大鼠脑组织中轻稀土元素含量相关性研究

研究了轻稀土元素La、Ce、Pr、Nd、Sm、Eu、Gd在大鼠脑组织中的吸收规律和蓄积特点.将雄性SD大鼠随机分为空白、对照、低、中、高及排毒组,每组10只,4周后处死,取脑组织.排毒组停止灌胃后继续饲养4周后处死取脑组织.用ICP-MS测定脑组织中上述稀土元素含量并做统计学分析.结果表明低、中、高剂量组大鼠脑组织中轻稀土元素含量逐渐增高,排毒组介于中、高剂量组之间;脑组织中轻稀土元素的含量远低于其他脏器;La、Ce、Pr在脑中分布符合奥多-哈尔金斯规则,Nd元素呈负偏离;多数轻稀土元素在脑和毛发中含量相关系数较高.稀土元素在脑组织中蓄积有量效关系,且蓄积具有可逆性;血-脑屏障对稀土元素的通透有一定阻碍作用;稀土元素在脑组织中的蓄积率不受摄入量的影响;毛发比全血更适合作为脑组织轻稀土元素含量的生物标志物.     

基于激光剥蚀-电感耦合等离子体质谱技术的生物元素成像分析

生物体内的微量元素具有十分重要的生物功能,也与许多疾病密切相关。现代生物医学的研究亟需能在组织、细胞等不同水平上原位分析生物样品中微量元素的分析方法。本研究建立了激光剥蚀-电感耦合等离子体质谱( LA-ICP-MS)原位分析生物样品的方法。采用线扫描模式和较小的激光输出能量(﹤1 J/cm2),得到了鼠脑切片和金纳米颗粒暴露后单细胞的金属元素成像图。 LA-ICP-MS具有空间分辨率高、检出限好、运行成本较低等优势,有望在生物医学研究中得到更广泛的应用,发挥更重要的作用。     

高效液相色谱-质谱联用法同时测定脑心清原料药浸膏及其片剂中的8种有效成分

建立了高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS/MS）同时测定脑心清原料药及其片剂中原儿茶酸、金丝桃苷、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山柰酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷、杨梅素、槲皮素、柚皮素和山柰酚8种有效成分的分析方法。以乙腈和0.1%（v/v）甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,经Dikma Diamonsil C₁₈柱分离,采用电喷雾离子源以负离子多反应监测模式进行质谱检测。结果表明,8种有效成分在线性范围内线性关系良好（r > 0.99）,回收率为99.0%~102.1%,相对标准偏差为0.9%~3.3%（n=6）。该方法高效、快速、准确,为脑心清原料药浸膏及其片剂的质量标准研究提供了一定的参考。     

维脑路通的伏安行为及其二阶导数卷积伏安法测定

以多种电化学手段研究了维脑路通的伏安行为。在磷酸盐缓冲溶液中( p H 4) ,维脑路通产生一个不可逆吸附还原波 ,峰电位 - 1 .55V ( vs.SCE)。建立了二阶导数卷积伏安法测定的新方法 ,并将此法应用于维脑路通注射液及模拟尿样中维脑路通的测定。     

新的99mTc标记N2S+X型脑灌注显像剂的筛选

基于^99mTcO-MPBDA-Cl的优良实验结果, 合成了两种新的配体MPTDA和MPDAA, 并加入不同的卤离子形成一系列^99mTcO³⁺配合物, 进行了理化性质的测试和动物实验, 结果表明MPTDA和MPDAA形成的配合物脂溶性比MPBDA形成的配合物有所提高, 依然保持该类化合物良好的脑滞留性能；但血液中放射性摄取偏高, 导致脑血比值偏低. 氟、溴、碘阴离子的引入对于脑摄取和脑滞留有较大影响. 结合理论计算对实验结果进行了合理解释, 对N₂S+X型的脑灌注显像剂进行了筛选. 综合脑摄取、脑滞留和毒性等各种因素, 确认^99mTcO-MPBDA-Cl具有成为新型脑灌注显像剂的潜力.     

脑源性神经营养因子保护GdCl_3对神经元与星形胶质细胞共培养体系中的毒性作用

星形胶质细胞和神经元之间的相互作用对于神经元的生长及调节过程十分重要.脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)是脑内广泛分布的一类神经营养因子,除神经元分泌外,星形胶质细胞分泌BDNF功能在神经细胞损伤和神经退行性病变过程起重要作用.本实验之前的研究表明,Gd引起的神经元死亡伴随线粒体功能的损伤,如线粒体呼吸链功能障碍,ATP的合成量的减少和线粒体膜电位的降低.同时细胞内ROS水平的升高.抑制细胞氧化应激水平能够降低Gd暴露后神经元的死亡.神经元产生BDNF功能的影响可能和ROS介导的细胞毒性有密切的关系.因此,Gd对神经元分泌BDNF功能的影响可能是其导致神经毒性的又一因素,本实验研究了Gd对单独培养的神经元以及神经元与星形胶质细胞共培养体系的作用.通过测定细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)的活性和观察PI阳性染色的细胞数目来分析细胞死亡率.结果表明,单独培养的神经元暴露GdCl3 12h后,细胞上清LDH的活力显著增加(约40%).但是,与星形胶质细胞共培养或者单独培养的星形胶质细胞暴露于GdCl3后并没有LDH的显著增加.BDNF能够降低Gd导致的细胞上清LDH的升高.同时,单独培养的神经元暴露于GdCl3后,PI阳性染色的细胞数目明显增多.与星形胶质细胞共培养或者BDNF的干预均能够降低Gd导致的PI阳性染色数目的增加.因此,Gd引起的神经元死亡和其对细胞产生BDNF功能的影响有关系,星形胶质细胞能够够减轻Gd对神经元的毒性作用.用DCFH-DA标记细胞内ROS,用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察不同细胞用GdCl3孵育后细胞内ROS荧光强度.结果提示,用20μM的GdCl3孵育不同细胞12h后,单独培养的神经元细胞内ROS水平显著升高.但是与星形胶质细胞共培养或者BDNF处理的神经元,ROS水平并没有明显的升高.因此,与星形胶质细胞共培养或者BDNF的干预能够降低Gd引起的神经元的死亡.BDNF能够降低Gd诱导的神经元ROS水平的升高以及细胞的死亡.因此,对细胞产生BDNF功能的影响可能是Gd导致神经元细胞毒性的主要因素之一.实验结果显示,GdCl3孵育单独培养的神经元不同时间后,BDNF mRNA和蛋白表达随着GdCl3孵育时间的延长而降低.当GdCl3孵育时间达到12h时,表达量降低了约25%.当GdCl3孵育时间达到24h时,对BDNF表达的影响进一步加强.但与单独培养的神经元相比,当神经元与星形胶质共培养时,20μM的GdCl3孵育细胞并没有引起BDNF表达的明显降低.因此,星形胶质细胞能够通过调节BDNF的表达对神经元的损伤起到保护作用,神经元中BDNF水平的维持可能来源于直接星形胶质细胞分泌的BDNF,或者由外源性BDNF诱导了神经元中BDNF的表达.我们提出了一种可能的分子机制,将有助于理解钆化合物对神经细胞的毒理作用.     

高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学检测法分析大鼠脑微透析液中的乙酰胆碱和胆碱

 建立了用高效液相色谱分离－柱后固定化酶反应器酶解－电化学检测器检测酶解最终产物Ｈ２Ｏ２的方法，分析了麻醉和自由活动大鼠脑微透析液中乙酰胆碱（ＡＣｈ）和胆碱（Ｃｈ）的含量。至少在０．２～１００μｍｏｌ／Ｌ范围内ＡＣｈ和Ｃｈ的浓度与其响应的线性关系良好，它们的检测极限都可达５０ｆｍｏｌ。对高效液相色谱结合固定化酶反应器的分析方法作了简要的讨论。     

微渗析活体取样-NiHCF修饰电极色谱电化学检测的研究

研究了六氰合亚铁酸镍修饰电极对单胺类递质及其代谢产物的催化机理，首次以该 电极为色谱电化学检测器，对８种物质进行了分离测定。同时，将微渗析活体取样技术与高 效液相色谱一电化学检测联用测定了ＳＤ大鼠脑尾核处的单胺类递质及其代谢产物，并研究了 Ｃａ２＋浓度对脑中递质的影响，拓展了电分析化学在生物活体分析中的应用范围。     

脑显像剂~（99m）Tc－ECD的制备研究

~（９９ｍ）Ｔｃ－ＥＣＤ是目前脑显像剂中一种较为理想的放射性诊断药物。本文介绍了从基本原料（Ｌ）半胱氨酸开始合成配体ＥＣＤ（Ｎ，Ｎ＇－乙撑－双－Ｌ半胱氨酸乙酯），采用锡作还原剂实现了一步法~（９９ｍ）Ｔｃ标记ＥＣＤ，并对制备的~（９９ｍ）Ｔｃ－ＥＣＤ进行了初步动物实验以评价其生物学性能。     

反相离子对高效液相色谱法检测兔脑中的磷酸腺苷

采用反相离子对高效液相色谱法测定兔脑提取液中的磷酸腺苷。分别考察了流动相中ＴＢＡＨ，磷酸盐和甲醇的浓度对磷酸腺苷保留行为的影响。确认最佳色谱条件为甲醇２０％，２０ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４－２ｍｍｏｌ／ＬＴＢＡＨ８０％，等度洗脱。保留时间和峰高的相对标准偏差分别为０．２９９％－０．４４３％和０．１８０％－０。．８９％；样品标准加入回收率为１０１．７２％－８６．３６％．最低检测限为ＡＭＰ０．２１，ｇ