盐酸胍诱导的淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶去折叠过程的研究

分别用内源荧光光谱法、荧光相图法、荧光探针法、荧光猝灭法、蛋白质电泳法以及体积排阻色谱法研究了盐酸胍诱导的淀粉液化芽孢杆菌a-淀粉酶的去折叠过程. 内源荧光光谱和荧光相图结果表明, 当变性液中盐酸胍浓度约为1.0 mol/L时, 芽孢杆菌a-淀粉酶的去折叠过程中出现一个部分折叠中间体, 其去折叠过程符合“三态模型”; 荧光探针结果表明, 在溶液中盐酸胍浓度约为1.0 mol/L时, 中间态芽孢杆菌a-淀粉酶分子中存在着能够与探针分子1-苯胺 基-8-萘磺酸(ANS)结合的稳定的疏水区域; 荧光猝灭研究给出了不同程度变性的淀粉液化芽孢杆菌a-淀粉酶中的Trp的分布情况, 结果表明中间态芽孢杆菌a-淀粉酶分子中能够被碘化钾猝灭的位于分子表面的色氨酸残基数目达到最大的8个; 蛋白电泳和体积排阻色谱结果表明, 在盐酸胍诱导的芽孢杆菌a-淀粉酶分子的整个去折叠过程中, 不会以共价键或非共价键形式形成芽孢杆菌a-淀粉酶分子之间的集聚体或集聚体沉淀. 在此基础上, 对盐酸胍诱导的淀粉液化芽孢杆菌a-淀粉酶的去折叠过程进行了描述.     

枯草杆菌在淀粉液态培养基中生产α-淀粉酶

以枯草杆菌(Bacillus subtilis BF7658)为实验菌株,以淀粉为主要原料,采用液态培养基发酵,生产α-淀粉酶。结果表明:在23℃至44℃内,培养基起始pH值为自然pH值,产酶最佳培养温度为37℃;枯草杆菌在淀粉液态培养基中控制温度为37℃,振荡培养,其产酶最适宜淀粉与水组成比例为:75∶100;在最佳温度37℃下,淀粉∶水为75∶100时,最佳培养时间为36h。     

热加工(贮存)过程对蜂蜜中淀粉酶酶值的影响

蜂蜜是人们经常食用的天然保健食品。蜂蜜的淀粉酶值是表征蜂蜜淀粉酶活性和蜂蜜生物活性的重要标志，也是判断蜂蜜新鲜程度的重要指标。不同国家对蜂蜜的淀粉酶值有不同要求，我国产品标准规定市售蜂蜜的淀粉酶值需保证在8以上。本文选择四种不同蜂蜜，探索了其淀粉酶值随热加工(贮存)温度和时间的变化规律，找出了在保证蜂蜜的淀粉酶值的前提下、各种蜂蜜所能承受的热加工(贮存)温度及时间。     

Purification and Characterization of Cold-active α-Amylase Excreted by A Strain of Marine Cold-adaptive Penicillia

The filamentous fungi from the Huanghai sea sludge were screened according to their ability to produce cold-active α-amylase. The strain with the highest amylase activity was identified as Penicilllum species. The α-amylase purified by ammonium sulphate precipitation and column chromatography on DEAE-sepharose and sephadex G-100 shows a molecular weight of about 55000 and a pl of 4. 38. The enzyme is stable in a pH range of 5.5—8.0 and has a maximum activity at pH 6.0. Compared with the α-amylase from mesophiles and thermophiles, the cold-active enzyme shows a high enzyme activity at lower temperatures and a high sensitivity at temperatures higher than 50℃. The optimal temperature is 40℃ and the activity decreases dramatically at temperatures above 50℃. Ca^2 shows a significant effect on maintaining the structure and the activity of the enzyme. EDTA and Cu^2 are its inhibitors. The products from the hydrolysis of soluble starch with the cold-active enzyme are maltose and other oligosaccharides.     

双水相萃取法从发酵液中分离提取α-淀粉酶和蛋白酶的研究

以ＰＥＧ／硫酸铵双水相体系，经一次萃取从α－淀粉酶发酵液中分离提取α－淀粉酶和蛋白酶。萃取最适宜的条件为１５％ＰＥＧ１０００、２０％（ＮＨ４）２ＳＯ４，ｐＨ＝８，α－淀粉酶收率９０％，分配系数为１９．６；与蛋白酶的分离系数高达１５．１，比活率为原发酵液的１．５倍，蛋白酶在水相中的收率高于６０％。本文对反萃取条件进行了初步研究。与传统的提取法相比，本法可直接处理发酵粗滤液，提高工效，降低能耗和酶活损     

Chemical Modification and Fluorescence Spectrum of Tryptophan Residues in Pullulanase

IntroductionPullulanase(E.C.3.2.1.41)is a debranchingenzyme that can hydrolyze theα-1,6glucosidic bondsin pullulan,amylopectin,andβ-limit dextrin[1].It iswidely applied to starch industry and in the manufactu-ring of malt syrup,high-purity glucose,and f…     

枯草芽孢杆菌86315α—淀粉酶的研究（Ⅰ）：热稳定性研究

研究了温度对枯草芽抱杆菌86315 α-淀粉酶的活性和荧光光谱的影响.发现该酶在50℃以下是稳定的;70℃加热10 min,酶活性全部丧失,荧光光谱发生了较大的变化;在0.02 mol/LCaCl_2和0.02 mol/L NaCI同时存在下,70℃加热10 min,酶活性保持不变,其光谱接近天然态酶的荧光光谱.实验表明,一定比例的CaCl_2和NaCl能够较好地稳定α-淀粉酶的构象,从而大大提高其热稳定性。     

用高效疏水色谱法对多种脲变α—淀粉酶折叠中间体的研究

用高效疏水色谱法对用脲变性的α－淀粉酶的体外折叠中间体进行了分离，发现脲变α－淀粉酶折叠至少有１９个中间体，而且，这些中间体在色谱流出液中可稳定一周。这一结论已由电泳、离子交换色谱和体积排阻色谱法证实。此外，还用紫外吸收光谱和荧光发射光谱研究了这些折叠中间体与天然α－淀粉酶构象之间的差异。     

胍变及脲变α-淀粉酶的研究 Ⅰ.用高效疏水色谱法研究变性机理和复性效率

用疏水性强弱不同的两种色谱柱对７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍及８．０ｍｏｌ／Ｌ脲变性的α－淀粉酶变体和在疏水色谱介质表面上折叠的中间体进行了分离和复性。通过研究和比较发现，两者的变性机理和形成折叠中间体的个数以及复性效率均不相同。在用疏水性较弱的疏水色谱柱对脲变α－淀粉酶的折叠中间体进行分离时，得到了疏水性接近连续的、数目很多的中间体。用疏水性较强的疏水色谱柱对胍变α－淀粉酶进行复性的效果较好。还研究了柱温变化对其折叠、分离效果和复性效率的影响。     

聚苯乙烯阴离子交换树脂固定α—淀粉酶的研究（Ⅱ）

用聚苯乙烯阴离子交换树脂作载体，采用吸附法将ａ一淀粉酶固定化，研究了固定化条件和固定化酶的性能。固定化条件为：酶浓度１０ｍｇ／ｍｌ，固定化ｐＨ６．８，吸附时间１６ｈ，吸附温度６℃。固定化酶的ｐＨ稳定性、热稳定性、贮存稳定性都有一定的提高。最适作用温度及ＰＨ较自由酶为高，Ｋｍ值为自由酶的１．６倍。同时也进行了固定化酶的操作稳定性研究。