以寡聚组氨酸为配基的高效亲和色谱研究

亲和色谱在所有色谱分离中选择性最高.以组氨酸为配基的亲和介质(Affinitymedia)对免疫球蛋白IgG具有亲和力,显示了良好的分离效果[1];以组氨酸为配基的亲和色谱分离纯化IgG的机理[2]以及组氨酸亲和色谱分离IgG亚基也已有报道[3].组氨酸配基亲和色谱法具有简单、有效和价廉等特点,在免疫化学、临床分析及血液制品的生产等方面均有良好的应用前景.本文分别以含1,3,5个组氨酸残基的小肽为配基,合成了系列亲和介质,并对其亲和色谱行为进行了评价,研究了不同链长的寡聚组氨酸与IgG的亲和相互作用.1　实验部分1.1　固相肽合成　采用Fmoc肽合…     

原子吸收光谱法间接研究组氨酸锌的配合反应

编程计算了不同pH条件下的组氨酸和锌离子的各种存在形式并分析了拟合分布图,研究了在硫化锌法原子吸收间接测定组氨酸时的pH值对原子吸收响应的影响及络合反应的机理。指出在pH 9.5左右最佳测定条件下,所形成的可溶性组氨酸锌配合物是由电中性的组氨酸基His+- 和带负一价电荷形态的组氨酸基His-与Zn(OH)₂共同形成的Zn(OH)₂·(C₆N₃O₂H₉)₂,Zn(OH)₂·[(C₆N₃O₂H₈)-]₂,Zn(OH)2·(C₆N₃O₂H₉)·[(C₆N₃O₂H₈)-]。结果表明,理论计算分析的结果与实验数据基本吻合,确定了硫化锌法原子吸收间接测定组氨酸时的配合物反应机理及配合物的组成结构。     

巯基功能化磁性微球的构建及其对蛋白质的亲和分离

通过水热法一步合成了纳米Fe3O4微球,并在甲苯中用巯基丙基三甲氧基硅烷(MPS)对其进行表面修饰得到了Fe3O4-SH微球,通过DTNB法测得微球表面巯基含量为333.54μg/mg.该纳米微球可以吸附溶液中的Ni2+,从而形成Fe3O4-SH-Ni2+复合材料.以此复合材料为载体,可以将以组氨酸为标签的(His-tagged)融合蛋白直接从细胞裂解液中进行提纯,并在外加磁场的作用下实现对目标蛋白的快速分离,其对His-tagged TRX蛋白的分离能力为20.6μg/mg,特别适合于对以组氨酸为标签蛋白的分离纯化.     

金属酶中双氧活化的模型研究及应用

金属酶活化双氧的过程对生物体内新陈代谢、信号转导等一系列功能至关重要。生物体内实现双氧活化功能的金属酶主要有血红素酶和非血红素酶两类。对模型化合物催化双氧活化过程中间体的表征及催化反应产物的分析可以揭示金属酶的双氧活化机理;对模型化合物的反应活性与配体电子效应的研究将为配合物催化剂的配体设计提供指导。特别是血红素酶和非血红素酶可以实现对C—H键的选择性活化,这是化学反应的难题之一。因此这些模型化合物可以被用做催化剂来解决药物发现、工业生产以及能源转化中的难题。本文介绍了血红素酶和单核非血红素酶模型化合物在机理研究上的近期进展,分析了卟啉类似物、二组氨酸一羧酸面式结构酶模型化合物等模型的设计思想和高价金属氧合中间体的电子结构,总结了配体电子效应和模型化合物催化活性之间的关系。最后,提出了目前模型化合物在双氧活化研究中存在的一些不足,并对其在基础研究及应用方面的发展进行了展望。     

磷酰化组氨酸特异性抗体的制备与应用

以4-碘吡唑和亚磷酸二乙酯为初始原料, 经3步反应合成了新型的磷酰化组氨酸结构类似物, 并以其为半抗原制备了磷酰化组氨酸特异性抗体(Anti-pHis). 采用酶联免疫吸附(ELISA)、 斑点印迹(Dot blot)和免疫印迹(Western blot)实验等方法对Anti-pHis的特异性进行了检测. 结果表明, Anti-pHis对组氨酸磷酰化蛋白表现出优异的亲和力和选择性识别能力, 并可应用于微生物细胞裂解液中组氨酸磷酰化蛋白的检测.     

Metalloporphyrin receptors for histidine-containing peptides

Two new ditopic metalloporphyrin receptors constructed by combining metalloporphyrin with crown ethers have been prepared and characterized.1H NMR and MS spectra confirmed the complexation of receptor with peptide driven by coordination interaction and hydrogen bonding.UV/vis experiments revealed that the receptors exhibited high binding affinity to histidine-containing peptides.These receptors could differentiate short peptides of C-terminal histidine and N-terminal histidine and formed the most stable complexes with tripeptide.     

铜锌超氧化物歧化酶活性中心铜与组氨酸的相互作用

本工作应用电子自旋共振(ESR)和核磁共振(NMR)等手段深入研究了铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)在水溶液中与组氨酸的相互作用。发现酶活性中心的Cu(Ⅱ)在水溶液中可以与外部物质进行交换相互作用,并不像固态那样稳定在络合位置上,Cu(Ⅱ)与组氨酸形成络合物并在活性中心与络合物间达成动态平衡。酶活性同时受到相应的影响。本文同时介绍了其它氨基酸与酶的作用情况。