一株α－乙酰乳酸脱羧酶产生菌株的筛选及初步鉴定

α－乙酰乳脱酸羧酶在促进啤酒的风味成熟方面有广阔的应用前景．本文介绍一株纯培养的α－乙酸乳酸脱羧酶产生菌ＡＤ６的分离及筛选过程；并对该菌的特征及部分生理生化指标作了初步描述．     

人类2-氨基3-羧基粘康酸6-半醛脱羧酶(ACMSD)与底物及抑制剂作用模型的理论研究

利用同源模建和分子动力学模拟方法构建了人类2-氨基3-羧基粘康酸6-半醛脱羧酶(hACMSD)的三维结构, 并利用Profile-3D和Procheck等方法评估了模型的可靠性. 在此基础上, 用分子对接程序(Affinity), 将其底物2-氨基3-羧基粘康酸6-半醛(ACMS)和抑制剂喹啉酸(QA)分别与hACMSD进行对接, 获得了复合物结构的理论模型. 通过配体与受体之间相互作用能和结构分析给出了底物和抑制剂的具体结合方式, 明确了hACMSD与底物和抑制剂结合时起重要作用的氨基酸残基.     

离子色谱法测定硫酸胍丁胺含量

胍丁胺是精氨酸经细胞线粒体膜上的精氨酸脱羧酶作用转化而来的。文献[1]报道从牛脑中分离到一个具有可乐定替代物质(CDS)特性的分子并用质谱法确定是胍丁胺,以后证实胍丁胺几乎分布于大鼠体内所有组织。胍丁胺是一种多胺,但相较于其他多胺,其生物学功能要复杂得多。胍丁胺的测定方法有高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)[1]和高效液相色谱法(HPLC)[2]等,但     

固定化谷氨酸脱羧酶性能的研究

本文首镒用羧甲基化的以Ｎ,Ｎ’－甲叉双丙烯酰胺交联的烯丙基葡聚糖凝胶生化树脂为新型载体,将谷氨酸脱羧酶固定在ＣＭ－ＣＡＤＢ树脂上。研究了固定化ＧＤＣ的活性与低物浓度,ｐＨ,温度的依存性;动态响应特性;热稳定性和寿命;求算了米氏常数和反应活化能;将固定化ＧＤＣ酶柱与进样系统－离子活度分析器－计算机数据采集系统匹配,构成酶传感器谷氨酸检测装置,测定了固定化ＧＤＣ酶柱的能斯特线性响应曲线,线性方程为ｙ／     

He-Ne激光对产ALDC地衣芽孢杆菌的诱变效应

采用He-Ne激光(波长632.8mm,功率9mW)对一株产α-乙酰乳酸脱羧酶为1.22IU/mL的地衣芽孢杆菌H-5,分别以10min、20min、30min、40min进行照射处理,结果表明,10min照射对H-5菌的芽孢萌发有激活作用,促进其生长速度;20min和30min照射对H-5菌株的产酶力有明显的影响,筛选出三株比出发菌株产酶力提高2倍以上,且对啤酒发酵中双乙酰降解作用明显的变异菌株,其中L-20’₆菌株经传代培养及酯酶同工酶分析,证明发生了稳定的遗传变异.40min照射对H-5的生长和产酶力有限制作用.     

D-谷氨酰胺的制备

报道了以化学合成和生物转化的方法制备光学纯D-谷氨酰胺. 首先在中试规模上用化学方法合成DL-谷氨酰胺. 即以廉价的DL-谷氨酸为原料, 采用邻苯二甲酰基作为保护基保护L-谷氨酸的α-氨基, 醋酐回流15 min, 使其分子内脱水生成N-邻苯二甲酰-DL-谷氨酸酐, 在常温、常压条件下, 分别与2 mol/L氨水反应生成中间产物N-邻苯二甲酰-DL-谷氨酰胺, 中间产物在室温条件下与0.5 mol/L水合肼反应48 h脱除保护基, 以57%总收率得到DL-谷氨酰胺. 在37 ℃, pH 4.8的条件下, 利用大肠杆菌(E. coli. AS 1.505)脱羧酶将底物浓度30 g/L的DL-谷氨酰胺中L型对映体在8 h内完全转化为4-氨基丁酰胺, 分离得到D-谷氨酰胺.     

高效液相色谱法测定鼠脑谷氨酸脱羧酶活性

应用高效液相色谱-电化学检测技术建立了鼠脑谷氨酸脱羧酶(GAD)活性的测定方法.方法快速,灵敏.总分析时间为9min.γ-氨基丁酸的最低柱上检测限为50fmol.天内及天间相对标准差分别小于4.3%和9.8%.测得CAD最大催化速率为0.723nmol/min/mg蛋白.讨论了最佳衍生化pH及色谱条件.     

固定化谷氨酸脱羧酶柱式反应器测定L-谷氨酸

用羧甲基化的N,N’-甲叉双丙烯酰胺交联的烯丙基葡聚糖(简称CM-CADB)凝胶树脂为新型载体,研究了谷氨酸脱羧酶(GDC)在CM-CADB上的固定化与环境的依赖关系.确定了酶固定化最佳条件,研究了固定化GDC的活性与底物浓度、pH、温度的依存性,动态响应特性,热稳定性和寿命,求算了米氏常数.将固定化GDC酶柱与进样系统具CO_2气敏电极的离子活度分析器-计算机数据采集系统匹配,构成酶反应谷氨酸检测装置,测定了固定化GDC酶柱的能斯特线性响应曲线,线性回归方程为y=43.3x+181.6,r为0.9936.     

稻米胚芽谷氨酸脱羧酶的光谱分析

从稻米胚芽中分离纯化得到谷氨酸脱羧酶(GAD),经十二烷基磺酸钠-聚丙烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、体积排阻高效液相色谱测得米胚GAD为双亚基组成,其相对分子质量为78000,亚基分子质量为40000;紫外-可见光谱特征为420nm处的弱吸收峰,这是辅基PLP与米胚GAD主链结合后产生的;荧光光谱主要表现为Tyr残基的荧光特征,脱辅基前后的荧光光谱完全相似;圆二色谱分析表明,在二级结构中,α-螺旋占13.2%,β-折叠占38.3%,是一种高β-折叠蛋白,脱辅基后蛋白质的二级结构的变化不大。