Fast Determination of Clenbuterol and Salbutamol in Feed and Meat Products Based on Miniaturized Capillary Electrophoresis with Amperometric Detection

The fast separation capability of a novel miniaturized capillary electrophoresis with an amperometric detection (μCE‐AD) system was demonstrated by determining clenbuterol and salbutamol in real samples. The effects of several factors such as the acidity and concentration of the running buffer, the separation voltage, the applied potential and the injection time on CE‐AD were examined and optimized. Under the optimum conditions, the two β‐agonists could be baseline separated within 60 s at a separation voltage of 2 kV in a 90 mmol/L H₃BO₃‐Na₂B₄O₇ running buffer (pH 7.4), which was not interfered by ascorbic acid and uric acid. Highly linear response was obtained for above compounds over three orders of magnitude with detection limits ranging from 1.20×10^?7 to 6.50×10^?8 mol/L (S/N=3). This method was successfully used in the analysis of feed and meat products with relatively simple extraction procedures.     

猪肉中β-受体激动剂AlphaLISA检测方法的建立

建立了快速检测猪肉中克伦特罗、沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林4种β-受体激动剂的光激化学发光纳米均相时间分辨荧光免疫(Alpha LISA)分析方法。样品经乙酸铵和β-葡萄糖醛酸酶/硫酸酯酶酶解提取过柱,浓缩至干后,用缓冲溶液定容。样品与生物素化抗原、抗体、供体微珠和受体微珠进行酶联免疫,Alpha LISA进行检测,基质标准曲线定量。结果表明:沙丁胺醇、克伦特罗、溴布特罗和特布他林在0.1~500ng/m L范围内呈良好线性,相关系数均大于0.98,沙丁胺醇与克伦特罗、溴布特罗和特布他林的交叉反应率分别为143.3%,179.2%和95.6%,检出限为0.03~0.08 ng/m L。在0.5,10,20μg/kg 3个添加水平下,4种化合物的平均回收率为82.5%~115.9%,相对标准偏差(RSD)均小于12.0%。该方法操作简单,快速准确,适用于猪肉中β-受体激动剂的筛选与检测。     

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中9种β_2-受体激动剂残留量

采用固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定了动物源食品中9种β2-受体激动剂的残留量。样品经与乙酸铵缓冲溶液(pH 5.2)匀浆后,加入β-葡萄糖醛酸甙酶及芳基硫酸酯酶混合溶液进行水解。将水解液离心,取上清液,通过PCX固相萃取柱净化。用氨水-甲醇(5+95)混合液淋洗萃取柱,洗脱液经吹氮蒸干,残留溶于流动相(B)中,所得溶液进行色谱分离。以Waters Atlantis dC18色谱柱为固定相,以不同体积比混合的乙腈(A)和含0.1%(体积分数)甲酸的5mmol·L-1乙酸铵溶液(B)为流动相梯度洗脱,采用电喷雾正离子源模式检测。9种化合物的线性范围均在10.0μg·L-1以内,测定下限(10S/N)均为0.5μg·kg-1。在3个浓度水平上对方法进行回收试验,测得回收率在70.2%~120%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)在3.8%~19%之间。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定猪肉中β-受体激动剂、喹诺酮类和磺胺类兽药残留量

建立了同时测定猪肉中β-受体激动剂、喹诺酮和磺胺类共32种兽药残留的超高效液相色谱串联质谱分析方法.猪肉在酸化条件下用乙腈提取,经正己烷除油,采用多反应监测模式进行测定,外标法定量.加标水平为4、8、20 μg/kg时,回收率均在67.0%～117.0%之间,相对偏差不大于12%,线性回归相关系数大于0.99.检测限为0.1～1 μg/kg.本法适合大批量样品的快速分析.     

超高效液相色谱-串联质谱法检测动物源性食品中残留的9种β-受体激动剂

建立了动物源性食品中特布他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克仑特罗、妥布特罗和喷布特罗等9种β-受体激动剂残留检测的超高效液相色谱-串联质谱方法。样品经酶解后,用高氯酸去除蛋白质等杂质,调节上清液的pH值后,分别用乙酸乙酯和叔丁基甲醚进行萃取,再用MCX固相萃取柱净化,然后用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)分离,以0.1%甲酸乙腈溶液和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,外标法定量。结果表明:9种β-受体激动剂在0.25～5 μg/kg的空白添加浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.990;特布他林等8种药物的检出限为0.1 μg/kg,定量限为0.25 μg/kg;喷布特罗的检出限为0.25 μg/kg,定量限为0.5 μg/kg。从0.5,1和2 μg/kg共3个添加浓度的检测结果可以看出,9种药物的平均回收率为87.1%～108.6%,批内、批间相对标准偏差(RSD)均小于20%。该方法具有简便快捷、灵敏度高、定性准确等特点。     

硫酸沙丁胺醇的流动注射化学发光法测定

基于硫酸沙丁胺醇对N—溴代丁二酰亚胺—荧光素化学发光体系的强烈抑制作用，建立了硫酸沙丁胺醇的化学发光抑制分析法，详细研究了影响化学发光强度的因素，并探讨了抑制化学发光可能的机理；化学发光信号的降低值ΔI与硫酸沙丁胺醇的质量浓度在0．08—10mg／L范围内呈线性关系，方法的检出限(3σ)为0．026mg/L，对0．3mg/l的硫酸沙丁胺醇进行了11次平行测定，相对标准偏差为3．0％；将该法用于硫酸舒喘灵片中硫酸沙丁胺醇的定量分析，结果令人满意。     

鱼粉中氯霉素和克仑特罗、沙丁胺醇标准物质研制和定值

建立了鱼粉中氯霉素和β-受体激动剂(克仑特罗、沙丁胺醇)兽药残留标准物质的研制与定值方法.通过对药物在河鲫鱼(Carassius auratus)体内的代谢研究,对含有药物残留的肌肉组织进行匀浆、冷冻干燥和均匀化后加工处理,按照最小取样量进行真空包装后共得400袋.随机取其中100袋分为10组,每组随机取1袋做组间均匀性检验,随机取1组做组内均匀性检验.分析测试结果经过F检验和t检验,在95%置信区间内.经过1年时间,在-18、4和25 ℃ 3种保存条件下稳定性检验,测试结果表明标准物质特征值变化在不确定度范围内.制备的鱼粉标准物质采用同位素稀释液相色谱-串联质谱法,与国内8个具有一定分析资质的实验室进行协同定值.定值后的样品中氯霉素、克伦特罗和沙丁胺醇浓度的特征值分别为11.8、9.9和12.8 μg/kg,相对不确定度分别为26.3%、9.1%和18.0%.本研究对进一步完善药物残留标准物质的制备具有参考价值.     

酶解及有机溶剂提取对绵羊血浆和尿样中两种β2-受体激动剂含量测定的影响

采用酶解与有机溶剂提取对绵羊血浆和尿液进行前处理,超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定两种样品中莱克多巴胺和沙丁胺醇含量,考察了酶解、有机溶剂提取对两种β2-受体激动剂含量测定的影响。结果表明,绵羊血浆中莱克多巴胺轭合率大于95%,沙丁胺醇轭合率约为40%,添加β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶进行酶解可有效解离血浆中轭合的莱克多巴胺和沙丁胺醇,测得的含量显著提高;不经酶解处理血浆中莱克多巴胺、沙丁胺醇检测结果的相对偏差均大于40%,重复性差;绵羊尿液中莱克多巴胺轭合率约为57%,沙丁胺醇轭合率低于1%,酶解后尿液中莱克多巴胺检测结果显著提高,对于沙丁胺醇含量测定无显著影响;血浆样品基质复杂程度低于尿液样品,血浆样品目标化合物的基质抑制效应小于尿液样品;有机溶剂提取对血浆和尿液中莱克多巴胺和沙丁胺醇含量检测结果影响不显著,提取过程存在目标化合物损失的可能性,通过内标校正,可消除提取损失对检测结果的影响。     

反-4-羟甲基哌啶-3-醇的合成

以4-羟甲基吡啶为原料,经苄基保护、硼氢化钠的还原、硼氢化氧化和脱苄基保护等四步反应得到新型5-羟色胺受体激动剂的关键中间体反-4-羟甲基哌啶-3-醇。总收率达55. 7%。产物结构经IR、1H NMR和MS分析确证,并对合成工艺进行了优化。     

含（1—芳乙酰胺基—2—叔胺基）乙烷结构的六氢—1H—1，4—二氮Zhuo类新化合物的合成（Ⅰ）

合成了N,N′－二苄基－2－甲氧羰基－六氢－1H－1,4－二氮Zhuo（3）。3经还原、氯取代、胺取代、胺脱苄、单酰化及酰化反应后得到了10个带有（1－久乙酰胺基－2－叔氨基）乙烷结构的六氢－1H－1,4－二氮Zhuo类目标化合物（9a-9i和10）。