“发夹”结构DNA用于生物分析传感器研究进展

由于链内碱基互补配对作用形成的"发夹"结构DNA分子被广泛用于生物分子传感分析。双链或多链"发夹"结构DNA分子参与的杂交链式反应信号记录方式多样,主要有荧光法、比色法、电化学方法等。基于杂交链式反应的检测方法具有快速、方便、成本低、准确度高、灵敏度高、特异性强的优点,在分析传感研究中的应用尤其受到人们的关注,近些年发展迅速。本文综述了"发夹"结构DNA与杂交链式反应应用于生物传感分析的原理、信号记录方式及其在蛋白质、重金属离子、小分子、疾病标志物、DNA等检测中的研究进展。     

单链抗体PS-9的基因克隆、表达和免疫特性鉴定

成功地构建了鼠抗人胰腺癌单克隆抗体PS-9的单链抗体可变区基因(V_H-linker-V_L),并将该基因克隆到噬菌体表达载体pCANTAB5的外壳蛋白g3p基因中,使单链抗体以融合蛋白的形式表达在噬菌体的表面。免疫学鉴定结果表明,这种噬菌体抗体仍保留着亲代抗体的免疫特性,能与人粘液细胞癌LS-174-T细胞表面抗原特异结合。这项研究结果有助于鼠源性单克隆抗体的临床应用以及肿瘤导向诊断和治疗。     

Hobson文科物理教材选载⑥——核武器

译者说明:这次选登的是原书讨论核武器的几节,摘自原书的第16章.这一章介绍核能和释放核能的两种方法:聚变和裂变.它从聚变开始,第16.1节介绍氢的聚变,它是太阳辐射能的来源.第16.2节介绍核能曲线,在这条曲线上,核子的平均核能两头高,中间(在铁附近)低,这使核能在原则上能够通过裂变和聚变两种方法释放.     

基于Fe^(2+)-Ce^(4+)体系的库仑滴定法测定药用油脂的过氧化值北大核心CSCD

药用油脂作为脂溶性药物的溶媒辅料,常用于维生素E滴丸、脂肪乳注射液等药品的生产,然而受氧气、光照及微生物等影响,油脂中不饱和脂肪酸易氧化生成过氧化自由基,通过链式反应直至油脂彻底酸败[1-2].若人体食用过量的过氧化脂质,可破坏细胞正常结构与生理功能,因此国家标准GB 2716-2018《食品安全国家标准植物油》利用过氧化值(过氧化物相当于碘的质量分数)表示油脂中过氧化物含量,以评价其氧化酸败的程度,同时《中华人民共和国药典》(2020年版)也规定了药用油脂中过氧化值的限度(不超过0.13 g/100 g).     

基于纳米生物条形码和杂交链式反应构建电化学生物传感器用于蛋白激酶活性分析

该文结合纳米生物条形码和杂交链式反应(HCR)双重信号放大策略构建了一种电化学生物传感器用于蛋白激酶A(PKA)的活性分析。以MoS₂/AuNPs纳米复合材料作为玻碳电极修饰材料,半胱氨酸修饰的底物肽链通过Au-S键自组装到修饰电极表面。当存在目标物PKA时,底物肽链被磷酸化,可与纳米生物条形码(S1-AuNPs-Ab)特异性结合,以S1-AuNPs-Ab探针中S1链作为引发链,可诱导发夹DNA(H1和H2)发生杂交链式反应。HCR产物吸附亚甲基蓝(MB)电活性分子,产生放大的电化学响应信号,实现对PKA活性的定量分析。该电化学传感器检测PKA的线性范围为10^-3～20 U/mL,检出限(S/N=3)为3×10^-4 U/mL。构建的电化学传感器具有良好的选择性、重现性和稳定性,可用于实际样品细胞裂解液中PKA的活性测定和蛋白激酶抑制剂的筛选及激酶相关药物的发现。     

嗜热菌是怎样炼成的

在遥远的细菌古国,突然降临的高温无情地夺走了细菌们的生命。危难当前,细菌国王修炼起“嗜热神功”来提高细胞膜和蛋白质的耐高温性,并率领族人登上“诺亚方舟”以实现繁衍生息。细菌们在适应高温的同时也爱上了高温,成为了“嗜热菌”。通过与人类科学家的合作,嗜热菌们在工业生产等领域发挥了巨大作用,发现了实现自我价值的“新大陆”。     

5-氮胞苷(5-aza-CR)及其类似物对HL-60细胞分化及DNA甲基化的影响

本文报道了5-aza-CR和5-aza-CdR对HL-60细胞分化及DNA甲基化作用的影响。用NBT染色法测定了加药处理前后HL-60细胞分化程度的变化;用[~3H-SAM]为甲基供体,以同位素参入法测定了加药前后HL-60细胞中甲基化酶活力的变化;并用HPLC法测定了加药前后HL-60细胞DNA的甲基化水平。结果表明:在5-aza-CR或5-aza-CdR的使用浓度下处理HL-60细胞沿粒细胞系分化程度增加,DNA甲基化酶活力下降,DNA甲基化水平也下降。并且这些变化均与5-aza-CR的浓度相关;5-aza-CR的影响较5-aza-CdR小,因此后者是更为有效的诱导物。本项研究中还以不同甲基化水平的HL-60细胞DNA为模板,在体外测定了E.Coli RNA聚合酶的活力。发现:随着HL-60细胞DNA甲基化水平的降低,RNA聚合酶的体外转录活力升高。     

全血改进线性指数聚合酶链式反应用于焦磷酸测序检测基因多态性

焦磷酸测序是目前基因多态性检测的主要方法之一,但是其前期的样本制备工作较为繁琐,限制了其在临床检测中的应用。为了简化焦磷酸测序的流程,本研究根据不对称PCR原理,改进了线性指数聚合酶链式反应(LATE-PCR)的引物设计方法,增加过量引物的长度和浓度,并结合全血直接扩增技术,建立了基于普通r Taq聚合酶和高p H缓冲液(Hp H Buffer)的全血改进LATE-PCR(Improved LATE-PCR,im LATE-PCR)方法。考察了方法的最优扩增体系、血液抗凝剂对其影响以及全血模板量。采用单管、一步法直接扩增出单链测序模板,成功地对24例临床血样的乙醇脱氢酶基因多态性进行了检测,检测结果可用于指导临床个体化用药。24例样本的基因型分别为ADH1B位点AA纯合6例、AG杂合14例、GG纯合4例;ADH1C位点GG纯合20例、AG杂合4例、AA纯合0例。     

基于双分子信标对猪圆环病毒Ⅱ型的简单快速检测

根据猪圆环病毒(PCV2)基因组为单链DNA的特点,设计了两条可与PCV2基因组序列特异性杂交的分子信标,建立了基于双分子信标法检测PCV2的方法。实验结果表明,双分子信标法比单分子信标法的灵敏度更高。在10 mmol/L MgCl2、20 mmol/L Tris-HCl(pH=8.0)的杂交缓冲溶液,40℃孵育30 min的优化检测体系下,此方法可实现对检测样本在2~200 nmol/L线性范围内的检测,检出限可达1 nmol/L。将双分子信标检测体系用于18例可疑猪瘟样品病毒检测,其中8例呈PCV2阳性,检测结果与PCR法一致,证明此双分子信标法可用于实际猪感染PCV2的诊断。