α—葡萄糖基—甜菊糖的酶促合成反应研究（Ⅰ）

研究了葡萄糖基转移酶ＧＴ－１催化甜菊糖转化为α－葡萄糖基－甜菊糖的各种影响因素，实验结果表明，甜菊糖的酶促转达到一定程度后，继续增大酶和淀粉用量及延长反应时间，对转化结果没有太多改善，经过处理后，甜菊糖的口味大为改善。     

壳聚糖固定化血管紧张素转化酶及其性质

以壳聚糖微球为载体, 戊二醛为交联剂固定化血管紧张素转化酶, 研究了酶固定化的最优条件和固定化酶的性质. 结果表明, 在戊二醛质量分数为2.5%、给酶量为8 mg/mL时, 固定化酶的比活性最大, 为0.085 U/g. 固定化酶在40~50 ℃, pH在7~9之间有最大活性, 其米氏常数Km为2.39 mmol/L. 同时, 固定化酶具有良好的稳定性, 可重复利用.     

反相液相色谱-串联质谱法鉴定油菜蜂花粉中的蛋白质及活性肽

基于鸟枪法蛋白质组学分析方法,使用反相液相色谱-串联质谱（RPLC-MS/MS）系统分析油菜蜂花粉蛋白质的胰蛋白酶酶解产物,结合数据库检索,共鉴定到353条肽段。鉴定到的肽段所归属的蛋白质中有239个蛋白质可检索到其分子生物学功能,主要功能为结合活性、酶活性、运输活性、抑制活性等。根据血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽活性与多肽构效之间的关系,从鉴定到的肽段中筛选并适当修饰后得到5条可能具有ACE抑制活性的肽段,化学合成肽段后进行了活性验证。结果表明5条肽段均具有良好的活性,其中肽段AELDIVLALF和LAVNLIPFP表现出较高的ACE抑制活性,半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（10.65±0.50）μmol/L和（23.66±1.08）μmol/L。该方法速度快,成本低,大大缩短了鉴定周期,达到了高通量筛选生物活性肽的目的。     

ACE抑制三肽与ACE相互作用的分子机制

4种食源性三肽IRP(Ile-Arg-Pro),IKP(Ile-Lys-Pro),GRP(Gly-Arg-Pro),IRA(Ile-ArgAla)的ACE抑制活性已得到实验证实,但其与ACE的相互作用模式与分子机制尚不清楚,本研究采用柔性分子对接方法解决这一问题。分子对接结果表明:4种三肽与ACE有相似的作用模式,氢键、亲水、疏水、静电等作用力共同对三肽与ACE的结合存在贡献,但以氢键作用为主;ACE分子中Lys511,His513,Tyr520,Tyr523等氨基酸残基为其与肽结合的重要结合位点;ACE抑制三肽中氮端氨基和碳端羧基对其抑制活性影响显著,其中氮端氨基的作用更为重要。通过以上分子机理研究可为开发强活性ACE抑制肽提供理论指导。     

基于不同建模方法的ACE抑制肽QSAR比较研究

以自组建的血管紧张素转化酶(Angiotensin I-converting enzyme)抑制肽库为研究对象,采用氨基酸描述符SVHEHS(Scores vector of hydrophobic,electronic,hydrogen bonds and steric properties)对各肽样本进行结构表征后,进行自交叉协方差(Auto cross covariances,ACC)处理,并分别利用多元线性回归(Multiple linear regression,MLR)、偏最小二乘(Partial least square regression,PLS)、人工神经网络(Artificial neural networks,ANN)3种建模方法进行ACE抑制肽QSAR建模。结果显示,所得MLR、PLS与ANN模型的相关系数(Correlation coefficient,R2)分别为0.744、0.862、0.958,留一交叉验证相关系数(Leave-one-out cross-validated correlation coefficient,Q2LOO)分别为0.532、0.829、0.948,外部验证复相关系数(External validated correlation coefficient,Q2ext)分别为0.567、0.632、0.634。因此,SVHEHS结合上述3种建模方法均适用于ACE抑制肽的QSAR研究,其中ANN的建模效果最优。     

毛细管胶束电动色谱法测定血管紧张素转化酶的活性

 建立了应用毛细管胶束电动色谱 (MECC)灵敏、快速的测定血管紧张素转化酶 (ACE)活性的方法。通过对电压、上样时间、电极缓冲液体系等影响因素的优化 ,探讨了方法的可行性 ,确立了最佳测定条件 (电压 :8 1kV ;上样时间 :1s;电极缓冲液 :2 0mmol/L硼酸盐缓冲液 (pH 9 0 ,含 5 0mmol/LSDS) ;检测波长 :2 2 8nm)。方法的最低ACE活性检测限为 5pmol/min(以 2倍的信噪比计 )。     

血管紧张素转化酶抑制肽Leu-Lys-Pro(LKP)抑制机理的研究

血管紧张素转化酶(ACE)是一种含锌离子的羧二肽酶,通过肾素-血管紧张素系统和激肽释放酶-激肽系统进行血压调节。食源血管紧张素转化酶抑制肽(ACEIP)可抑制ACE的活性对高血压控制有利。以鲣鱼蛋白分离出的ACE抑制肽Leu-Lys-Pro(LKP)为原料,采用荧光光谱法、紫外-可见光谱法、圆二色谱法、等温滴定量热法(ITC)以及分子对接技术研究了LKP对ACE的抑制机理。荧光光谱结果表明,LKP能够有效猝灭ACE的内源荧光,猝灭机制为静态猝灭,两者结合可形成较稳定的复合物,ACE中色氨酸和酪氨酸残基所处的微环境疏水性减小,导致极性增强。紫外、圆二色谱结果表明,LKP与ACE结合会导致ACE构象发生改变,ACE与LKP结合后二级结构比未结合时松散,为紧密-松散-稍紧密的变化过程。ITC测得LKP与ACE结合的焓变(ΔH)、熵变(ΔS)、化学计量比(n)以及结合常数(K_a)等热力学参数,结果表明两者结合反应是由熵驱动的自发吸热过程,结合力主要为疏水作用,确定LKP与ACE相互作用的结合位点数约为1,且随温度升高而增加。LKP与ACE的结合常数K_a     

基于氨基酸描述符SVHEHS的ACE抑制肽QSAR研究

收集20种天然氨基酸的457种理化性质,按照疏水、电性特征、氢键贡献和立体特征分类后,对它们分别进行主成分分析(Principal component analysis,PCA),得到一个新的氨基酸残基结构描述符SVHEHS.用该描述符分别对血管紧张素转化酶(AngiotensinⅠconverting enzyme,ACE)抑制二肽、三肽、四肽进行序列表征,并用来与生物活性建立偏最小二乘(Partial least square regression,PLS)模型.ACE抑制二肽、三肽、四肽模型的相关系数、交叉验证相关系数、 均方根误差、外部验证相关系数分别为0.607,0.507,0.587,0.783;0.852,0.813,0.232,0.839;1,1,0,0.935.由此说明,采用SVHEHS描述符建立的PLS模型拟合、预测能力均较好,可用于血管紧张素转化酶抑制肽的定量构效关系研究.     

肌骨超声对类风湿关节炎疾病分期的评估价值及血清SOD、PCSK9表达的关联性

本研究探讨肌骨超声对类风湿关节炎疾病分期的评估价值及类风湿关节炎与血清超氧化物歧化酶(SOD)、前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)表达的关系.选取类风湿关节炎患者140例作为观察组,同时选取体检健康者100例作为对照组,检测两组血清SOD、PCSK9的表达水平,给予肌骨超声检查.结果 显示:观察组血清SOD的表达水...     

溶剂诱导相变萃取-分光光度法测定血管紧张素转化酶活性

在传统体外测定血管紧张素转化酶(ACE)活性方法的基础上, 以猪肺ACE粗提物为酶源, 采用溶剂诱导相变萃取法(SIPSE)萃取酶反应产物马尿酸(HA), 用分光光度法快速定量测定HA以评估ACE活性或样品对ACE的抑制活性. 以卡托普利为模型验证了此方法, 并分别测定了中药复方天麻钩藤饮及其含有的11味中药对ACE的抑制活性. 结果表明, 猪肺ACE粗提物即可满足ACE抑制活性测定的需要; 与传统液液萃取法相比, SIPSE对HA具有更高的选择性及萃取能力, 萃取率为(97.47±0.55)%(n=3); 通过计算校正, 溶剂诱导相变萃取-分光光度法能简便、 快速且准确地测定成分复杂体系的ACE抑制活性.