离子对反相高效液相色谱法同时测定复合维生素片中4种水溶性维生素

采用离子对反相高效液相色谱法同时测定了复合维生素片中烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6等4种水溶性维生素的含量。样品经水溶解、过滤后,以Hypersil C18化学键合硅胶为固定相,以甲醇-0.5%(体积分数)醋酸水溶液(含2.5 mmol/L己磺酸钠,pH 2.8)(体积比为18∶82)为流动相,等度洗脱,紫外检测器于280 nm波长下检测。当烟酰胺、维生素B1、维生素B2和维生素B6的质量浓度分别在25450 mg/L,590 mg/L,2.590 mg/L,595 mg/L时,其峰面积与质量浓度的线性关系良好;日内测定平均相对标准偏差(n=7)分别为1.0%,2.2%,1.8%和1.3%;日间测定相对标准偏差(n=5)分别为1.5%,3.6%,2.4%和1.7%。该方法已成功应用于复合维生素片中4种水溶性维生素的同时测定。     

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸与生物光化学

生物光化学的核心内容是光合作用。在光合作用这个生物光化学的核心领域，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)始终起着极其重要的作用，NADPH就是一个传递电子和能量的最关键活性生物分子。本文对海洋里的光合作用、细菌与光合作用以及光合作用的模拟等作了介绍。     

新型溴化烷基取代吡啶类季铵盐的合成

以烟酰胺(1)为原料,分别与1-溴代辛烷(2a)和1-溴代癸烷经烷基化反应合成了两个新型的溴化烷基取代吡啶类季铵盐(3a和3b),其结构经1H NMR,13C NMR,IR和HR-MS(MALDI)表征。在最佳反应条件[乙醇为溶剂,1 10 mmol,n(2a)∶n(1)=1.2,于78℃反应4 h]下,3a收率69%。     

微量热法研究烟酰胺和异烟酰胺在KCl水溶液中的焓对自缔合作用

利用等温滴定微量热法(ITC)分别测定了298.15 K时烟酰胺(NA)和异烟酰胺(INA)在纯水及不同浓度KCl(m=0~0.3 mol/kg)水溶液中的稀释焓,根据McMillan-Mayer理论计算得到相应的焓对自缔合作用系数(h xx),发现两者的h xx都是很大的负值,且在较高KCl浓度时都随KCl浓度的增大而减小.从溶质-溶质、溶质-溶剂相互作用的观点出发,对这2种吡啶羧酸酰胺异构体的疏水和亲水作用平衡进行了讨论:NA和INA都是亲水-亲水作用占优势,芳香性的吡啶环与酰胺基团羰基的π电子共轭使得对位异构体的共振结构分子电荷分离而更具亲水性;吡啶环之间的π-π堆叠对焓对自缔合作用的贡献几乎可忽略;溶液离子强度(I)的增大有利于加强亲水-亲水作用,从而使h xx的绝对值都随溶液中KCl浓度的增大而逐渐增大.     

聚硅氧烷固载NADH模型物的设计合成及应用

设计合成了一类新型的高分子还原试剂聚硅氧烷固载烟酰胺辅酶(NADH)模型化合物4.该还原剂可以在温和条件下有效地还原活化烯烃,而且自身具有很好的循环再生性,是优良的绿色还原剂.     

Nonlinear spectral imaging microscopy of rabbit aortic wall

Employing nonlinear spectral imaging technique based on two-photon-excited fluorescence and second- harmonic generation （SHG） of biological tissue, we combine the image-guided spectral analysis method and multi-channel subsequent detection imaging to map and visualize the intrinsic species in a native rabbit aortic wall. A series of recorded nonlinear spectral images excited by a broad range of laser wavelengths （730- 910 nm） are used to identify five components in the native rabbit aortic wall, including nicotinamide adenine dinucleotide （NADH）, elastic fiber, flavin, porphyrin derivatives, and collagen. Integrating multichannel subsequent detection imaging technique, the high-resolution, high contrast images of collagen and elastic fiber in the aortic wall are obtained. Our results demonstrate that this method can yield complementary biochemical and morphological information about aortic tissues, which have the potential to determine the tissue pathology associated with mechanical properties of aortic wall and to evaluate the phaxmacodynamical studies of vessels.     

肌红蛋白作催化剂荧光分析法高灵敏检测NADH

基于肌红蛋白对NADH与H2O2之间的反应具有催化作用,提出了一种催化荧光光谱测定NADH的新方法.在实验选定的最佳反应条件下,该反应体系的荧光强度与NADH的浓度在1.6×10-7～2.0×10-5mol/L范围内呈良好的线性关系,检出限为4.1×10-8mol/L.对1.0×10-6mol/LNADH的标准样品作了9次重复测定,其相对标准偏差RSD=4.6%.     

荧光猝灭法研究NADH、Thio-NAD~＋与3α-HSD的相互作用

采用荧光猝灭法研究了两种辅酶,还原型烟酰胺嘌呤二核苷酸（NADH）、氧化型硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（Thio-NAD＋）与3α-羟类固醇脱氢酶（3α-HSD）的相互作用。研究结果表明,NADH和Thio-NAD＋的加入均能使3α-HSD的内源性荧光发生猝灭,其猝灭机制均属于生成复合物的静态猝灭;25℃下NADH、Thio-NAD＋与3α-HSD的结合常数分别为7.38×104、1.23×104L.mol-1;37℃下NADH、Thio-NAD＋与3α-HSD的结合常数分别为4.69×104、9.74×103L.mol-1;NADH与3α-HSD的结合作用力为氢键和范德华力,Thio-NAD＋与3α-HSD的结合作用力主要为静电引力和疏水作用力;NADH和Thio-NAD＋均能使3α-HSD构象发生变化,导致色氨酸残基所处环境极性增大。     

液相色谱-同位素稀释质谱法测定配方奶粉中的烟酰胺

对复杂基体中微量化合物的准确定量是分析化学的重要目标之一。常规的方法是选择与待测物性质相似的内标物,以抵消样品处理过程的待测物损失。由于待测物的同位素标记试剂与待测物具有最为接近的物理与化学性质,所以是最理想的内标物。该文以氘代烟酰胺为内标物,采用液相色谱-同位素稀释质谱法(LC-IDMS)测定了配方奶粉中烟酰胺的含量。测定结果的相对标准偏差为0.94%。方法的准确性高、特异性高、重复性好,可实现复杂基体中维生素含量的准确测定。参加国际比对实验CCQM-P78,结果与国际实验室的结果等效一致。     

Novel Stereoselective Carbonyl Reductase from Kluyveromyces marxianus for Chiral Alcohols Synthesis

A novel nicotinamide adenine dinucleotide phosphate（NADPH）-dependent carbonyl reductase from Kluyverornyces marxianus（KmCR） was identified, which can convert various prochiral ketone esters and ketone substrates to their corresponding chiral alcohols. KmCR was over-expressed in E. coli BL21（DE3）, purified to homogeneity, and characterized. The purified enzyme exhibits the highest activity at 40℃ and pH=6.0. Based on the gel filtration and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel eiectrophoresis（SDS-PAGE） analysis, the monomeric protein was determined to have a molecular weight of approximate 39000. Vmax and Km of KmCR are 4.28 μmol.min^-1·mg^-1 and 0.41 mmol/L for ketone ester substrate ethyl 2-oxo-4-phenylbutyrate（OPBE）, 3.09μmol.min^-1·mg^-1 and 1.21 mmol/L for cofactor NADPH, respectively. Cofactor recycle was achieved by co-expression of KmCR and glucose dehydrogenase（GDH） in E. coli. Recombinant E. coli harboring KmCR and GDH showed moderate asymmetric reduction activity towards various α- and β-ketoesters, diaryl ketone substrates. In an aqueous/butyl acetate biphasic system, the whole-cell biocatalyst was used to prepare ethyl （R）-2-hydroxy-4- phenylbutanoate[（R）-HPBE] in an e.e. of 99.5% with a space-time yield of 433.6 g.L-1.d-1 and a yield of 80.3% at 270 g/L OPBE.