶SalⅠ线化,电穿孔转化酵母宿主菌GS115.筛选得到阳性表达菌株后,甲醇诱导表达4d,SDS-PAGE和Westernblot对表达情况进行分析和确认.所获得的OCIFm基因片段在甲醇营养型酵母中表达量占菌体总蛋白的30%以上.利用Ni-NTA树脂对表达产物进行一步亲和层析纯化.活性测定表明纯化的表达产物可诱导体外培养的成熟破骨细胞样细胞的凋亡.表达产物的生物学活性较利用原核表达系统明显提高. 相似文献
104.
本文利用DNA多聚酶链锁反应(PCR)技术克隆了天坛株痘苗病毒P7.5k启动子,核苷酸序列分析结果表明:天坛株7.5k启动子与WR株7.5k启动子比较,在其155bp中除存在3处点变异外,尚有一段7bp的自然缺失突变,其中4个碱基位于晚期转录起始位点,变异率高达6.45%。然而功能研究结果显示:天坛株和WR株P7.5k均为早晚期启动子,在哺乳动物细胞中两者的启动强度及功能时相均无明显差异。这表明:痘苗病毒基因存在多个转录起始位点是维持其遗传稳定性的一种自身保护机制。 相似文献
105.
A study of the effect of drug, kanamycin, on the growth metabolism of recombinant Escherichia coli B 1 was carded out by microcalorimeter monitoring of the metabolic activity of treated cells. Power-time curves of growing recombinant Escherichia coli cell suspensions, treated with different kanamycin doses, were recorded. The extent of the effect was evaluated by changes in the slopes of the microcalorimetric curves and the kinetics of the drug action was interpreted from the time at which these changes reached their maximum values and maintained their maximum values. Experimental dose-effect relationships conform to the median-effect principle of the mass-action law: fa/(1-fa)=(D/D50)^m. A plot of y=lg[(fa)^1-1]^-1 versus x=lg D gives the slope m, D50 and R∞. The experimental results revealed that high concentration of kanamycin had an inhibitory effect on the growth of recombinant Escherichia coli B 1 in the lg phase, and had a promoting effect in the stationary period. Moreover, it was demonstrated that microcalorimetry was a reliable method for the detection of modulatory effects in biology. 相似文献
106.
通过建立电子转移过程的活化模型和重组模型,提出了用量子化学从头算方法研究电子转移过程内层重组能和活化能的新方法.在UMP2/6-311G水平上获得了5对过渡金属水合离子体系M(H2O)2+/3+6(M=V,Cr,Mn,Fe,Co)自交换反应的内层重组能和活化能,获得了与Marcus电子转移理论相一致的结果 相似文献
107.
通过建立电子转移过程的活化模型和重组模型, 提出了用量子化学从头算方法研究电子转移过程内层重组能和活化能的新方法. 在UMP26/311G水平上获得了5对过渡金属水合离子体系M(H2O)26+/3+(M= V, Cr, Mn, Fe, Co)自交换反应的内层重组能和活化能, 获得了与Marcus电子转移理论相一致的结果. 相似文献
108.
目的:提高草原兔尾鼠(L agurus lagurus)卵透明带3(LZP 3)基因在酵母细胞中表达的水平.方法:利用重叠PCR技术,定点突变LZP 3基因上6个稀有的密码子簇,将LZP 3基因中11个稀有的密码子更换成毕赤酵母(P ich ia Pastoris)最常用的相应密码子.将获得的LZP 3突变基因(LZP 3m)插入pGAPZαA中,构建穿梭表达载体.以重组体转化P ich ia Pastoris SM D 1168菌株进行表达.结果:LZP 3m基因的表达量比野生型LZP 3基因明显提高.结论:通过密码子优化,能显著提高LZP 3基因在酵母细胞中的表达水平. 相似文献
109.
110.
以微电子机械系统技术而发展起来的聚合酶链式反应(Polymerase Chain Re-action,PCR)生物芯片/微装置,由于具有所需样品和反应混合物体积少,反应速度快以及集成化程度高等优点而日益引起人们的重视。实时定量PCR是利用能特异标记PCR产物的荧光染料来动态显示PCR产物的累积,从而得到PCR扩增曲线的技术。本文介绍了实时定量检测技术及其在PCR生物芯片/微装置中的应用。 相似文献