定量蛋白质组学质谱采集技术进展

质谱是定量蛋白组学的主要工具。近年来随着定量蛋白质组学研究的深入,传统质谱定量技术面临着复杂基质干扰、分析通量限制等诸多问题。而最近一系列质谱新技术的发展,包括同步母离子选择( SPS)、质量亏损标记、平行反应监测(PRM)、多重累积(MSX)和多种全新数据非依赖性采集(DIA)等,为解决目前蛋白质组学在相对定量和绝对定量分析方面的局限提供了有效途径。本文对定量蛋白质组学目前遇到的瓶颈问题进行了分析,总结了质谱定量采集技术的最新进展,并评述了这些新技术的特点以及在定量蛋白质组学应用中的优势。     

企业消息

赛默飞世尔科技推出革新性的三重四极杆LC-MS,灵敏度、稳健性、适用性更上台阶全新Thermo Scientific TSQ Quantiva LC-MS打破阿克级灵敏度壁垒;全新TSQ Endura LC-MS具有高灵敏度,提供最大化正常运行时间Minneapolis-2013 ASMS-(2013年6月10日)—全球科学服务领域的领导者,赛默飞世尔科技又推介新一代三重四极杆液相色谱质谱(LC-MS)平台,该平台专为定量实验而设计,具有极佳灵敏度、运行通量、精度和易用性。     

基于质谱的蛋白质组学技术在神经退行性疾病生物标志物研究中的应用

蛋白质组学是在整体水平上研究细胞、组织或生物体蛋白质组成及变化规律的科学.与传统的生物学研究相比,蛋白质组学具有快速、灵敏、高通量的优点.神经退行性疾病是一类由神经系统内特定神经细胞的进程性病变或丢失而导致神经功能障碍的疾病,严重危害人类健康.近年来,基于质谱的蛋白质组学技术在神经退行性疾病的研究中得到了广泛应用.本文简要介绍了蛋白质组学在样品分离、多肽定量、质谱检测及生物标志物临床验证等方面的技术发展,并结合实例综述了基于质谱的蛋白质组学在神经退行性疾病生物标志物发现与验证中的研究进展.     

电感耦合等离子体质谱分析

简要综述了我国学者近10年来在电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析领域的研究工作.在ICP-MS新进样技术和ICP-MS生物分析方法学研究方面,我国科研人员开展了开拓性的研究工作,在元素形态分析和金属组学研究方面富有特色.ICP-MS仪器/部件的设计研制尚待加强;ICP-MS成像研究和在实际生命体系的应用有待进一步强化.     

定量蛋白质组学技术在阿尔茨海默症临床标志物遴选中的研究进展

阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)是一种以行为功能紊乱、神经元逐渐丢失为主要特征的退行性疾病,它对人类的生活质量和生命造成了极大威胁.随着临床标志物(clinical biomarker)概念的提出和定量蛋白质组学的研究进展,对于促进AD病诊断、监测疾病进程以及评估现有治疗手段等方面提出了新的思路,但临床标志物的遴选存在许多技术难点.定量蛋白质组学利用其能够快速分析和准确鉴定疾病中功能蛋白的特点,大大提高了遴选临床标志物的效率.本文综述了定量蛋白质组学技术在遴选AD中临床标志物的应用进展.     

新型亲和去垢小柱净化-液相色谱-串联质谱法分析水稻叶片蛋白质组

采用亲和去垢小柱净化,建立了水稻叶片蛋白质组的纳升液相色谱-串联质谱分析方法。水稻叶片蛋白质分别采用酚提取法结合十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)裂解,裂解液经亲和去垢小柱净化,酶解肽段用纳升液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱(nanoLC-LTQ/Orbitrap MS)分析,相关数据库检索鉴定。比较了超滤辅助样品制备法(FASP法)、亲和去垢小柱法和丙酮沉淀法对SDS去除效率及对蛋白质鉴定结果的影响。结果表明:3种方法均有较好的SDS去除效果(去除效率均大于95%);尽管3种方法鉴定的蛋白质种类具有一定的互补性,但以亲和去垢小柱法鉴定的蛋白质数目最多,为563种,远多于FASP法和丙酮沉淀法的196和306种;此外,亲和去垢小柱法适合于各种相对分子质量和不同pI值蛋白质的净化,而FASP法和丙酮沉淀法中不同相对分子质量和pI值蛋白质均有类似程度的损失。采用本文建立的方法,一次进样分析可鉴定出水稻叶片蛋白质多达588种;肽段匹配数≥2的296个蛋白质的生物学功能主要分为结合活性、酶活性、转移运输活性和结构组成等。该蛋白质分析方法可为开展水稻蛋白质组学研究提供技术参考。     

2012慕尼黑上海分析生化展圆满落幕用户云集,盛况空前

第六届慕尼黑上海分析生化展(analytica China)于2012年10月18日在上海新国际博览中心圆满落幕。本届展会云集了来自22个国际和地区的580家知名企业,较上届展会增加20%,再创历史新高。为期三天的展会共接待了来自66个国家和地区的16,940名专业观众前来参观及采购。同时,展会同期成功举办了14场高质量的学术研讨会,150余位国内外知名的专家、学者及2,509名参会者分别对分析化     

贺福初小组发现干扰抑癌基因的新型蛋白质

由军事医学科学院副院长、中国科学院院士贺福初领导的军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室,在肿瘤研究领域又有重要发现。他们发现了一种重要的新型蛋白质,可以选择性地干扰抑癌基因,可能成为肿瘤防治的新型靶向分子,     

Selective separation and enrichment of proteins in aqueous two-phase extraction system

A simple aqueous two-phase extraction system(ATPS) of PEG/phosphate was proposed for selective separation and enrichment of proteins.The combination of ATPE with HPLC was applied to identify the partition of proteins in two phases.Five proteins (bovine serum albumin,Cytochrome C,lysozyme,myoglobin,and trypsin) were used as model proteins to study the effect of phosphate concentration and pH on proteins partition.The PEG/phosphate system was firstly applied to real human saliva and plasma samples,some pro...     

差速离心结合蛋白质组学技术研究受镉盐胁迫后的牙鲆肝差异蛋白质

人工构建镉盐污染源,选用差速离心结合双向凝胶电泳(2D-PAGE)法,高效提取、分离和筛选牙鲆(Paralichthys olivaceus, PO)受镉盐胁迫后的肝脏全蛋白和差异蛋白质.实验结果表明: 选用直接裂解法提取牙鲆肝(PO liver POL)全蛋白质且用2D-PAGE分离,可获得约800个蛋白斑点,其中镉盐诱导了11个差异蛋白斑点.以相对离心力为1000×g、12000×g和100000 ×g 的差速离心法,分别制备了3种沉淀蛋白和1种胞浆蛋白,称为POL组分Ⅰ、POL组分Ⅱ、POL组分Ⅲ和POL组分Ⅳ(胞浆蛋白),蛋白斑点数目分别为380、550、500和850个,总计2280个,明显高于直接裂解法.比较分析法发现,差速离心结合2D-PAGE分离技术可获得牙鲆肝脏受镉盐胁迫后表达的54个差异蛋白质,并适合于用肽质量指纹(peptide mass fingerprint,PMF)图谱技术鉴定.本实验所建立的差速离心结合蛋白质组学技术可高效提取、分离和鉴定组织全蛋白或差异蛋白,并能有效地筛选出蛋白指示物.