Chemical Modification and Fluorescence Spectrum of Tryptophan Residues in Pullulanase

IntroductionPullulanase(E.C.3.2.1.41)is a debranchingenzyme that can hydrolyze theα-1,6glucosidic bondsin pullulan,amylopectin,andβ-limit dextrin[1].It iswidely applied to starch industry and in the manufactu-ring of malt syrup,high-purity glucose,and f…     

PEG、TEPA与淀粉酶相互作用荧光光谱研究

采用荧光光谱和紫外吸收光谱法研究聚乙烯醇(PEG)和四乙烯五胺(TEPA)与淀粉酶相互作用。 结果表明,PEG会增强淀粉酶内源性荧光和酪氨酸残基所处微环境的疏水性;TEPA对淀粉酶内源性荧光的猝灭机制属于动态猝灭,但同时也存在静态猝灭特征,并使色氨酸残基所处微环境的极性增大;在所考察的范围内, PEG与淀粉酶的结合常数在40 ℃达到最高,TEPA对淀粉酶荧光的动态猝灭结合常数在30 ℃以上趋于最大,PEG、TEPA与淀粉酶之间的作用力属于疏水与静电作用相结合。     

双水相萃取法从发酵液中分离提取α-淀粉酶和蛋白酶的研究

以ＰＥＧ／硫酸铵双水相体系，经一次萃取从α－淀粉酶发酵液中分离提取α－淀粉酶和蛋白酶。萃取最适宜的条件为１５％ＰＥＧ１０００、２０％（ＮＨ４）２ＳＯ４，ｐＨ＝８，α－淀粉酶收率９０％，分配系数为１９．６；与蛋白酶的分离系数高达１５．１，比活率为原发酵液的１．５倍，蛋白酶在水相中的收率高于６０％。本文对反萃取条件进行了初步研究。与传统的提取法相比，本法可直接处理发酵粗滤液，提高工效，降低能耗和酶活损     

Ca2+诱导的淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶分子的生物活性和结构变化

在研究Ca²⁺对淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶分子生物活性影响的基础上, 采用荧光光谱法和傅里叶变换红外光谱法研究了Ca²⁺诱导的酶分子结构变化. 结果表明, 当溶液中Ca²⁺浓度低于25.0 mmol/L时, Ca²⁺对酶分子具有激活作用; 而当Ca²⁺浓度高于25.0 mmol/L时, Ca²⁺对酶分子的生物活性具有抑制作用. 在Ca²⁺诱导的淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶分子结构变化过程中, 酶分子仅发生二级结构的变化, 并不涉及其三级结构. 当Ca²⁺对酶分子具有激活作用时, 酶分子中的无规卷曲结构及β-折叠结构的含量下降, 而α-螺旋结构及β-转角结构的含量上升; 而当Ca²⁺对酶分子生物活性具有抑制作用时, 酶分子中的α-螺旋结构及β-转角结构的含量下降, 而无规卷曲结构及β-折叠结构的含量上升.     

Purification and Characterization of Cold-active α-Amylase Excreted by A Strain of Marine Cold-adaptive Penicillia

The filamentous fungi from the Huanghai sea sludge were screened according to their ability to produce cold-active α-amylase. The strain with the highest amylase activity was identified as Penicilllum species. The α-amylase purified by ammonium sulphate precipitation and column chromatography on DEAE-sepharose and sephadex G-100 shows a molecular weight of about 55000 and a pl of 4. 38. The enzyme is stable in a pH range of 5.5—8.0 and has a maximum activity at pH 6.0. Compared with the α-amylase from mesophiles and thermophiles, the cold-active enzyme shows a high enzyme activity at lower temperatures and a high sensitivity at temperatures higher than 50℃. The optimal temperature is 40℃ and the activity decreases dramatically at temperatures above 50℃. Ca^2 shows a significant effect on maintaining the structure and the activity of the enzyme. EDTA and Cu^2 are its inhibitors. The products from the hydrolysis of soluble starch with the cold-active enzyme are maltose and other oligosaccharides.     

疏水性聚丙烯酸/聚乙烯醇/葡萄糖淀粉酶复合纳米纤维膜的制备及酶学性质

利用混合静电纺丝将葡萄糖淀粉酶(GA)固定于聚丙烯酸(PAA)/聚乙烯醇(PVA)纳米纤维膜上,并通过鉴定固定化GA的酶学特征检验PAA/PVA可否成为一种优良的酶固定化载体。 对其理化性质和酶学特征进行鉴定,经红外光谱(FT-IR)和扫描电子显微镜(SEM)表征发现,GA可成功包埋于PAA/PVA纳米纤维膜内部;对包裹固定的GA进行酶学性质鉴定,发现固定化GA的最适反应温度为68 ℃,比游离GA提高了9 ℃;固定化GA的适用pH值范围明显变宽;热稳定性和存贮稳定性显著增强且可以重复使用。PAA/PVA纳米纤维膜是一种优良的酶固定化载体,可以通过混合静电纺丝包埋法简便地将蛋白质分子固定于其内部,具有一定的应用前景。     

P(DMAA-co-AM)水凝胶制备及其固定α-淀粉酶研究

采用氧化还原引发体系,水溶液聚合法制备P(DMAA-co-AM)水凝胶,并以其作为载体固定α-淀粉酶。采用单一变量法研究交联剂(N,N’-亚甲基双丙烯酰胺)用量、引发剂(过硫酸铵)用量、单体浓度和单体配比对凝胶性能的影响。以水凝胶的最大平衡溶胀度为指标,得出制备P(DMAA-co-AM)水凝胶的优化条件:交联剂用量为0.3%,引发剂用量为0.6%,单体浓度为20%,N,N′-二甲基丙烯酰胺与丙烯酰胺的摩尔比为2∶1。在优化条件下,采用原位聚合法固定α-淀粉酶,测定不同单体配比的P(DMAA-co-AM)水凝胶固定化α-淀粉酶的活性。     

用高效疏水色谱法对多种脲变α—淀粉酶折叠中间体的研究

用高效疏水色谱法对用脲变性的α－淀粉酶的体外折叠中间体进行了分离，发现脲变α－淀粉酶折叠至少有１９个中间体，而且，这些中间体在色谱流出液中可稳定一周。这一结论已由电泳、离子交换色谱和体积排阻色谱法证实。此外，还用紫外吸收光谱和荧光发射光谱研究了这些折叠中间体与天然α－淀粉酶构象之间的差异。     

大麦庄淀粉酶的杂种优势与相关研究

少淀粉酶活性在被测40个大麦品种间差异较大,高的在1.681mg麦芽塘/0.8mg麦粉,低的在。.6266mg麦芽糖单位左右.F/T的比例在10.46-53劣之间,籽粒中户淀粉酶活性与千粒重无关.具有相同电泳图谱的二棱大麦品种之间杂交,杂种F:和F:籽粒的户淀粉酶水平均超过双亲,F/T的比例都在50 0以上,最高达78,26%,具有明显的杂种优势.7个组合的正反交结果基本一致,从而证实介淀粉酶是由核基因控制的.杂种的麦芽糖化力水平也显示与冬淀粉酶相应的杂种优势.这为选育高搪化力的啤酒大麦品种提供了依据.     

壳聚糖与丙烯腈接枝共聚物的制备及固定化a—淀粉酶研究

主以过硫酸钾／亚硫酸氢钠为引发体系,制备了丙烯腈接枝壳聚糖的共聚物,并以其载体固定化a-淀粉酶,探讨了固定化酶的最佳制备条件和固定化酶的性质,并与游离酶、壳聚糖作为载体的固定化a-淀粉酶进行了比较,结果表明,丙烯腈接枝壳聚糖共聚物是固定化a-淀粉酶的优良载体。