含环碳酸酯基新型聚合物载体的合成及固定化葡萄糖淀粉酶研究

碳酸亚乙烯酯(VCA)分子中的反应性环碳酸酯基可于温和条件下与氨基发生反应形成稳定的氨基甲酸酯.利用这一性质,将含-NH₂基团的酶分子直接以σ键的形式固定于含有环碳酸酯基的聚合物载体上.本文通过反相悬浮聚合,以液体石蜡为介质,VCA为反应性单体,甲基丙烯酸-β-羟乙酯(HEMA)及丙烯酸羟丙酯(HPA)为亲水性共聚单体,合成出一系列交联树脂聚合物.以此聚合物为载体对葡萄糖淀粉酶进行固载实验,表现出良好的固定化性能.同时,固定化酶的稳定性也有所提高.     

10种野生植物果实对α-淀粉酶和酪氨酸酶的抑制作用及其酚类化合物含量和抗氧化活性研究

考察了10种可食用野生植物果实对α-淀粉酶和酪氨酸酶的抑制作用,结果表明,山荆子果实提取物对α-淀粉酶的抑制能力最强,其IC₅₀值与常见的α-淀粉酶抑制剂阿卡波糖接近。因此,山荆子果提实取物有望用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病。采用1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)法测定了水果的抗氧化活性,采用Folin-Ciocalteu比色法和pH示差法测定总酚含量和总花青素含量,采用高效液相色谱(HPLC)法测定7种酚酸的含量。结果表明,10种野生水果对酪氨酸酶的抑制能力与其总酚含量和抗氧化活性均高度相关。冷冻野生水果中总酚的含量范围为617.3～7447.4μg/g,其中, 8种野生水果显示出高抗氧化能力。新鲜水果和冷冻水果的抗氧化能力之间的显著相关性表明,在液氮中快速冷冻水果并磨粉的保存方法对野生水果的抗氧化活性影响较小。     

应用圆二色光谱研究电场对α-淀粉酶二级结构的影响

α-淀粉酶被不同强度的电场作用，用圆二色光谱（CD）研究不同强度的电场对α-淀粉酶二级结构的影响。结果表明：不同强度的电场对α-淀粉酶的α-螺旋、β-折叠、β-转角及无规卷曲相对含量的影响程度不同；电场作用具有使α-淀粉酶的二级结构由α-螺旋、无规卷曲向β-折叠及β-转角转化的趋势。研究结果对解释电场处理种子生物效应具有重要意义。     

3-甲基吲哚对胰α-淀粉酶部分性质的影响

利用利紫外差光谱、荧光光谱研究了3-甲基吲哚(粪臭素)与胰α-淀粉酶的相互作用。Stern2—Volmer淬灭曲线显示粪臭素对胰α-淀粉酶的荧光猝灭是静态猝灭。以lg[(F0-F)/F]对lg[Q]作线性拟合得出其结合常数KA=4.61×103(mol/L)-1,与结合位点数n=0.83。     

酶法制备微孔淀粉的研究进展

微孔淀粉是淀粉酶在低于淀粉糊化温度下水解生淀粉形成的一种新型变性淀粉.本文综述了酶法制备微孔淀粉的一些相关影响因素,并探讨了酶法制备微孔淀粉的基本研究成果和进展,以及酶法淀粉微孔化技术的前景展望.     

多功能淀粉酶固定化中的底物保护效应

以壳聚糖为载体,通过正交实验确定了用壳聚糖凝胶微球固定多功能淀粉酶OPMA-N的最适条件:以20 mg/m L戊二醛交联,在25℃及p H=6.5条件下固定1.5 h,但需在引入底物淀粉介导的保护效应后,才能获得良好稳定性的固定化OPMA-N(IOPMA-N),显示了底物保护效应在催化部位占分子中较大区域的酶(如OPMA-N)固定化过程中的重要性.对比分析游离酶与固定化酶的性质与功能发现,在50℃及p H=6.0~7.0条件下,IOPMA-N的表观比活力比游离酶OPMA-N提高3倍以上,催化效率(kcat/Km)提高4倍以上,对弱酸性至中性及常温(30~50℃)环境的耐受性明显高于OPMA-N,并具有良好的操作稳定性和储存稳定性,重复使用15次后,酶活力仍然能够保持75%,在4℃下储存半衰期达31 d,而OPMA-N在4℃下储存5 d后活力基本丧失.催化产物的对比分析结果表明,OPMA-N固定化后,水解活性明显提高,但同时转苷活性有所下降,这与已报道的OPMA-N分子中2种催化活力存在平衡机制的结论一致,同时也表明在OPMA-N的固定化中底物淀粉对其水解活性有明显的保护作用,但对其转苷活性几乎无贡献.     

铈对猪胰α-淀粉酶活性影响的研究

在α 淀粉酶介质中加入Ce3+ ,研究了对α 淀粉酶活性影响及其对酶中Ca2 + 的竞争结合作用。低浓度下 (0 .5～ 10mmol·L- 1 ) ,Ce3+ 对α 淀粉酶具有激活现象 ,而高浓度则抑制酶活力。在高浓度下 ,Ce3+ 能完全竞争出α 淀粉酶中的Ca2 + 。荧光滴定表明Ce3+ 能够完全占据Ca2 +的结合位点     

辐射聚合固定化α—淀粉酶的研究

用低温辐射聚合法将α-淀粉酶固定到聚甲基丙烯酸-β-羟乙酯载体上。研究了低温辐射聚合固定化的条件;讨论了不同固定化酶对淀粉转化成还原糖的相对活性及其重复使用的稳定性;探索了载体微孔结构与固定化酶活性的关系。结果表明,在真空体系内,酶用量≥250μg/mL、单体浓度在30％～40％之间,于-50℃～-55℃范围内进行5.6×10~5rad剂量的辐射聚合,所得固定化酶重复使用10多次其相对活性仍可保持在30％以上。     

α-淀粉酶在阴离子化PET表面的自组装膜及其AFM研究

采用分子沉积技术制备了α-淀粉酶的自组装膜，并用AFM研究了在不同的pH值溶液和不同电荷密度基底上得到的自组装膜。结果表明：pH值从6.0变到4.0，形状变得尖细，膜中陷点多；基底的电荷密度增大时，酶分子的外观形状较细，膜中缺陷点少；α-淀粉酶自组装膜的厚度保持约5～10nm。     

用酶分解法研究淀粉糊化

本文用酶分解法对土豆、甘薯和玉米三种淀粉,在不同条件下的糊化作了研究。得出了三种淀粉开始和完全糊化的温度和时间;测定了糊化反应的动力学,并从糊化温度与反应速度常数的关系,计算了各种淀粉糊化的活化能,还根据Vant Hoff公式计算了三种淀粉糊化的有效热焓变化。