具有真细菌基因启动子活性的古生菌DNA片段

以大肠杆菌启动子探测质粒pKK232-8 为载体,用4 组限制性内切酶分别消化古生菌盐生盐杆菌R1(Halobacterium halobium )的染色体DNA,在体外进行重组,转化E.coliDH-5α感受态细胞,得到12 个转化子(T1～T12),其抗性水平分布在10～500 m g/L的区间内. 将这些转化子所含质粒分别命名为pSX1～pSX12,限制性酶切分析表明,这些质粒各插入了一段不同的外源DNA 片段,杂交分析表明,抗性最强的转化子T11 所含质粒pSX11 上插入了一段来源于盐生盐杆菌R1 染色体的DNA 片段. 该DNA 片段在大肠杆菌中具有启动子功能.     

利用烟草高效转化功能基因体系的建立

对农杆菌介导的烟草遗传转化条件进行探索,以20 mg/L的潮霉素作为转化苗的筛选压,稀释至OD600为O.2～O.3的农杆菌对外植体浸染15 min,于添加300 mg/L头孢霉素的生根培养基中诱导生根,可稳定获得较高的阳性转化率.经PCR和PCR-Souttlern检测,阳性转基因植株达84.8%以上.通过本研究建立了一种稳定高效的功能基因烟草遗传转化体系.     

固定化细菌去除苯甲酸类化合物的研究

用富集培养法，从工业废水中分离到能以苯甲酸类化合物为唯一碳源和能源而生长的细菌不动杆菌ＢＪ１和产碱杆菌ＳＢ１。用海藻酸钙共固定化的ＢＪ１和ＳＢ１菌株于３０℃培养７２ｈ以后，模拟工业废水中１ｇ／Ｌ的苯甲酸，邻羟基苯甲酸，间羟基苯甲酸，以羟基苯甲酸，邻苯二甲酸和苯乙酸的去除率分别为８９％，９８％，９７％，１００％，９０％和６１％。     

苏芸金杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensis subsp. galleriae)(H5ab)δ-内毒素基因的克隆和表达

本文通过分子杂交得到阳性克隆FG2,带有8.5kb的Barn HI和Sal I插入片段,经western blot分析表明此重组子表达了130kD和68kD的δ-内毒素蛋白,能与HD-1的δ-内毒素抗血清反应,同时对2—3龄的玉米螟进行了生物活性测定,证明有毒杀活力。本工作首次报道了苏芸金杆菌蜡螟亚种(H5ab)的δ-内毒素基因在大肠杆菌中的克隆和表达,同时为δ-内毒素基因在130Md质粒上的定位提供了直接证据。     

致瘤农杆菌能够转化大麦和小麦

直到现在,单子叶植物特别是禾谷类作物的基因工程还没有合适的载体系统。本文首次报道了致瘤农杆菌T37,A208和B63个菌种能够感染大麦和小麦的部分品种,形成突起和肿瘤。并且发现,酚类化合物乙酰丁香酮对转化有促进作用。另外,在合适的植物组织接种农杆菌也是转化成功的关键。文中讨论了农杆菌的宿主范围以及Ti质粒作为禾谷类作物基因工程载体的可能性。     

芸苔属作物Ri T-DNA转化根对根肿菌(plasmodiophora brassicae)的侵染反应

通过发根农杆菌的转化作用,在甘蓝、油菜和花椰菜幼苗的下胚轴切段上诱发产生了许多Ri T-DNA转化根.用根肿菌休眠孢子悬浮液接种转化根,分别在固体、液体和半固体MS培养基上培养. 在固体培养基上,根肿菌只侵入根毛内,不侵入根皮层组织,因而不表现根肿病的任何症状.在液体培养基内,根肿菌侵入根皮层,导致根皮层组织异常的增生和膨大,直至形成肿根症状.在半固体培养基内,根肿菌侵入根段切口处的细胞内,并很快使切口处膨大起来.     

根瘤农杆菌介导的枸杞转化及转化植物的获得

本文报道一种重要的中药——枸杞(Lycium barbarum L.)的转化、再生系统的建立。以根瘤农杆菌(Agrobaterium tumefaciens)C58cl(pGV3850::neo1103)感染枸杞的幼茎外植体,在含卡那霉素50μg/ml的诱培养基上选择转化的愈伤组织,在含卡那霉素25μg/ml分化培养基上得到再生小芽,再生小芽中有30％外观形态正常。形态正常的小芽转到生根培养基后可长出根从而得到完整的植株。胭脂碱检测。NPT-Ⅱ活性测定及分子杂交的结果均表明,外源基因已导入枸杞并得以表达。在实验过程中还发现:(1) 经过一定预处理后,形成愈伤组织较快的外植体易被转化。(2) 转化后愈伤组织再生正常植株的频率比未转化的愈伤组织高。     

盐生盐杆菌灭活原生质体融合的研究

通过双亲灭活方法将二株具不同遗传学特性的盐生盐杆菌Ｊ７（含质粒，不产紫膜）和Ｒ１（产紫膜，不含质粒）进行原生质体融合试验．结果表明，在以３０％ＰＥＧ６００为助融剂，加２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ条件下，４０℃保温１ｍｉｎ，获得融合率为０．７６×１０－５的融合子．这些融合子具有双亲菌株的某些特征，其中２２％的融合子既含有质粒又产紫膜，这些融合子对于进一步研究质粒与紫膜的关系，以及筛选高产紫膜的优良菌株，均有十分重要的价值．     

嗜碱细菌NTT33碱性β-甘露聚糖酶的纯化与性质研究

报道了嗜碱芽孢杆菌ＮＴＴ３３产生的碱性β－甘露聚糖酶经纯化后，在ＰＡＧＥ电泳上呈现一条蛋白带，分子量为３．８９×１０７，等电点为３．０～４．０，酶反应最适ｐＨ为９．０～１０．０，最适作用温度为８０℃，稳定ｐＨ为６．０～９．０，稳定温度为６０℃以下．金属离子Ｃｕ２＋，Ｂａ２＋，Ｍｇ２＋，Ａｌ３＋，Ｃｏ２＋对该酶有一定的激活作用，而Ａｇ＋，Ｈｇ２＋，Ｍｎ２＋对该酶有明显抑制作用，经薄层层析鉴定，该酶水解槐豆胶后产生葡萄糖、甘露糖以及低聚糖．     

生物模板法合成三元硫化物及其抑菌活性

分别以橡胶乳、大豆粉、三七粉、菠菜提取物、苝醌提取物作为模板剂,采用溶剂热合成法,合成了具有不同形貌的三元硫化物,考察了其对枯草芽孢杆菌的抑菌活性性能,同时通过MTT法对三元硫化物材料进行毒性测试。通过XRD和SEM进行表征。结果表明：具有棒状结构的Bi₂S₃、雪花状的AgBiS₂、以及含有毛刺状小球的Cu₃BiS₃材料具有特殊的抑菌,且对正常细胞的毒性较低甚至没有。